2026综合类-病理学技术(主管技师)-电子显微镜技术及超薄切片历年真题摘选带答案详解

2026综合类-病理学技术(主管技师)-电子显微镜技术及超薄切片历年真题摘选带答案详解一、选择题从给出的选项中选择正确答案（共100题）1、IPTV业务是通过什么网络传输电视节目的？A.电话网B.互联网协议网络C.广播电视网D.专网2、话务员在通话结束前应该做什么？A.直接挂断B.确认客户没有其他问题后礼貌告别C.快速结束通话D.不告知客户处理方式3、以下哪个号码是中国移动的客户服务hotline？A.10000B.10086C.10010D.123454、在电话服务中，"首问负责制"的含义是？A.第一个接听的话务员负责跟进直至问题解决B.只回答一次问题C.由班长统一接听D.客户必须找第一个接听者5、超薄切片技术制备电镜样品的步骤顺序正确的是？A.固定→切片→脱水→包埋→染色B.固定→脱水→包埋→切片→染色C.切片→固定→脱水→包埋→染色D.固定→包埋→脱水→切片→染色6、透射电镜的分辨率约为多少纳米？A.0.1nmB.0.5nmC.2nmD.10nm7、超薄切片常用的切刀类型不包括以下哪种？A.玻璃刀B.金刚石刀C.钻石刀D.铁刀8、电镜样品制备中，超薄切片的厚度一般控制在什么范围？A.0.5～1μmB.1～5μmC.50～90nmD.200～500nm9、电镜标本制备中，常用于固定细胞结构的初级固定剂是？A.甲醛B.戊二醛C.酒精D.乙酸10、透射电镜样品制备中，常用的包埋剂是？A.石蜡B.明胶C.环氧树脂D.火棉胶11、超薄切片染色中最常用的两种染剂组合是？A.苏木精-伊红B.醋酸铀-柠檬酸铅C.结晶紫-番红D.银染-镀银12、透射电镜主要由哪部分构成核心成像系统？A.光学透镜组B.电磁透镜系统C.X射线管D.激光扫描系统13、电镜样品脱水最常用的脱水剂是？A.蒸馏水B.二甲苯C.丙酮或乙醇D.氯仿14、扫描电镜主要用于观察？A.细胞内部的超微结构B.组织的H-E染色形态C.标本表面的三维形貌D.细胞的免疫荧光定位15、醋酸铀在电镜染色中的作用机制主要是？A.与脂质结合显示脂肪结构B.与核酸和膜结构结合增强反差C.作为导电涂层D.溶解包埋剂16、透射电镜的分辨率远高于光学显微镜的主要原因是？A.使用了更强的光源B.电子波长比可见光波长短C.透镜直径更大D.真空环境消除了干扰17、超薄切片制备中，关于切片机的工作条件，以下描述正确的是？A.切片在高温环境下进行以提高切片质量B.切片通常在室温条件下进行C.切片需在液氮冷冻状态下进行D.切片需在高压气体环境中进行18、透射电镜观察细胞结构时，以下哪种结构最适合用其观察？A.组织的整体架构和细胞分布B.细胞膜、线粒体、内质网等亚细胞结构C.细胞表面的纤毛和微绒毛形态D.细胞的代谢活性19、电镜技术中，锇酸（四氧化锇）作为固定剂的主要作用是？A.脱水作用B.二次固定并增强膜结构反差C.脱水后透明作用D.染色增强作用20、超薄切片制成后，捞制在载网上前通常需要进行什么处理？A.高温烘干B.蒸干载网上的水分C.直接染色D.立即固定21、透射电镜样品制备中，以下哪项不是必需的步骤？A.固定B.包埋C.电子染色D.抗体标记22、在进行超薄切片时，切取组织块的理想大小一般为？A.1cm×1cm×1cmB.0.5cm×0.5cm×0.3cmC.2mm×2mm×1mmD.5mm×5mm×5mm23、扫描电镜与透射电镜在样品要求上的主要区别是？A.扫描电镜需要超薄切片而透射电镜不需要B.扫描电镜不需要超薄切片而透射电镜需要C.两者都需要超薄切片D.两者都不需要超薄切片24、超薄切片质量控制中，关于切片厚度与电镜观察的关系，以下叙述正确的是？A.切片越厚观察效果越好B.切片厚度对观察效果无影响C.切片过厚电子难以穿透图像不清，过薄易碎D.切片厚度与电镜观察无关25、透射电子显微镜的分辨本领主要取决于以下哪个因素？A.加速电压的高低B.电磁透镜的衍射极限C.样品染色的深度D.真空度的高低26、超薄切片制备过程中，包埋剂最常用的类型是：A.石蜡B.环氧树脂C.明胶D.火棉胶27、戊二醛固定液的主要作用是：A.溶解脂质成分B.沉淀蛋白质并保持超微结构C.脱水透明D.染色增强对比度28、锇酸在电镜标本制备中的主要功能是：A.