动物检疫采样操作规范指南（2025版）

动物检疫采样操作规范指南（2025版）第一章总则与基本原则为规范动物检疫采样操作，保障样品代表性、完整性和检测结果准确性，依据《中华人民共和国动物防疫法》及相关法律法规、技术标准，结合动物疫病监测、流行病学调查及检疫监管实际需求，制定本操作规范。本规范旨在为动物检疫相关技术人员提供标准化、可操作的采样指导，适用于各类动物及其产品在养殖、屠宰、流通、无害化处理等环节的检疫采样工作。动物检疫采样工作遵循以下基本原则：一是合法性原则，所有采样活动必须在法律授权和规定的范围内进行，并履行必要的告知或审批程序。二是科学性原则，采样方法、部位、数量及保存运输方式需严格遵循疫病病原学、流行病学规律及相关检测技术的要求。三是代表性原则，所采集的样品应能真实反映目标动物群体或产品的整体状况。四是安全性原则，操作过程须确保人员生物安全、动物福利及环境安全，有效防范病原扩散和人员感染风险。五是可追溯原则，样品信息记录应完整、准确、清晰，确保样品从采集到检测的全链条可追溯。采样人员需具备相应的资质，经过专业培训并考核合格，熟悉动物解剖生理、常见疫病知识、无菌操作技术及生物安全防护要求。采样前应制定详细的采样计划，明确采样目的、对象、数量、方法、所需器材及应急处置预案。第二章采样前准备充分的准备工作是确保采样工作顺利、高效、安全进行的基础。采样前准备主要包括以下方面：一、信息准备与方案制定明确本次采样的具体目的（如疫情监测、确诊、净化评估、出入境检疫等）、目标动物（种类、品种、日龄、用途等）、目标疫病（病原特性、潜伏期、靶器官等）。根据目的制定详细的现场采样方案，包括抽样策略（随机抽样、分层抽样、全群抽样等）、预估样品数量、具体采样部位、所需耗材清单、人员分工、时间安排及运输路线。二、法律与手续准备确认采样工作的法律依据，必要时提前获取行政许可或通知相关方（如养殖场、屠宰场负责人）。准备好相关法律文书、采样单、告知书等文件。对于监督抽样或案件调查涉及的采样，应严格按照法定程序进行。三、人员与防护准备组建采样小组，明确负责人、采样员、记录员、辅助人员职责。所有人员需穿戴符合生物安全等级的防护装备，至少包括：连体防护服或防水隔离衣：一次性使用，避免交叉污染。口罩、护目镜或面屏：防止飞沫、组织液喷溅。防护手套：建议双层，内层为医用检查手套，外层为耐切割、防刺穿的长袖橡胶手套或一次性薄膜手套，操作中如有破损立即更换。防水靴套或胶靴：离开现场前进行消毒。帽子：覆盖头发。操作烈性传染病或人畜共患病样品时，须提升防护等级，可能需配备正压防护头罩、呼吸器等。确保所有人员知晓应急预案，了解消毒剂配置、伤口紧急处理流程。四、器材与试剂准备根据采样方案准备齐全、足量的器材和试剂，并确保其清洁、无菌、有效。所有器材应分类装箱，标识清晰。采样器械：包括但不限于解剖刀、手术剪、骨剪、镊子（有齿、无齿）、采样拭子（鼻咽、肛拭、环境拭子等）、注射器（不同规格）、针头、采血管（抗凝管、促凝管、血培养瓶等）、组织采样袋、自封袋、离心管、样品瓶（灭菌、带螺旋盖）、棉签、酒精棉球、纱布等。样品保存与运输介质：根据检测项目准备，如病毒保存液、细菌转运培养基、磷酸盐缓冲液、甘油盐水、RNA/DNA保存液、固定液（如10%中性福尔马林）等。确保介质在有效期内。