血液病医院王慧君课件

流式细胞术在血液病诊断中的应用主讲人：王慧君

主治医师中国医学科学院血液病医院

临床检测中心2026年血液病诊断为何需要免疫分型流式细胞术成为形态学的重要补充传统血液病诊断高度依赖骨髓涂片形态学检查，但仅凭细胞形态难以完成精准分型形态学局限性镜检诊断的瓶颈主观性强：依赖阅片者经验，重复性受制约谱系难辨：同形态肿瘤细胞可起源于不同谱系分型不足：单靠镜检难以鉴别同形态细胞形态学检查是传统诊断基础免疫表型个体化治疗的关键依据治疗个体化：要求明确细胞免疫表型与分化阶段免疫表型决定治疗方向流式细胞术价值客观可量化的分型依据客观量化：检测细胞表面及胞内抗原补充形态学：为血液病提供客观可量化免疫分型依据客观·量化·可重复流式细胞术的核心检测原理散激光散射信号前向散射光反映细胞大小侧向散射光反映细胞颗粒度与内部复杂度荧荧光标记荧光素偶联抗体特异性结合目标抗原多色同时检测不同荧光染料在同一细胞上实现多色同时检测单单细胞悬液单细胞级采集细胞逐一通过检测孔，确保单细胞级别的数据采集高通量分析每秒钟可分析成千上万个细胞流式细胞仪由几大系统构成液流系统鞘液包裹使细胞呈单列通过检测点稳定性保证检测的稳定性与重复性光学系统激发收集激光器激发荧光，透镜收集散射光与荧光信号波长分离分光镜与滤光片将不同波长信号分离电子系统信号数字化将光信号转换为电信号并数字化数据记录记录每个细胞的参数，形成可分析的数据文件读懂免疫分型的标记与策略通过多色组合与逐级设门，可实现对异常细胞群的精确定位与谱系归属判断。免疫分型依赖细胞表面分化抗原的表达谱系，并结合设门策略解读结果CD分子定义1项标志性抗原细胞在分化成熟过程中表达的标志性抗原谱系专属标记2项髓系标记淋系标记特定抗原组合不同谱系细胞呈现特定的抗原组合设门分析2项圈选目标细胞群在散点图上圈选目标细胞群逐层分析再逐层分析其表型特征急性白血病免疫分型的应用急性白血病分型直接决定诱导治疗方案与预后判断，流式免疫分型是其中的关键环节。髓急性髓系白血病（AML）髓系标记表达

CD13、CD33、CD117分化阶段依据抗原表达判断细胞分化阶段淋急性淋巴细胞白血病（ALL）淋系标记表达淋系标记，区分

B系

与

T系

来源表达模式B-ALL常见

CD19、CD10、CD34

表达模式淋巴瘤的免疫表型分析流式细胞术适用于淋巴瘤细胞表面及胞内抗原的快速检测，辅助克隆性判断。免疫表型分析通过流式细胞术对淋巴瘤细胞表面及胞内抗原进行快速检测，为克隆性判断提供依据。“异常免疫表型与克隆性证据，是淋巴瘤诊断与疗效监测的重要参考。”样本来源外周血、骨髓、淋巴结穿刺或体液克隆性判断检测轻链限制性表达，辅助判断

克隆性增殖成熟度与来源结合多种B细胞或T细胞标记进行判断微小残留病监测的意义微小残留病（MRD）是治疗后体内残存的少量白血病细胞，其水平与复发风险密切相关。通过敏感技术识别治疗后体内残存的微量白血病细胞，为复发风险评估提供关键依据。MRD监测使疗效评估从形态学层面提升到分子与免疫学层面。检出能力流式细胞术可检出常规形态学无法识别的低水平残留细胞评估价值MRD水平是评估缓解深度与复发风险的敏感指标指导治疗治疗过程中的动态监测，可指导危险度分层与方案调整造血干细胞计数与移植支持CD34阳性细胞计数是判断采集产物质量的关键指标。CD34+细胞计数判断采集产物质量的关键指标准确的CD34定量，直接影响移植成功率与术后造血重建评估。标志性抗原CD34是造血干祖细胞的标志性抗原数量要求采集产物需达到一定CD34细胞数量方可满足移植要求时机与剂量依据流式计数为移植时机判断与剂量计算提供客观依据淋巴细胞亚群与免疫评估流式细胞术可对淋巴细胞各亚群进行精确计数，评估机体免疫状态。免疫评估通过流式细胞术对外周血淋巴细胞亚群进行分群计数，为免疫状态评估提供可量化依据。“亚群分析为免疫功能的定量评价提供可比的基线数据。”TBNK三大亚群常规检测

T细胞、B细胞、NK细胞

三大亚群。CD4与CD8细分及比值T细胞进一步细分

CD4

与

CD8

亚群，计算

CD4/CD8比值。临床应用场景应用于原发性免疫缺陷病、感染及免疫相关疾病的评估。阵发性睡眠性血红蛋白尿检测阵发性睡眠性血红蛋白尿（PNH）的诊断依赖对血细胞膜锚连蛋白缺失的检测。PNH细胞因

GPI锚合成缺陷，缺失

CD55、CD59

等锚连蛋白，是流式检测的分子基础。GPI锚合成缺陷机制PNH细胞因GPI锚合成缺陷，缺失

CD55、CD59

等锚连蛋白流式定量PNH克隆流式细胞术可定量测定红细胞及白细胞的

PNH克隆大小克隆比例临床相关性克隆比例与溶血严重程度、血栓风险相关“流式检测是PNH确诊与随访的金标准方法之一。”流式对比传统检测的优势流式细胞术在客观性、通量与多参数方面具有显著优势，可与形态学形成互补。对比维度流式细胞术形态学/免疫组化检测通量高通量，单次分析数万细胞人工阅片，通量受限客观性荧光信号量化，客观可比依赖经验，主观性强参数维度多色同时检测多抗原单次检测指标有限定量能力精确计数与比例半定量为主与形态及分子检测的协同血液病精准诊断依赖免疫分型、形态学与分子遗传学三者的结合。三者信息交叉印证，缺一不可，共同服务于整合诊断。形态学整体印象提供细胞形态与比例的整体印象免疫分型谱系与阶段明确细胞谱系与分化阶段分子与遗传学基因与预后揭示驱动基因与预后分层质量控制决定结果可信度流式细胞术结果的可靠性高度依赖全流程质量控制。样本环节标本新鲜度与抗凝处理直接影响细胞活性上机前充分混匀，保证细胞代表性仪器环节定期进行光路校准与补偿调节使用质控微球监测仪器性能稳定性分析环节规范设门，统一分析标准异常结果须结合临床与形态学复核报告解读的核心思路一份流式报告的价值，在于能否转化为临床可用的诊断信息。1确认样本样本类型与细胞活性是否符合要求2识别异常异常细胞群及其在散点图中的分布3判断谱系各抗原表达组合，明确谱系归属4综合分析结合临床表现与形态学、分子结果综合判断5关注定量克隆大小、MRD水平等定量信息报告解读始终以临床问题为导向，避免脱离病史孤立判断。医学生应掌握的学习要点围绕流式细胞术与血液病诊断，学习应把握从原理到应用再到规范的递进路径。基础原理原理理解激光散射与荧光标记。典型表型表型熟悉急性白血病、淋巴瘤等疾病的免疫表型。临床应用