提供电子染色B.作为初固定剂C.稳定膜结构和脂质D.脱水剂29、超薄切片刀的材质通常为：A.钢制刀具B.玻璃刀或金刚石刀C.陶瓷刀D.塑料刀片30、醋酸铀染色的主要目的是：A.增加标本导电性B.提高电子散射能力增强对比度C.固定细胞结构D.脱水处理31、柠檬酸铅染色的作用特点不包括：A.与磷酸基团结合B.增强膜结构反差C.可与羧基结合D.用于透射电镜观察32、脱水剂乙醇在超薄切片制备中的作用是：A.固定细胞B.置换固定液并去除水分C.染色增强D.包埋渗透33、丙酮作为脱水剂的优势在于：A.价格低廉B.与环氧树脂互溶性好C.对组织损伤小D.易于去除34、点embed法（滴埋法）主要用于：A.大批量样本制作B.单个或小块样本的快速包埋C.厚切片的制备D.免疫电镜定位35、透射电镜观察的切片厚度一般为：A.1-5μmB.50-100nmC.200-500nmD.1-2mm36、复型技术主要用于扫描电镜观察样品的：A.内部超微结构B.表面三维形貌C.化学成份分析D.免疫定位37、冷冻断裂电镜技术的主要优势是：A.可获得化学信息B.避免化学固定引起的假象C.切片厚度可任意控制D.操作简便快捷38、扫描电镜的景深特点为：A.景深很小B.景深很大C.景深与光镜相同D.无景深概念39、电镜标本制备中，"后固定"通常使用的是：A.戊二醛B.锇酸C.乙醇D.丙酮40、过渡溶剂在超薄切片制备中的作用是：A.直接参与包埋B.置换脱水剂并促进包埋剂渗透C.固定细胞结构D.染色增强41、聚合温度对环氧树脂包埋的影响主要是：A.只影响固化速度B.温度越高切片质量越好C.影响包埋体的硬度和稳定性D.与切片质量无关42、负染色技术主要用于：A.观察细胞内部结构B.观察病毒、细菌等微小颗粒的形态C.免疫定位D.染色体分析43、冰晶形成对电镜标本的主要危害是：A.增强对比度B.破坏细胞超微结构产生人工假象C.提高切片硬度D.促进固定44、冷冻蚀刻技术中，"蚀刻"是指：A.用化学试剂腐蚀样品B.在真空低温下使冰升华暴露断面C.用电子束刻蚀D.机械切削样品45、在透射电子显微镜样品制备中，固定电镜标本最常用的固定剂是A.丙酮B.乙醇C.戊二醛D.甲醛E.苯46、超薄切片的厚度通常在以下哪个范围内A.0.1～0.5μmB.0.5～1.0μmC.50～90nmD.1～2μmE.5～10μm47、以下哪种包埋介质最适合电子显微镜观察A.石蜡B.明胶C.环氧树脂D.火棉胶E.琼脂糖48、用于电子显微镜染色的重金属盐主要是A.碘化钾B.醋酸铅和铀盐C.氯化钠D.硫酸铜E.硝酸银49、在扫描电镜制样中，常用干燥方法是A.空气自然干燥B.临界点干燥C.冷冻干燥仅用于植物D.微波干燥E.热风干燥50、透射电子显微镜的分辨率可达A.0.2nmB.2nmC.20nmD.200nmE.2μm51、电子显微镜的放大倍数最高可达A.100倍B.1000倍C.10000倍D.1000000倍E.100000倍52、超薄切片切片的常用刀是A.不锈钢手术刀片B.玻璃刀或钻石刀C.陶瓷刀D.塑料刀E.木质刀53、电镜标本脱水常用的脱水剂是A.二甲苯B.乙醇或丙酮C.苯D.氯仿E.乙醚54、负染色技术在电镜中的应用主要是A.观察细胞核结构B.观察病毒和细菌表面形态C.观察线粒体嵴D.观察微管结构E.观察核糖体55、电镜标本的包埋聚合温度一般为A.25℃B.37℃C.60℃D.100℃E.200℃56、扫描电子显微镜主要观察A.细胞内部的超微结构B.组织切片的横断面C.细胞表面的三维形态D.细胞核内的染色质E.线粒体基质57、超薄切片机切片的厚度主要由以下哪个因素决定A.光源强度B.切刀角度和进刀量C.样品颜色D.室温高低E.切片速度58、戊二醛固定液的最佳pH值为A.4.0B.5.0C.7.2～7.4D.8.5E.10.059、锇酸固定液的主要作用是A.固定蛋白质和核酸B.固定脂质和稳定膜结构C.硬化组织D.脱水作用E.透明作用60、电镜制片中，脱水剂梯度乙醇的最后一步浓度通常是A.70%B.80%C.90%D.95%E.100%61、透射电镜的电子源通常是A.钨丝灯丝B.氦气灯C.红外光源D.紫外线灯E.激光光源62、超薄切片采集通常使用A.载玻片B.铜网C.盖玻片D.