标识用品：防水标签、记号笔、样品唯一性编号条码或标签。记录用品：采样记录单、签字笔、照相机、GPS定位设备等。消毒与清洁用品：多种消毒剂（如碘伏、75%酒精、氯制剂、过氧乙酸等）、消毒喷雾器、洗手液、免洗消毒凝胶、污物袋、利器盒等。辅助工具：保温箱或车载冰箱、冰袋或干冰、温度记录仪、照明设备、动物保定器材、应急药品箱等。所有器材在出发现场前和采样结束后均应进行清点。锋利器械需妥善存放，防止意外伤害。五、现场勘查与动物准备到达采样现场后，首先与场方负责人沟通，了解动物群体基本情况（来源、数量、免疫、用药、近期异常情况等），确认采样区域。观察动物临床表现，初步评估群体健康状况。选择相对独立、便于消毒、光线良好的区域作为采样操作点。对待采样动物进行温和保定，减少应激，保障动物福利及操作安全。对于大型动物或凶猛动物，需使用专用保定设施，并在兽医指导下使用必要的镇静剂（需记录药名、剂量）。第三章各类样品采集操作规范本章详细规定不同种类、不同目的样品的具体采集方法、部位、数量及注意事项。操作全程需遵循无菌原则，避免样品间交叉污染及环境污染。一、血液样品采集血液是进行血清学、分子生物学及部分病原分离检测的常用样品。采集部位：根据动物种类、体型选择。禽类常用翅静脉、颈静脉；猪常用前腔静脉、耳缘静脉；牛羊常用颈静脉、尾静脉；犬猫常用前肢头静脉、后肢隐静脉；实验小动物常用尾静脉、眼眶后静脉丛。操作要点：1.充分保定动物，暴露采血部位，剪毛（必要时），用碘伏由内向外螺旋式消毒，待干后用75%酒精脱碘。2.根据检测需求选择采血管：血清学检测多用促凝管或惰性分离胶促凝管；需全血或血浆检测时用抗凝管（EDTA、肝素钠、柠檬酸钠等，根据检测要求选择）；血培养需用专用血培养瓶。3.使用合适规格的注射器或真空采血针，快速、平稳进针，见回血后缓慢抽取所需血量（避免过快引起溶血）。采集量需满足复检需求，一般大型动物5-10ml，中小型动物2-5ml，禽类1-2ml。4.拔针后立即用干棉球按压止血。将血液沿管壁缓慢注入采血管，避免剧烈震荡（尤其是抗凝血）。促凝管采集后需轻轻颠倒混匀5-8次。5.若需分离血清，将促凝管倾斜放置于室温（22-25℃）约30-60分钟，待血液完全凝固后，以3000rpm离心10分钟，用无菌吸管将上层血清转移至无菌冻存管中，避免吸入红细胞。若环境温度低，可置于37℃温箱促进凝固。注意事项：一畜一针，严禁重复使用。防止溶血（避免用力挤压采血部位、注射器气泡过多、剧烈震荡）。采血顺序建议为先采无菌要求高的样品（如血培养），再采抗凝血，最后采促凝血。详细记录采血时间、所用抗凝剂类型。二、组织器官样品采集主要用于病原分离、核酸检测、病理学检查等。采集时机与部位：优先采集濒死期或刚死亡（夏季不超过2小时，冬季不超过6小时）动物的病变典型部位。如无特征病变，则根据目标疫病的靶器官采集（如口蹄疫采集未破裂或刚破裂的水疱皮/液；非洲猪瘟采集脾脏、淋巴结、肾脏；高致病性禽流感采集气管、肺脏、脑组织等）。操作要点：1.对动物体表进行初步消毒。如需解剖，将动物尸体固定于解剖台，沿腹中线打开胸腔和腹腔。2.观察各组织器官的病理变化（颜色、大小、质地、渗出物、出血点等），并进行记录和拍照。3.使用灭菌的器械采集组织样品。每采集一个组织或不同动物样品前，均需对器械进行火焰灼烧或更换器械，防止交叉污染。