CN119451981A 针对eb病毒诱导免疫应答的组合物和方法 （诺瓦瓦克斯股份有限公司）

2024.10.31PCT/US2023/0651582023.03.30WO2023/192949EN2023.10.05本文提供了包含EB病毒包膜蛋白(例如糖蛋白350(gp350))和皂苷佐剂的组合物，以及使用23.根据权利要求1_2中任一项所述的融合蛋白，其中所述铁蛋白或其片段包含与具有SEQIDNO:16_20和25_38中任一个的氨基酸序列的多肽具有至少80％、至少85％、至少4.根据权利要求1_3中任一项所述的融合蛋白，其中所述铁蛋白或其片段的N_末端包5.根据权利要求4所述的融合蛋白，其中所述肽包含ESQVRQNF(SEQIDNO:40)、6.根据权利要求1_4中任一项所述的融合蛋白，其中所述7.根据权利要求1_6中任一项所述的融合蛋白，其9.根据权利要求8所述的融合蛋白，其中所述gp350或其片段包含与具有SEQIDNOS:膜蛋白或其片段的氨基酸按照SEQIDNO:11.根据权利要求1_9中任一项所述的融合蛋白，其中所述EBV包膜蛋白或其片段包含(i)所述EBV包膜蛋白或其片段包含与SEQIDNO:2具有至少80％、至少85％、至少(i)所述EBV包膜蛋白或其片段包含与SEQIDNO:39具有至少80％、至少85％、至少3(i)所述EBV包膜蛋白或其片段包含与SEQIDNO:44具有至少80％、至少85％、至少(i)所述EBV包膜蛋白或其片段包含与SEQIDNO:1具有至少80％、至少85％、至少26.根据权利要求25所述的纳米颗粒，其中所述非离子型去垢剂是聚山梨酯_20(PS20)、聚山梨酯_40(PS40)、聚山梨酯_60(PS60)、聚山梨酯_65(PS65)或聚山梨酯_8027.根据权利要求24_26中任一项所述的纳米颗粒，其中所述EBV包膜蛋白或其片段包28.根据权利要求27所述的纳米颗粒，其中所述跨膜结构域具有的氨基酸序列与SEQ429.根据权利要求27或28所述的纳米颗粒，其中所述EBV包膜蛋白或其片段包含与SEQ氨基酸序列。30.免疫原性组合物，包含权利要求1_19中任一项所述的融合蛋白和药学上可接受的31.免疫原性组合物，包含权利要求23_2933.根据权利要求32所述的免疫原性组合物，其中所述佐剂包含至少两种iscom颗粒，第一种iscom颗粒包含皂皮树(QuillajaSaponariaMolina)的级分A，而不是皂皮树34.根据权利要求33所述的免疫原性组合物，其35.根据权利要求33所述的免疫原性组合物，其40.在受试者中针对EB病毒刺激免疫应答的方法，所述方法包括施43.根据权利要求42所述的方法，所述方法包括在所述第一剂量的免疫原性组合物后44.根据权利要求42或43所述的方法，所述方法包括在所述第一剂量的免疫原性组合45.根据权利要求42或43所述的方法，所述方法包括在所述第二剂量的免疫原性组合547.包含权利要求30_39中任一项所述的免疫原性6[0002]本申请要求2022年3月30日提交的第63/325,316号美国申请的优先权。该申请的[0005]本公开大体上涉及包含EB病毒(Epstein_BarrVirus,EBV)包膜蛋白或其片段和性单核细胞增多症。13％的诊断为传染性单核细胞增多症的患者在确诊六个月后仍然疲[0007]EB病毒也与全球每年约200,000例癌症病例和140,000例癌症死亡有关。具体来[0010]本公开提供了包含(i)EB病毒(EBV)包膜蛋白或其片段和(ii)铁蛋白或其片段的[0011]本文提供了包含(i)EB病毒(EBV)包膜蛋白或其片段和(ii)铁蛋白或其片段的融合蛋白。