培养皿E.离心管63、电镜观察前对样品进行镀膜的目的是A.增加样品颜色B.提高样品导电性防止电荷积累C.增加样品厚度D.美化样品外观E.固定样品64、在电镜制样中，渗透剂的作用是A.使包埋剂更容易渗入组织内部B.脱水作用C.固定作用D.染色作用E.导电作用65、透射电镜观察细胞超微结构时，最常用的固定剂是A.甲醛B.戊二醛C.乙醇D.丙酮E.醋酸66、超薄切片厚度一般为A.0.1~0.5μmB.0.5~1.0μmC.1.0~2.0μmD.2.0~5.0μmE.5.0~10.0μm67、制备超薄切片时，包埋剂常用A.石蜡B.明胶C.环氧树脂D.羧甲基纤维素E.琼脂68、锇酸在电镜标本制备中的作用是A.初固定B.后固定C.脱水D.染色E.包埋69、电镜观察中，常用重金属盐染色的目的是A.杀灭微生物B.增加电子散射C.防止切片变形D.提高切片硬度E.加速固定70、醋酸铀染色的主要作用部位是A.细胞膜B.糖原和核酸C.脂质D.胶原蛋白E.弹性纤维71、超薄切片机刀片通常采用A.玻璃刀B.钻石刀或不锈钢刀C.剃须刀片D.陶瓷刀E.铝片刀72、冷冻蚀刻电镜技术主要用于观察A.细胞表面形态B.细胞内部超微结构C.细胞膜断裂面D.染色体形态E.纤维结构73、扫描电镜主要用于观察A.细胞内部超微结构B.组织切片的细胞核C.细胞表面三维形态D.细胞器内部结构E.大分子结构74、电镜样品脱水常用的脱水剂是A.甲醛B.戊二醛C.梯度乙醇或丙酮D.苯酚E.甘油75、电镜分辨率约为A.0.2nmB.2nmC.20nmD.200nmE.2μm76、电镜制片中，临界点干燥的目的是A.固定组织B.避免表面张力损伤样品C.增加电子密度D.染色E.硬化组织77、透射电镜的电子源通常采用A.钨灯丝B.氦灯C.紫外线灯D.X射线管E.红外线灯78、电镜样品导电处理通常采用A.镀金B.喷镀铂或金C.镀银D.镀铜E.镀锡79、细胞器中，在电镜下呈致密颗粒状、无膜包被的结构是A.线粒体B.核糖体C.内质网D.高尔基复合体E.溶酶体80、电镜观察线粒体时，可见其内膜向腔内折叠形成A.微绒毛B.嵴C.伪足D.桥粒E.连接复合体81、超薄切片切取后，通常放在A.载玻片上B.铜网上C.盖玻片上D.培养皿中E.试管中82、细胞骨架中，直径约10nm的丝状结构是A.微管B.微丝C.中间纤维D.肌丝E.张力丝83、负染法主要用于A.观察细胞整体形态B.观察病毒和大分子结构C.观察细胞膜结构D.观察染色体E.观察组织切片84、电镜观察细胞内糖原主要采用A.锇酸固定B.醛固定后锇酸后固定C.高碘酸-Schiff反应D.钌红染色E.醋酸铀-柠檬酸铅双染85、透射电镜的放大倍数可达A.数百倍B.数千倍C.数万倍D.数百万倍E.数千万倍86、以下哪种技术可以实现教师与学生之间的实时音视频交互？A.邮件系统B.视频会议系统C.文档编辑软件D.数据库系统87、在设计数字化学习活动时，"最近发展区"理论强调的是？A.学习内容应完全超出学生能力范围B.学习任务应在学生现有水平和潜在发展水平之间C.学生应独立完成所有学习任务D.学习难度越低越好88、以下关于教育信息化的说法，正确的是？A.信息化就是购买大量电子设备B.信息化只是改变教学手段，不影响教育模式C.信息化是促进教育变革的催化剂和驱动力D.信息化可以完全替代教师的作用89、透射电子显微镜的主要原理是利用什么照射标本？A.可见光B.电子束C.X射线D.紫外线90、超薄切片通常的厚度范围是？A.1-5μmB.50-100nmC.0.5-1mmD.5-10nm91、制备电镜样品时最常用的固定剂是？A.甲醛B.丙酮C.戊二醛D.乙醇92、电镜样品包埋最常用的包埋剂是？A.石蜡B.明胶C.环氧树脂D.火棉胶93、电镜染色常用的重金属盐是？A.亚甲蓝B.铅铀双重染色C.苏木精D.伊红94、扫描电子显微镜主要用于观察？A.细胞内部超微结构B.标本表面三维形态C.细胞器内部结构D.分子排列95、电镜制样中脱水最常用的脱水剂是？A.水B.甲醇C.乙醇或丙酮D.甘油96、电镜下观察线粒体内部嵴的结构，应选择？A.扫描电镜B.透射电镜C.荧光显微镜D.相差显微镜97、超薄切片机刀片的常用材料是？A.玻璃或钻石B.不锈钢C.陶瓷D.塑料98、电镜样品重金属染色主要目的是？A.增加颜色对比B.提高电子散射能力C.防止细菌生长D.加速脱水99、临界点干燥法主要用于避免？A.样品氧化B.表面张力破坏样品C.微生物污染D.脱水不彻底100、透射电镜的分辨率可达？A.0.2nmB.2nmC.20nmD.200nm

