高考生物一轮复习 限时强化练 周末必刷22

周末必刷22(时间：30分钟分值：45分)1.(2025·广东卷，7)Solexa测序是一种将PCR与荧光检测相结合的高通量测序技术。为了确保该PCR过程中，DNA聚合酶催化一个脱氧核苷酸单位完成聚合反应后，DNA链不继续延伸，应保护底物中脱氧核糖结构上的(

) A.1′－碱基 B.2′－氢

C.3′－羟基 D.5′－磷酸基团

解析

DNA聚合酶能催化脱氧核苷酸加入核苷酸链的3′—OH末端，因而复制之初需要以一段DNA引物的3′—OH端为起点，合成5′→3′方向的新链。为了确保该PCR过程中DNA聚合酶催化一个脱氧核苷酸单位完成聚合反应后，DNA链不继续延伸，应保护底物中脱氧核糖结构上的3′－羟基，使其无法参与反应，C符合题意。C2.(2025·福建卷，6)下列高中生物学实验的部分操作，正确的是(

)C选项实验名称实验操作A探究抗生素对细菌的选择作用涂菌前，需将抗生素均匀涂抹在培养基平板上B制作果酒和果醋当葡萄酒制作完成后，需拧紧瓶盖，促进葡萄醋的发酵C土壤中分解尿素的细菌的分离与计数稀释土壤样品时，每个梯度稀释时都需更换移液器枪头DDNA片段的扩增及电泳鉴定接通电源后，看到DNA条带迁移至凝胶边缘时，停止电泳解析抗生素不能涂抹在培养基平板上，而是将含有少量细菌的培养液均匀涂抹在培养基平板上，将培养皿分成4个区域，在3个区域放含有抗生素的纸片，在另外一个区域放不含抗生素的纸片，A错误；制作果醋需在有氧条件下进行，拧紧瓶盖会抑制醋酸菌(需氧型)的发酵，B错误；稀释涂布平板法中，更换枪头可避免不同浓度菌液交叉污染，确保稀释梯度准确，C正确；DNA电泳应通过指示剂(如溴酚蓝)判断停止时间，若DNA迁移至凝胶边缘时停止电泳，则DNA片段可能已流失，D错误。3.(2023·广东卷，11)“DNA粗提取与鉴定”实验的基本过程是：裂解→分离→沉淀→鉴定。下列叙述错误的是(

)A.裂解：使细胞破裂释放出DNA等物质B.分离：可去除混合物中的多糖、蛋白质等C.沉淀：可反复多次以提高DNA的纯度D.鉴定：加入二苯胺试剂后即呈现蓝色D解析裂解是加蒸馏水让细胞吸水涨破，释放出DNA等物质，A正确；DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，能溶于2mol/L的NaCl溶液，将溶液过滤，即可将混合物中的多糖、蛋白质等与DNA分离，B正确；DNA不溶于酒精，而某些蛋白质溶于酒精，可以反复多次用酒精沉淀出DNA，提高DNA纯度，C正确；将DNA溶解于NaCl，加入二苯胺试剂，沸水浴五分钟，待冷却后，能呈现蓝色，D错误。4.(2025·广西卷，21)CAR－T是指通过基因工程技术表达CAR基因的T细胞。CAR－T能更好地识别肿瘤细胞表面特定抗原，在肿瘤治疗中疗效显著。构建CAR－T过程见图，回答下列问题：(1)构建含CAR基因的重组质粒,选用的限制酶组合是

。(2)将连接产物导入Ca2＋处理后的大肠杆菌，使用添加氨苄青霉素的固体培养基培养。使用固体培养基的原因是______________________________________________________________。(3)将获得的重组质粒导入T细胞并成功表达后，为了研究CAR－T识别肿瘤细胞的特异性及抗肿瘤效果，除了有CAR－T与肿瘤细胞共同培养的实验组，还需设置的对照组有______________________________________________________________________________________________，肿瘤细胞凋亡率的检测指标有________________________________________(至少写出2点)。EcoRⅠ、Not