在实施方案中，铁蛋白或其片段是斗牛犬(bulldog)铁蛋白、幽门螺杆菌案中，铁蛋白或其片段包含与具有氨基酸序列SEQIDNOS:16_20和25_38中任一个的多肽蛋白或其片段的N末端包含具有约6至约14个额外氨基酸的肽。在实施方案中，该肽包含ESQVRQNF(SEQIDNO:40)、ESQVRQQF(SEQIDNO:41)、SGESQVRQQF(SEQIDNO:42)和72122、39和44中任一个的氨基酸序列的多肽具有至少80％、至少85％、至少90％、至少氨基酸按照SEQIDNO:1编号。在实施方案中，EBV包膜蛋白或其片段包含与具有SEQID[0012]本文提供了编码本文所述融合蛋白的核酸。本文提供了包含本文所述核酸的载EBV包膜蛋白或其片段包含跨膜结构域。在实施方案中，跨膜结构域具有的氨基酸序列与8皂皮树的级分A和皂皮树的级分C分别占佐剂中皂皮树的级分A和皂皮树的级分C重量总和方案中，该方法包括在第一剂量的免疫原性组合物后30天施用第二剂量的免疫原性组合9望结果，例如临床结果的方法。就本公开的目的而言，有益的或期望结果可以包括抑制(inhibit)或抑制(suppress)感染或疾(enzyme_linkedimmunosorbentassay,ELISA)或微中和测定来测量中和分泌抗体和/或如，保护受试者免受病原体感染和/或降低由病原体感染引起的疾病或疾病状况严重性的文献的全部内容均通过引用并入本文：美国专利号10,744,199和Kanekiyoet[0036]在实施方案中，融合蛋白包含EBV包膜蛋白。在实施方案中，EBV包膜蛋白选自含全长gp350蛋白。来自EB病毒毒株B95_8(UNIPROTID:P03200)的示例性全长gp350蛋白具的片段：gp350结构域1、EBVgp350结构域2和EBVgp350结构域3、EBV受体结合结构域[0041]在实施方案中，EBV包膜蛋白或其片段包含下述突变中的一个或多个：W162N、包含与具有SEQIDNOS:16_20和25_38中任一个的氨基酸序列的蛋白具有至少80％、至少[0053]表B提供了示例性铁蛋白。在实施方案中，铁蛋白的UniProtID为P07797或[0063]通常在宿主细胞中通过重组表达产生纳米颗粒所含的融合蛋白或EBV包膜蛋白或昆虫细胞表达系统中可以获得高水平表达。昆虫细胞的非限制性实例是草地贪夜蛾[0064]可以利用典型的转染和细胞生长方法来培养细胞。可以施方案中，生物反应器是预灭菌塑料袋(例如cellbag&,WaveBiotech,Bridgewater,[0066]宿主细胞生长后，可以使用去垢剂和纯化方案从宿主细胞中收获融合蛋白或EBV去垢剂的溶液以溶解细胞膜，从而将蛋白质释放于去垢剂提取物中。TritonX一100和[0067]在其他方面，可以使用不同的第一去垢剂从宿主细胞中分离融合蛋白或EBV包膜乙二醇双[咪唑基羰基])、BRIJ®聚乙二醇十二烷基醚35、BRIJ@聚乙二醇(3)十六烷基醚56、BRIJ@醇聚氧乙烯醚72、BRIJe聚氧2硬脂醇醚76、BRIJ@聚乙二醇单油醚92V、BRIJ@聚氧乙烯(10)油醚97、BRIJ@聚乙二醇十六烷基醚58P、CREMOPHOR@EL聚乙二醇甘油蓖麻醇酸酯(Macrogolglycerolricinoleate)、十乙二醇单十二烷基醚SPAN@40单棕榈酸山梨醇酯、硬脂酸山梨醇酯、SPAN@65三硬脂酸山梨TERGITOL@仲醇聚氧乙烯醚、15_S_30型TERGITOL®仲醇聚氧乙烯醚、15_S_5型TERGITOL@仲醇聚氧乙烯醚、15_S_7型TERGITOL@仲醇聚氧乙烯醚、15_S_9型TERGITOL@仲醇聚氧乙烯醚、NP_10型TERGITOL@壬基酚聚氧乙烯醚、NP_4型壬基酚聚氧乙烯醚、NP_40型TERGITOL@壬基酚聚氧乙烯醚、NP_7型TERGITOL@壬基酚聚氧乙烯醚、NP_9型TERGITOL@壬基酚聚氧乙烯醚、TMN_10型TERGITOL@分支仲醇第三柱可以是阳离子交换柱，例如FRACTOGEL@EMD甲基丙烯酸酯基聚合珠SO3(EMDMillipore)树脂。在其他方面，阳离子交换柱可以是MMC柱或NuviaCPrime柱(Bio_Rad[0070]为了形成纳米颗粒，用于从宿主细胞中提取融合蛋白或EBV包膜蛋白或其片段的其与碳水化合物残基进行特异性和可逆性的相互作用。例如，请参阅SharonandLis,“Legumelectins__alargefamilyofhomologousproteins,”FASEBJ.1990Nov；4换柱。凝集素柱可商购获得；例如，CaptoLentilLectin(Capto小扁豆凝集素)可从GE在实施方案中，包含氯化钠的透析溶液包含约470mM、约480mM、约490mM或约500mMNaCl。在实施方案中，包含PS80的透析溶液包含约级分的层析条件使得不同批次之间在洗脱特性和生物活性方面的重[0092]皂苷级分可以整合到ISCOM基质复合物或ISCOM复合物中，或也整合到ISCOM或含有任何重量百分比的级分A和任何重量百分比的另一种皂苷级分，例如粗皂苷级分或级质复合物和ISCOM复合物佐剂的实例公开于美国公开申请号2013/0129770中，通过引用将[0095]在实施方案中，ISCOM基质或ISCOM复合物按重量计包含40[0098]在具体方面，一种类型的皂苷级分或粗皂苷级分可以掺入到一种ISCOM基质复合物或颗粒中，并且另一种类型的基本上纯的皂苷级分或粗皂苷级分可以掺入到另一种型的复合物或颗粒都具有掺入到物理上不同的颗粒中的一种类型中一种皂苷级分皂皮树和另一种皂苷级分皂皮树分别掺入到不同的ISCOM基质复合物颗粒的组合存在于组合物中。在具体方面，组合物按重量计可以含有0.1％至99.9％、5％至第二ISCOM基质或ISCOM复合物颗粒中唯一的中按总皂苷佐剂的重量计，级分AISCOM基质占约70按总皂苷佐剂的重量计，级分C70％至约85存在的级分CISCOM基质为和的50_96级分CISCOM基质占剩余部分。在特别优选的组合物(在本文中称为MATRIX_[0103]示例性QS_7和QS_21的"ACompendiumofVaccineAdjuvantsan包括完全弗氏佐剂(非特异性免疫应答刺激剂，含有片层(paucilamellar)脂质囊泡；例如NOVASOMES®。NOVASOMES@是约100nm至约500mM。在实施方案中，氯化钠以高浓度存在，包括但不限于约200mM、约250mM、约[0108]本文提供了在有需要的受试者中针对EBV诱导免疫应答的方法，包括施用包含本合蛋白包含与SEQIDNOS:16_20和25_38中任一个至少80％、至少85％、至少90％、至少佐剂)的免疫原性组合物的共配制(即预装式注[0119]在一些情况下，无菌制造含有期望液体的无菌安瓿的能力可以使BFS制造的安瓿以预装式注射器的形式制备免疫原性组合物时，在施用前合并本文所述的融合蛋白和佐分C分别占佐剂中皂皮树的级分A和皂皮树的级分C重量总和的约85％和约15％。在实施方[0124]目的：目前正在18_29岁成人中评估包含融合蛋白和皂苷佐剂的免疫原性组合物