参考答案及解析1.【参考答案】B【解析】IPTV即交互式网络电视，通过互联网协议网络传输视频内容，支持点播、回看等功能，是融合业务的重要形式。2.【参考答案】B【解析】通话结束前应确认客户问题已解决或已有处理方案，礼貌告别，体现完整服务流程，提升客户满意度。3.【参考答案】B【解析】10086是中国移动的全国统一客服热线，提供业务咨询、办理、投诉等服务。10000为电信，10010为联通。4.【参考答案】A【解析】首问负责制指首位接听客户电话的话务员需全程跟进，确保问题得到有效解决，不得推诿扯皮，提升服务效率。5.【参考答案】B【解析】超薄切片的基本流程为：取材后先经固定剂固定保存结构，再用脱水剂梯度脱水去除水分，随后用包埋剂浸泡渗透并进行聚合包埋固化，最后用超薄切片机切取薄片，经染色增强反差后即可电镜观察。6.【参考答案】A【解析】透射电镜利用电子波长比可见光短数千倍的原理，其分辨率可达0.1～0.2nm，能够清晰观察细胞的超微结构如线粒体嵴、内质网等亚显微结构。光学显微镜分辨率仅约200nm，相差约千倍。7.【参考答案】D【解析】超薄切片常用玻璃刀和钻石刀（含金刚石刀）。玻璃刀成本低、刃口锋利但寿命短；钻石刀硬度高、耐用，可反复使用。铁刀不具备超高硬度和锋利度，无法用于超薄切片制备。8.【参考答案】C【解析】超薄切片厚度通常为50～90nm（0.05～0.09μm）。切片过厚电子难以穿透，图像模糊；过薄则机械强度不足易破碎。此厚度是透射电镜观察的最佳范围。9.【参考答案】B【解析】2.5%戊二醛是电镜最常用的初级固定剂，能迅速穿透组织并与蛋白质交联，良好保存细胞超微结构。锇酸常作为次级固定剂使用，固定后增强膜结构反差。甲醛穿透快但固定效果弱于戊二醛。10.【参考答案】C【解析】环氧树脂（如Epon、Araldite）是超薄切片最常用的包埋剂，具有硬度适中、切片性能优良、聚合收缩率低等优点。石蜡用于光镜组织切片，明胶用于冰冻切片，火棉胶用于特殊包装，均不适用于电镜超薄切片。11.【参考答案】B【解析】透射电镜超薄切片常规采用醋酸铀和柠檬酸铅双重染色。醋酸铀主要与核酸和膜结构结合，柠檬酸铅增强整体反差，两者配合可显著提高膜系统和细胞器的电子密度对比度。苏木精-伊红是光镜染色方案。12.【参考答案】B【解析】透射电镜利用电磁透镜（聚光镜、物镜、投影镜）聚焦电子束成像，而非光学透镜。电磁透镜由通电流线圈产生磁场使电子束偏转聚焦，是电镜的核心部件，决定了仪器的分辨率和放大倍数。13.【参考答案】C【解析】丙酮和乙醇是电镜样品脱水最常用的脱水剂，二者均能与水互溶且对组织结构破坏小。梯度脱水法通常从低浓度逐渐过渡到高浓度以确保充分脱水。二甲苯是石蜡切片的透明剂，不用于电镜。14.【参考答案】C【解析】扫描电镜（SEM）利用电子束扫描样品表面，通过检测二次电子信号获得样品表面高分辨率的三维立体形貌图像。透射电镜（TEM）才用于观察细胞内部超微结构。15.【参考答案】B【解析】醋酸铀是一种负染色剂，能与核酸的磷酸基团及膜结构的磷脂结合，增加这些结构的电子散射能力，在图像中呈深色，从而显著增强膜系统和核糖体等结构的对比度。16.【参考答案】B【解析】根据阿贝公式，分辨率与波长成正比。透射电镜使用加速电压产生的电子束，其波长仅为可见光的约万分之一（如100kV时约0.0037nm），因此分辨率可达0.1nm级别，远超光学显微镜。17.【参考答案】B【解析】超薄切片机（如LKB型）通常在室温下工作，水温一般控制在4℃左右以保持切片平整。切片过程不需要高温、冷冻或高压环境。部分特殊应用可采用冷冻切片，但常规超薄切片在室温下进行。18.【参考答案】B【解析】透射电镜能观察细胞内部的亚显微结构，包括细胞膜、线粒体嵴、内质网、高尔基体、核糖体、溶酶体等，分辨率可达纳米级。细胞表面形态用扫描电镜观察更合适，代谢活性需用功能学检测方法。19.