Ⅰ

便于含有质粒的大肠杆菌形成单菌落，方便后续筛选出重组质粒

肿瘤细胞单独培养、不含CAR基因的T细胞(正常T细胞)与肿瘤细胞共同培养肿瘤细胞死亡数和存活数等(4)研究发现，肿瘤细胞高表达的PD－L1与CAR－T表达的PD－1结合会启动免疫抑制。为了阻断免疫抑制，可采取的策略有抑制PD－1与PD－L1的结合以及

。同时，肿瘤周围组织过于致密会使CAR－T难以接触肿瘤细胞，也会影响疗效。可通过设计减弱原有PD－1启动的抑制通路和降解肿瘤胞外基质的途径解决上述两个问题。已知溶解酶可以降解细胞外基质，多种酶同时作用可提高降解效率；与PD－1连接的生物开关，在该PD－1与PD－L1结合后会被打开，释放P因子激活P启动子。依据上述特性构建新的重组质粒并使其在T细胞中表达。该新的重组质粒部分结构见图，其中①是

，②是

，③是

，④是

。使用PD－1抗体或PD－L1抗体抑制PD－1基因表达的基因序列终止子溶解酶基因序列多种酶基因序列(溶解酶基因序列与多种酶基因序列位置可颠倒)解析

(1)构建含CAR基因的重组质粒，为了避免质粒和目的基因自连、目的基因反向插入，常采用双酶切法；目的基因CAR基因需要插入质粒的启动子和终止子之间，而限制酶Cla

Ⅰ位于启动子和终止子区域之外，质粒上不存在HindⅢ酶切位点，且CAR基因片段中间含有BamHⅠ识别序列，使用Mlu

Ⅰ切割质粒会使质粒丢失终止子，故应该选用EcoRⅠ和Not

Ⅰ分别切割CAR基因和质粒。(2)在固体培养基上，人们可以清楚地观察到在培养基表面由单个细胞生长繁殖成的菌落，质粒上含有氨苄青霉素抗性(AmpR)基因，将连接产物导入Ca2＋处理后的大肠杆菌，使用添加氨苄青霉素的固体培养基培养的目的是便于含有质粒的大肠杆菌形成单菌落，方便后续筛选出重组质粒。(3)研究目的是探究CAR－T识别肿瘤细胞的特异性及抗肿瘤效果，自变量为是否含有携带CAR基因的T细胞，而因变量为抗肿瘤效果，即肿瘤细胞凋亡率，检测指标为肿瘤细胞死亡数和存活数等；实验组为CAR－T与肿瘤细胞共同培养，对照组为肿瘤细胞单独培养、不含CAR基因的T细胞(正常T细胞)与肿瘤细胞共同培养。(4)肿瘤细胞高表达的PD－L1与CAR－T表达的PD－1结合会启动免疫抑制，为了阻断免疫抑制，可采取的策略有抑制PD－1与PD－L1的结合，使用PD－1抗体、PD－L1抗体分别与PD－1、PD－L1的结合；根据题干信息：与PD－1连接的生物开关，在该PD－1与PD－L1结合后会被打开，释放P因子激活P启动子，需要减弱原有PD－1启动的抑制通路，可知新的重组质粒中①是抑制PD－1基因表达的基因序列；溶解酶可以降解细胞外基质，多种酶同时作用可提高降解效率，且P启动子是双向启动子，可知②是终止子，③是溶解酶基因序列，④是多种酶基因序列(溶解酶基因序列与多种酶基因序列位置可颠倒)。5.(2026·广东湛江调研)为更有效地处理含重金属的废水，研究人员将植物的金属结合蛋白基因导入大肠杆菌构建工程菌。由于PCR扩增出的目的基因末端为平末端，且无合适的限制酶识别序列，需借助中间载体P将目的基因接入载体E。下图为两种载体的结构和相关限制酶的识别序列及切割位点。下列叙述正确的是(