4.采集的组织块大小要适宜，通常为1-2cm³。用于病原检测的样品应同时采集病变与交界区域，放入无菌容器内，并添加足量保存液浸没组织。用于病理组织学检查的样品应选取包括病变中心及周边正常组织的区域，厚度不超过0.5cm，立即投入10倍体积的10%中性福尔马林溶液中固定。5.淋巴结、扁桃体等器官应完整采集。常用组织样品采集要求示例表：检测目的优先采集组织/器官样品要求与处理病毒分离/核酸检测病变明显的靶器官（如脾、淋巴结、肺）取1-2克，置于含病毒保存液或RNA/DNA保存液的无菌管中，低温保存。细菌分离培养病变组织、渗出液、关节液、骨髓无菌采集，置于灭菌容器或细菌转运培养基中，避免干燥，尽快送检。病理组织学检查典型病变区域及相邻正常组织厚度≤0.5cm，10%中性福尔马林固定，固定液体积为组织块的10倍以上。寄生虫检查肠道内容物、肌肉（旋毛虫）、皮肤刮取物新鲜样品置于生理盐水湿润的容器中，或制作压片、涂片，尽快镜检。毒素检测肝脏、肾脏、胃内容物、可疑饲料取足量样品，避免污染，置于清洁容器中，-20℃以下冷冻保存。三、拭子样品采集用于采集动物体表、黏膜、伤口及环境中的病原。种类：包括鼻拭子、咽拭子、肛拭子、眼结膜拭子、阴道拭子、破溃处拭子及环境拭子。操作要点：1.使用灭菌的涤纶或藻酸钙拭子，避免使用棉拭子（可能含有抑制PCR反应的物质）。2.采集动物拭子时适当保定。鼻/咽拭子需将拭子深入鼻腔或咽部（禽类可深入喉头及气管），轻轻旋转并停留数秒，吸取分泌物。肛拭子/泄殖腔拭子需插入肛门或泄殖腔括约肌内，旋转采集粪便或黏膜分泌物。3.环境拭子应对可疑污染区域（如栏舍地面、食槽、水线、通风口、车辆厢体等）进行涂抹，面积通常为10cm×10cm，必要时使用湿润拭子。4.采集后，立即将拭子头放入含2-3ml相应保存液（如病毒保存液、细菌转运液）的灭菌管中，在管壁挤压旋转拭子头，使样品充分洗脱，弃去拭子杆，旋紧管盖。注意事项：不同动物或不同部位需使用独立包装的拭子。避免拭子接触其他部位造成污染。环境采样应突出重点区域，并记录采样具体位置。四、分泌物与排泄物样品乳汁：清洗并消毒乳头及操作者手部，弃去最初几把乳汁，直接采集中间乳汁于无菌容器中。精液：采用人工采精法收集于预热过的无菌容器中。粪便：采集新鲜自然排出的粪便，取中央部分5-10克，放入无菌容器或寄生虫检查专用盒。也可用肛拭子采集。尿液：采用自然排尿中段尿或膀胱穿刺法收集于无菌容器中。五、其他特殊样品病死动物全尸：对于小型动物或珍稀动物，可整体送检。尸体需双层密封包装，冷藏运输，防止泄漏。皮肤及痂皮：刮取病变边缘部皮肤或完整采集痂皮。虫体及节肢动物：用镊子采集，放入含70%酒精的容器内。第四章样品标识、记录、保存与运输一、样品标识样品采集后须立即在现场进行唯一性标识。每个样品容器上应牢固粘贴防水标签，标签信息需清晰、持久，至少包括：样品唯一编号（与采样记录单一致）动物种类/产品名称采样日期采样地点（具体到栏舍/圈号）样品类型（如全血、血清、脾脏组织等）必要时添加警示标识（如“生物危害”、“易碎”、“向上”）二、样品记录详细填写《动物检疫采样记录单》，确保信息真实、准确、完整。记录单内容应包括但不限于：采样任务编号、采样目的。受检单位/个人名称、地址、联系方式。