【参考答案】B【解析】锇酸是电镜常用的次级固定剂，可与脂质特别是膜脂质发生反应，使膜结构固定并增加电子密度，在后续切片中呈现清晰的膜层结构（如单位膜三层结构）。此外锇酸还有一定的染色作用。20.【参考答案】B【解析】超薄切片捞到载网上后，需将载网放在滤纸上吸去多余水分，使切片干燥贴附在载网上，然后再进行染色。若水分过多会影响染色效果，甚至使切片脱落。21.【参考答案】D【解析】透射电镜常规样品制备的基本步骤包括固定、脱水、包埋、切片和染色。免疫电镜才需要进行抗体标记以定位特定抗原。常规电镜观察不需要免疫标记步骤。22.【参考答案】C【解析】电镜取材要求组织块尽量小，理想大小为1～3mm见方、厚度不超过1mm，以便固定液迅速渗透。过大组织块会导致中心固定不良，影响超微结构的保存。切片范围也需相应缩小以适应载网尺寸。23.【参考答案】B【解析】透射电镜需要电子穿透样品，因此必须制备50～90nm的超薄切片；扫描电镜观察的是样品表面发射的二次电子，样品无需切片，只需适当固定、脱水、干燥和喷金处理即可。24.【参考答案】C【解析】超薄切片厚度直接影响电镜观察效果。切片过厚时电子穿透困难，图像模糊反差差；过薄时切片机械强度不足，易在操作过程中破裂或变形。最佳厚度50～90nm在保证结构完整的同时允许电子有效穿透。25.【参考答案】B【解析】透射电镜的分辨本领主要受电磁透镜衍射极限限制。虽然加速电压影响电子波长进而影响分辨率，但根本限制在于电磁透镜的像差和衍射效应。样品染色和真空度主要影响成像质量而非理论分辨率。26.【参考答案】B【解析】超薄切片常用环氧树脂类包埋剂，如Epon812、Araldite等。此类包埋剂硬化后切割性能优异，切片厚度可达50-100nm。石蜡和明胶适用于光镜组织切片，火棉胶主要用于特殊制片技术。27.【参考答案】B【解析】戊二醛是双醛化合物，能与蛋白质氨基发生交联反应，有效固定细胞结构，保持超微形态完整。它主要作用于蛋白质的氨基，固定效果优于甲醛，常用于电镜标本的初始固定。28.【参考答案】C【解析】四氧化锇（OsO4）既能固定脂质和膜结构，又能作为次级固定剂。锇与不饱和脂肪酸的双键结合，稳定细胞膜系统。同时锇具有重金属特性，可提供一定电子染色效果。29.【参考答案】B【解析】超薄切片采用特制的玻璃刀或金刚石刀。玻璃刀由光学玻璃劈制而成，刃口极薄；金刚石刀更为耐用，可多次使用。普通钢制刀具无法达到纳米级切片厚度要求。30.【参考答案】B【解析】醋酸铀是常用的电镜负染和包埋切片染色剂。铀为重金属元素，能选择性地与细胞内的核酸、蛋白质等结合，增强电子散射，提高图像对比度。这是电镜样本获得良好反差的关键步骤。31.【参考答案】C【解析】柠檬酸铅主要与细胞内的磷酸基团（如核酸、磷脂）结合，增强膜结构和核糖体等成分的反差。铅盐不主要与羧基结合，该作用特点是醋酸铀的特征。柠檬酸铅染色是透射电镜的标准染色方法之一。32.【参考答案】B【解析】乙醇作为梯度脱水剂，逐步置换组织中的水分和固定液。从低浓度到高浓度梯度脱水，避免组织收缩变形。完全脱水后便于包埋剂渗透，是切片制备的关键环节。33.【参考答案】B【解析】丙酮与多种环氧树脂包埋剂具有良好的互溶性，脱水后可直接进行包埋渗透。相比乙醇，丙酮脱水更快且组织收缩较小，是电镜标本制备中常用的脱水介质。34.【参考答案】B【解析】点embed法是将少量包埋剂滴在模具中，放入小块组织后覆盖另一滴包埋剂，再盖上盖玻片进行聚合。该方法操作简便，适合单个或少量样本的快速包埋，但不适用于大批量制备。35.【参考答案】B【解析】透射电镜电子束穿透能力有限，超薄切片厚度通常为50-100nm。过厚会导致电子无法穿透或散射严重，影响图像清晰度。这是区别于光镜切片（3-5μm）的重要参数。36.【参考答案】B【解析】复型技术是在样品表面喷涂碳或金属薄膜，剥离后得到与样品表面形貌一致的replica。主要用于扫描电镜观察样品表面三维结构，如细胞表面微绒毛、细菌形态等。37.【参考答案】B【解析】冷冻断裂技术将样品快速冷冻后断裂，可揭示细胞膜内在结构，避免化学固定和脱水处理可能产生的形态改变。这是研究膜结构和细胞内部形态的重要技术手段。38.【参考答案】B【解析】扫描电镜具有景深大的显著特点，能清晰呈现样品表面的三维立体结构。