)CA.不直接选择P构建基因表达载体是因为它不含起始密码子和终止密码子B.将目的基因插入载体P时，应选择Sma

Ⅰ进行酶切，再用DNA连接酶连接C.构建基因表达载体时，应选择Xho

Ⅰ和Pst

Ⅰ酶切载体E和含目的基因的载体PD.基因表达载体构建完成后，需利用农杆菌转化法导入受体细胞解析起始密码子和终止密码子位于mRNA上，不直接选择P构建基因表达载体是因为它不含启动子和终止子，A错误；据图可知，载体P和载体E都含有Xho

Ⅰ和Pst

Ⅰ酶切位点，构建基因表达载体时，应选择Xho

Ⅰ和Pst

Ⅰ酶切载体E和含目的基因的载体P，因此将目的基因插入载体P时，应选择在这两个酶切位点之间插入目的基因，又由于目的基因末端为平末端，所以用EcoRⅤ进行酶切，再用DNA连接酶连接，B错误，C正确；由于受体细胞是大肠杆菌，因此基因表达载体构建完成后，需用Ca2＋处理大肠杆菌，使细胞处于感受态，才能吸收周围环境中的DNA，而农杆菌转化法适用于将目的基因导入植物细胞，D错误。6.(2026·江苏盐城调研)草甘膦是一种常用的除草剂，但大豆等农作物对其敏感性高，制约了草甘膦的使用。开发具有草甘膦抗性的转基因大豆，并配合使用草甘膦，可实现杂草的有效管理。回答下列问题。(1)构建重组质粒时，需利用引物1、2扩增获得草甘膦抗性基因，再用相同的限制酶切割该目的基因和质粒，据图分析，引物2上应含有

限制酶的识别序列。(2)通过

技术检测，可以确定某植株染色体DNA上已插入草甘膦抗性基因，但并不能确定此植株具备抗草甘膦特性，理由是__________________________________________________________________________________。Kpn

ⅠPCR(合理即可)

若转入的草甘膦抗性基因不表达或者表达量少，转基因植株不会具备抗草甘膦特性(3)若想进一步提升转基因大豆对草甘膦的抗性，在分子水平上可采取的思路有

(多选)。A.增加转入的外源草甘膦抗性基因的数量B.使用能高效驱动转录的启动子C.同时转入与草甘膦降解有关的基因D.通过改造草甘膦抗性基因获得抗性更强的大豆ABCD(4)若草甘膦施用不当，会影响转基因大豆的产量和品质，因此对转基因大豆使用草甘膦时应注意施用时间、_____________________________________________________________等因素(答出2点即可)。

草甘膦浓度、施用部位、气候条件、大豆植株的生理状态解析

(1)分析题图，目的基因应插入启动子和终止子之间，α链为转录的模板链，故引物2上应含有Kpn

Ⅰ限制酶的识别序列。(3)增加转入的外源草甘膦抗性基因的数量、使用能高效驱动转录的启动子，能增加草甘膦抗性基因的表达量，A、B符合题意；同时转入与草甘膦降解有关的基因，能够培育低草甘膦残留且抗草甘膦的转基因作物，C符合题意；通过改造草甘膦抗性基因获得抗性更强的大豆，能够获得高抗草甘膦转基因作物，D符合题意。(4)对转基因大豆使用草甘膦时应注意施用时间、草甘膦浓度、施用部位、气候条件、大豆植株的生理状态等因素，以防影响转基因大豆的产量和品质。7.(2026·甘肃兰州诊断)生长激素可用于治疗垂体性侏儒症，但人体内生长激素含量微少，提取困难。如图是利用大肠杆菌通过基因工程生产人生长激素的过程。请回答问题：(1)图1中过程②是

，过程③可以利用

技术大量扩增目的基因。(2)图1中过程④在基因工程的操作步骤中表示

，B是

。逆转录PCR构建基因表达载体载体(或质粒)(3)由图3可知，扩增目的基因时需要选择的一对引物是

。为了防止目的基因反向连接，可在目的基因两端添加不同的限制酶识别序列，分析图2和图3可知，在目的基因的上游应添加

(填图2中限制酶名称)的识别序列。2和3Alu

Ⅰ(4)科学家还尝试构建了膀胱生物反应器来生产人生长激素。与乳腺生物反应器相比，利用膀胱生物反应器生产人生长激素的优点是