动物信息：种类、品种、日龄、数量、标识（耳标、脚环号等）、免疫情况、临床状况。采样信息：采样时间、采样人员、采样部位、样品类型、样品编号、保存方式。环境信息：采样地点经纬度（GPS记录）、养殖场类型、卫生状况。运输信息：预计送检实验室、运输方式、承运人。采样人员、受检方代表（如在场）需签字确认。记录单应一式多份，随样品送检联需防水封装。三、样品保存样品保存目的是最大限度保持病原活性或核酸/蛋白完整性，抑制杂菌生长。临时保存：采样后至送检前，样品应根据特性立即处理：用于病毒分离或核酸检测的组织、拭子等，应尽快置于2-8℃冷藏（4小时内送检）或-20℃以下冷冻（若超过24小时送检）。用于细菌培养的样品，应室温或4℃冷藏保存，避免冷冻，并尽快（通常24小时内）送检。血清样品，分离后若短期（一周内）检测可存于4℃；长期保存应置于-20℃或-80℃。病理组织学样品，室温下在福尔马林中固定至少24-48小时。保存容器：确保密封良好，防止渗漏。冷冻样品避免使用玻璃容器。四、样品包装与运输必须遵循三层包装原则，确保生物安全，防止破损、泄漏和污染。1.内层包装：样品容器本身（如离心管、样品瓶），必须密封良好，外表面清洁。多个小型容器可共同置于一个自封袋中。2.中层包装：具有防水、防漏能力的第二层容器（如塑料盒、金属罐），其内应垫有足量的吸湿材料（如吸水纸、棉花）以吸收全部可能泄漏的液体。中层容器外应附有详细的样品清单和采样记录单副本。3.外层包装：坚固、耐压的运输外包装（如保温箱、泡沫箱、硬纸箱）。箱体上应清晰标注“生物样品”、“易碎”、“保持冷藏”或“保持冷冻”等标识，以及收寄件人详细信息。禁止在包装上标注样品病原类型等敏感信息。冷藏（2-8℃）运输需使用预冷的冰袋或冷藏包。冷冻（-20℃以下）运输需使用足量干冰，确保运输全程样品处于冷冻状态。使用干冰时，外层包装必须能排出二氧化碳气体，防止爆炸。运输箱内应放置温度记录仪，监控全程温度。样品运输应选择最快的途径，避免中转延误。必须通过具备资质的冷链物流或专人专车运送，并遵守危险品运输相关法规（如使用干冰时）。运输人员应了解所运物品的性质及应急处理措施。第五章采样后处理与质量控制一、现场清理与消毒采样结束后，必须对现场进行彻底清理和消毒：1.将所有废弃的采样器材、一次性防护用品、动物尸体或组织残骸等，分别装入专用的医疗废弃物袋或生物危害袋中。2.对利器（针头、刀片、破碎玻璃）必须放入防刺穿的利器盒内。3.对采样区域的地面、操作台、保定设备等进行喷洒或擦拭消毒。使用的消毒剂应根据目标病原的可能种类选择，并保证有效浓度和作用时间。4.采样人员按顺序脱下防护装备，放入废弃物袋，内层手套最后脱去。立即用肥皂和流动水彻底洗手，或用免洗消毒剂进行手消毒。5.所有废弃物应按照《医疗废物管理条例》和现场所在单位的生物安全管理规定进行高压灭菌或化学消毒等无害化处理，严禁随意丢弃。二、样品质量控制采样小组负责人应对当天采集的样品进行核对：检查样品标识是否清晰、完整，与记录单是否一致。检查样品容器是否密封良好，有无泄漏、破损。检查样品量是否满足检测要求。检查保存条件是否符合规定（温度、介质）。核对采样记录单信息是否填写完整、准确。发现问题应及时补救，无法补救的样品应记录原因并重新采样。三、信息管理与归档采样工作完成后，应及时整理所有文