这是由于电子束波长短、扫描成像方式决定的。景深大是扫描电镜观察粗糙表面样品的重要优势。39.【参考答案】B【解析】后固定（secondaryfixation）通常使用锇酸。初固定用戊二醛保存蛋白结构，后固定用锇酸稳定脂类和膜结构，同时提供一定电子染色。两步固定配合可更好地保存超微结构。40.【参考答案】B【解析】过渡溶剂（如丙酮或环氧丙烷）用于置换脱水剂，并促进包埋剂逐渐渗透进入组织。这一步骤确保包埋剂能充分渗入组织内部，是保证切片质量的重要环节。41.【参考答案】C【解析】聚合温度直接影响环氧树脂的固化程度和包埋体硬度。温度过低固化不完全，过硬或过软均影响切片质量。一般包埋在60℃左右聚合6-24小时，可根据需要调整。42.【参考答案】B【解析】负染色是用重金属盐（如磷钨酸、醋酸铀）围绕微小颗粒形成暗背景，颗粒本身呈亮色。主要用于观察病毒、细菌、蛋白质分子等微小结构的表面形态，操作简便快速。43.【参考答案】B【解析】慢速冷冻时水分子形成冰晶，会刺破细胞膜和细胞器，产生人为的形态改变假象。冷冻电镜技术通过快速冷冻（plungefreezing）避免冰晶形成，保持原生结构。44.【参考答案】B【解析】冷冻蚀刻是在冷冻断裂后，将样品温度升至-100℃左右，使断面上的冰直接升华（冻干），暴露出细胞内部结构。该技术可清晰显示细胞膜的内外叶结构。45.【参考答案】C【解析】戊二醛是电镜标本最常用的固定剂。其优点在于能够很好地保存细胞超微结构，对酶活性也有一定保护作用。甲醛虽然也能固定组织，但主要适用于光镜观察，对于超微结构的保存效果不如戊二醛。丙酮和乙醇是脱水剂而非固定剂，苯则与电镜制样无关。使用2.5%戊二醛缓冲液进行灌注固定或浸泡固定，可以有效保持细胞的膜结构和细胞器形态。46.【参考答案】C【解析】超薄切片厚度一般在50～90纳米之间。这是因为透射电镜的电子束穿透力有限，切片过厚会导致电子无法穿透或图像模糊。0.1～0.5微米是半薄切片的范围，常用于光镜定位。1～2微米属于石蜡切片厚度。5～10微米则是常规组织切片的厚度范围。超薄切片需使用超薄切片机配合玻璃刀或钻石刀切割完成。47.【参考答案】C【解析】环氧树脂是电镜制样最常用的包埋介质，如Epon812、Spurr's树脂等。其优点是切片稳定性好、硬度适中、耐电子束轰击、聚合后收缩率小。石蜡用于常规光镜切片，熔点低不耐电子束。明胶和琼脂糖主要用于冷冻切片或免疫组化。火棉胶适用于某些特殊组织的切片但同样不用于电镜。环氧树脂包埋块可在室温或低温下用超薄切片机进行切片。48.【参考答案】B【解析】电镜染色常用的重金属盐是醋酸铅和铀盐（如柠檬酸铅和醋酸双氧铀）。这些重金属离子能够与细胞内的磷酸基团、羧基等结合，增加电子散射能力，从而提高图像的对比度。醋酸双氧铀主要用于切片前染色，柠檬酸铅用于切片后染色。其他选项中的试剂不用于电镜负染色或正染色，它们在电镜制样中没有增强电子散射的作用。49.【参考答案】B【解析】扫描电镜样品最常用的干燥方法是临界点干燥。该方法利用二氧化碳在临界状态下气液界面消失的原理，避免因表面张力导致的样品变形和收缩。空气自然干燥会使样品因表面张力而皱缩变形。冷冻干燥主要用于生物大分子样品但并非电镜首选。微波干燥和热风干燥温度较高，会破坏样品的超微结构。临界点干燥能较好地保持细胞的三维形态。50.【参考答案】A【解析】透射电子显微镜的理论分辨率可达0.2纳米左右，实际使用中通常在0.1～0.2纳米。这一分辨率远高于光学显微镜的约200纳米极限，因为电子波长比可见光波长短得多。2纳米是某些早期电镜的分辨率水平。20纳米和200纳米分别是扫描电镜和普通光学显微镜的分辨率范围。2微米则接近普通光学显微镜的分辨极限。51.【参考答案】D【解析】现代透射电子显微镜的最高放大倍数可达100万倍以上。扫描电子显微镜的放大倍数一般在10～30万倍之间。光学显微镜的最高有效放大倍数约为1500～2000倍。100倍和1000倍属于低倍光学放大范围。10000倍虽可被低倍电镜达到，但远非最高放大倍数。电镜的高放大倍数使其能够观察细胞器的精细结构及大分子复合体。52.【参考答案】B【解析】超薄切片最常用的刀具是玻璃刀和钻石刀。玻璃刀由优质光学玻璃沿特定角度劈裂而成，成本低且边缘锋利，适合批量切片。