CN119470883A 一种化学发光免疫分析法及检测物信号放大次数筛选方法 （基蛋生物科技股份有限公司）

一种化学发光免疫分析法及检测物信号放本发明公开了一种化学发光免疫分析法及结合待测物质的第一亲和配体偶联至固相载体将特异性结合待测物质的第二亲和配体偶联至光信号进行循环放大，直至满足检测灵敏度要2将特异性结合待测物质的第一亲和配体偶联至对满足检测灵敏度要求的发光信号进行检测得到待测物质4.根据权利要求3所述的一种化学发光免疫分析法，其特征在于，所行发光信号的循环放大之前均需对其进行清洗分通过权利要求1_9任意一项所述的化学发光免疫分析法对最低浓度的检测物的信号进3面发挥着重要作用，而且在促进疾病的早期诊断和促进卫生保健方面也发挥着重要作用。45[0033]图3(A)为采用不同循环放大次数的信号值；(B)为采用不同循环放大次数的信噪6[0047]发光标记物包括发光信号物标记的Poly_SA；生物素标记物包括生物素或其衍生物标记的Poly_Lys；本发明选取的Poly_SA和Poly_Lys是具有亲水特性和生物相容性的多[0055]本发明首先将第一复合物、第二复合物与待测物反应形信号物的Poly_SA结合，经过清洗后，再利用Poly_SA上的剩余位点与生物素标记的Poly_Lys结合，此时Poly_Lys上剩余的生物素位点可再次与新投入Poly_SA发光物结合(第一次信号放大)。经过清洗可再次投入Poly_SA发光物和生物素标记的Poly_Lys(无限次循环放7[0060]全自动化学发光仪MAGICL6000(基蛋生物科技股份有限公司)，加热磁力搅拌器、生物科技股份有限公司提供；Poly_SA、Poly_Lys、吖啶酯、生物素、PBS缓冲液(KH2PO4磁珠溶液备用。缓冲液体积为使反应体系总体积为300μL需要补足的量)，在上述反应管中加入封闭液混8清洗站用清洗液清洗免疫复合物，随后加入50μL吖啶酯[0073]2)将50μLPoly_Lys生物素标记物(0.774μg/mL)和50μLPoly_SA吖啶酯标记物加[0075]4)然后加入激发液，通过化学发光检测仪测定不同浓度cTnI标准品产生的发光pp2SD(偏倚Bias＝每个样本测试均值_9[0084](1)空白限的建立采用的是经典法，经典法已经广泛应用于许多化学和免疫化学[0089](2)检出限的建立依赖于对低浓度水平的测试以及已建立的空白限。实验设计采[0092]接下来对试剂检测的低水平样品结果进行分析，如上表2所示的计算表给出了每[0094]表3展示了不同信号放大次数的TE计算值。通过计算每个低水平样品的相对偏差号物标记的多聚链霉亲和素(Poly_SA)和生物素标记的多聚赖氨酸(Poly_Lys)进行结合反吸附，维持非常低的背景值。同时多聚物提供了非常庞大的链霉亲和素_生物素(SA_和生物素标记的Poly_Lys形成了多层的SA_Biotin分子层而实现的。这种循环标记反应可与生物素标记的Poly_Lys结合，此时poly_Lys上剩余的生物素位点可再次与新投入Poly_SA发光物结合(第一次信号放大)。经过清洗可再次投入Poly_SA发光物和生物素标记的物素(SA_Biotin)系统在免疫复合物上一层一层叠加发光信号物标记的Poly_SA