钻石刀硬度高、耐用性好，可长期使用且切片质量稳定，但价格昂贵。不锈钢手术刀片用于常规组织切片厚度较大。陶瓷刀、塑料刀和木质刀均不适用于超薄切片。刀片角度通常为45度左右以确保切片厚度均匀。53.【参考答案】B【解析】电镜标本脱水常用梯度乙醇或丙酮作为脱水剂。梯度脱水通常从低浓度开始逐步过渡到高浓度，如30%、50%、70%、90%、100%乙醇，以避免组织过度收缩。丙酮脱水速度快且与环氧树脂包埋剂相容性好。二甲苯是石蜡切片的透明剂而非脱水剂。苯、氯仿和乙醚主要用于有机溶剂脱脂而不是组织脱水，且毒性较大不适合电镜制样。54.【参考答案】B【解析】负染色技术主要用于观察病毒颗粒和细菌等微生物的表面形态。其原理是用重金属盐溶液（如磷钨酸或醋酸双氧铀）包裹样品，背景呈深色而样品本身呈浅色，从而突出样品的表面轮廓和形态特征。该方法不适用于观察细胞内部结构如细胞核、线粒体、微管和核糖体等，因为这些需要超薄切片和正染色技术才能清晰显示。负染色操作简便快速。55.【参考答案】C【解析】环氧树脂包埋料的聚合温度一般为60℃左右，聚合时间约24～48小时。此温度既能保证树脂充分聚合又不会因温度过高而破坏标本的超微结构。25℃和37℃温度偏低，聚合不完全影响切片质量。100℃温度过高会导致组织结构破坏甚至碳化。200℃已远超电镜标本的耐受温度。部分低温固化树脂可在37℃聚合但时间较长。56.【参考答案】C【解析】扫描电子显微镜主要用于观察样品表面的三维形态结构。它通过聚焦电子束在样品表面扫描，检测二次电子或背散射电子信号来成像，能够呈现样品表面的立体结构和细微形貌。观察细胞内部超微结构、组织切片横断面、染色质和线粒体基质等需使用透射电子显微镜。扫描电镜具有景深大、立体感强的特点，广泛应用于材料科学和生物学研究。57.【参考答案】B【解析】超薄切片机切片的厚度主要取决于切刀角度和进刀量。进刀量即切片时刀头每次前进的距离，直接决定切片厚度，通常设定在60～90纳米。切刀角度影响切片的质量和完整性。光源强度影响观察效果但不影响切片厚度。样品颜色、室温高低与切片厚度无关。切片速度也会影响切片质量但厚度主要由进刀量控制，精确调节进刀量是获得理想切片的关键。58.【参考答案】C【解析】戊二醛固定液的最佳pH值为7.2～7.4，与生理pH相近。在此pH范围内，戊二醛能有效交联蛋白质，固定细胞超微结构效果最佳。pH过低或过高都会影响固定效果，可能导致结构变形或固定不充分。pH4.0和5.0偏酸性，不利于蛋白质的稳定固定。pH8.5和10.0偏碱性，会加速戊二醛聚合失去固定能力。常用磷酸缓冲液配制戊二醛固定液。59.【参考答案】B【解析】锇酸（四氧化锇）的主要作用是固定脂质并稳定膜结构。它能够与不饱和脂肪酸的双键发生加成反应，从而固定细胞膜和细胞器的脂类成分，同时使膜结构显electrondense。锇酸对蛋白质的固定作用较弱，因此常与戊二醛联合使用形成双重固定。锇酸不具备硬化、脱水或透明作用。锇酸固定后的标本呈黑色并具有导电性，有利于后续电镜观察。60.【参考答案】E【解析】电镜制片中梯度乙醇脱水的最后一步通常使用100%无水乙醇。一般脱水程序为30%、50%、70%、90%、100%乙醇，每步10～15分钟。100%乙醇确保组织中的水分完全去除，为后续树脂渗透和包埋创造条件。若脱水不彻底，残留水分会影响树脂渗透和聚合，导致切片质量差。70%、80%、90%和95%均为中间脱水步骤而非最终步骤。61.【参考答案】A【解析】透射电子显微镜的电子源通常采用钨丝灯丝或六硼化镧阴极。钨丝灯丝是最常用的热发射电子源，通过加热钨丝产生热电子发射。氦气灯、红外光源、紫外线灯和激光光源均不是电镜的电子源，它们属于光学仪器光源。现代高端电镜还可能采用场发射枪以提供更高亮度和相干性的电子束。钨丝灯丝工作温度约为2700℃，需在真空环境下工作以防止氧化。62.【参考答案】B【解析】超薄切片采集通常使用铜网。铜网直径为3毫米，网孔大小有多种规格如200目、400目等，其上覆盖Formvar膜以支持切片。切好的超薄切片漂浮在水面上，用铜网从水中捞取。载玻片和盖玻片用于光镜切片。培养皿用于细胞培养。离心管用于样品处理。铜网在电镜观察后需清洗干净方可重复使用，且铜网不影响电子束穿透。63.【参考答案】B【解析】电镜观察前对样品进行镀膜（喷金或喷碳）的目的是提高样品导电性，防止电子束轰击时电荷积累导致图像漂移或畸变。非导电样品如生物组织在电子束作用下易产生荷电效应，镀膜后可将电荷导入大地。镀膜不能增加样品颜色或厚度，也不能美化外观或替代固定步骤。喷金分辨率更高但喷碳更均匀，两者均能达到提高导电性的目的。64.【参考答案】A【解析】渗透剂在电镜制样中的作用是使包埋剂更容易渗入组织内部。常用渗透剂如丙酮或乙醇，它们既能脱水又能与环氧树脂等包埋剂互溶，帮助包埋剂逐步渗入组织细胞间隙和细胞内。脱水作用是脱水剂的职责。固定由戊二醛和锇酸完成。染色由重金属盐完成。导电作用由镀膜实现。渗透过程通常分阶段进行低浓度到高浓度包埋剂的过渡以确保充分渗透。65.【参考答案】B【解析】戊二醛是透射电镜最常用的固定剂，它能迅速穿透组织并与蛋白质交联，有效保存细胞超微结构。甲醛主要用于光镜固定，对电镜结构保存效果较差。乙醇和丙酮为脱水剂而非固定剂，醋酸主要用于细胞核染色质固定。66.【参考答案】A【解析】超薄切片用于透射电镜观察，厚度通常为50~100nm，即0.05~0.1μm，实际切割范围约0.1~0.5μm。厚切片（2~5μm）用于光镜观察，过厚的切片电子无法穿透，无法在电镜下成像。67.【参考答案】C【解析】环氧树脂包埋剂具有粘度低、渗透性好、聚合后硬度适中且稳定性好的特点，是超薄切片最常用的包埋剂。石蜡用于常规光镜组织切片，明胶和琼脂用于冰冻切片辅助包埋。68.【参考答案】B【解析】锇酸（四氧化锇）作为后固定剂，能与脂质结合，固定细胞膜结构，同时具有重金属染色作用，增加标本的电子密度。戊二醛通常用于初固定，主要用于固定蛋白质。69.【参考答案】B【解析】重金属盐（如醋酸铀、柠檬酸铅）可与细胞内某些结构结合，增强对电子的散射能力，使不同结构呈现不同的电子密度，从而提高图象的对比度，便于观察超微结构。70.【参考答案】B【解析】醋酸铀主要与核酸（DNA、RNA）及糖原结合，使细胞核、核糖体等结构显示清晰。柠檬酸铅主要与蛋白质和膜结构结合。锇酸则固定并染色脂质成分。71.【参考答案】B【解析】超薄切片机使用钻石刀或特制不锈钢刀，能切割出厚度仅数十纳米的超薄切片。玻璃刀用于常规石蜡切片，剃须刀片和陶瓷刀不适用于电镜超薄切片。72.【参考答案】C【解析】冷冻蚀刻技术通过快速冷冻样品后断裂，可暴露细胞膜双层脂质分子的断裂面，观察膜颗粒分布和跨膜蛋白排列，是研究细胞膜结构的重要方法。73.【参考答案】C【解析】扫描电镜利用电子束扫描样品表面，获得样品表面三维立体图像，主要用于观察细胞、组织表面的形态结构和微细特征，不适用于观察内部超微结构。74.【参考答案】C【解析】梯度乙醇或丙酮是电镜样品最常用的脱水剂，通过由低浓度到高浓度的梯度置换，逐步脱去组织中的水分，为后续包埋剂渗透创造条件。75.【参考答案】B【解析】透射电镜分辨率可达0.2nm，但实际观察生物样品时，由于制备过程中固定、脱水等因素影响，有效分辨率约为2nm左右，远高于光镜的200nm。76.【参考答案】B【解析】临界点干燥利用CO₂在临界状态下气液界面消失的特性，避免了普通干燥过程中液体表面张力对样品的机械损伤，从而保持样品原有形态结构。77.【参考答案】A【解析】透射电镜常用钨灯丝或六硼化镧（LaB6）作为电子源，通电加热后发射电子形成电子束。钨灯丝是最常用的热发射电子源，需在高真空环境下工作。78.【参考答案】B【解析】扫描电镜观察时，非导电样品需进行喷镀处理，常用喷镀铂或金，以增强样品导电性，减少电荷积累，提高图像质量。透射电镜一般不需要此处理。79.【参考答案】B【解析】核糖体是由rRNA和蛋白质组成的致密颗粒，直径约20~30nm，无膜包被，在电镜下呈高电子密度颗粒状，广泛分布于细胞质和附着于粗面内质网上。80.【参考答案】B【解析】线粒体是双层膜结构的细胞器，外膜光滑，内膜向内折叠形成嵴，嵴的增加大大扩展了内膜面积，为ATP合成酶等提供了更多附着位点，是能量代谢的重要场所。81.【参考答案】B【解析】超薄切片切取后用特制吸管或网格拾起，置于电镜专用的铜网上进行后续处理和观察。铜网直径通常为3mm，带有支持膜（如Formvar膜），用于承载切片。