细胞培养技师考试试卷及答案

细胞培养技师考试试卷及答案细胞培养技师考试试卷及答案一、填空题（共10题，每题1分，共10分）1.细胞培养中最常用的天然培养基是______。2.无菌操作时，超净工作台应开启紫外灯照射至少______分钟。3.细胞传代时，常用______酶消化细胞间的连接。4.哺乳动物细胞培养箱的CO₂浓度通常设置为______%。5.细胞冻存时，常用的保护剂是______。6.细胞培养中常见的微生物污染类型有细菌、真菌和______。7.原代细胞与细胞系的主要区别是原代细胞______。8.细胞培养基的适宜pH值范围一般为______。9.贴壁细胞培养时，细胞首先经历______过程才能开始生长。10.细胞计数时，常用的工具是______。二、单项选择题（共10题，每题2分，共20分）1.下列哪种操作不属于无菌操作范畴？（）A.戴无菌手套B.用酒精擦拭台面C.打开培养瓶后对着瓶口说话D.火焰消毒瓶口2.细胞冻存的正确步骤是？（）A.直接放入液氮B.4℃→-20℃→-80℃→液氮C.-20℃→4℃→-80℃→液氮D.室温→-80℃→液氮3.下列哪种培养基适用于大多数哺乳动物细胞培养？（）A.LB培养基B.DMEM培养基C.麦康凯培养基D.高氏一号培养基4.细胞污染后，下列哪种处理方式最合理？（）A.继续培养B.加入抗生素挽救C.立即丢弃并消毒D.更换培养基5.贴壁细胞传代时，消化时间过长会导致？（）A.细胞无法脱落B.细胞损伤死亡C.细胞增殖加快D.细胞贴壁更好6.下列哪种物质不是细胞培养基的必需成分？（）A.葡萄糖B.氨基酸C.琼脂D.血清7.细胞培养箱的温度应设置为？（）A.25℃B.30℃C.37℃D.40℃8.支原体污染的特点是？（）A.培养基浑浊B.细胞变圆脱落C.无明显外观变化但细胞生长缓慢D.产生菌丝9.细胞计数时，计数板上的大方格边长是？（）A.1mmB.2mmC.0.1mmD.0.5mm10.下列哪种方法不能用于细胞冻存？（）A.程序降温法B.直接液氮冷冻C.-80℃过夜后转液氮D.梯度降温法三、多项选择题（共10题，每题2分，共20分）1.细胞培养中常用的无菌操作工具包括（）A.无菌枪头B.一次性培养皿C.酒精棉球D.普通镊子2.细胞污染的来源可能有（）A.培养基污染B.操作过程污染C.空气尘埃污染D.细胞本身携带3.细胞冻存保护剂的作用是（）A.防止细胞脱水B.减少冰晶形成C.维持细胞渗透压D.促进细胞增殖4.贴壁细胞的生长阶段包括（）A.潜伏期B.对数生长期C.平台期D.衰退期5.下列属于原代细胞的是（）A.HeLa细胞B.小鼠胚胎成纤维细胞（原代）C.人脐静脉内皮细胞（原代）D.CHO细胞6.细胞培养中调节pH值的物质有（）A.HEPESB.NaHCO₃C.盐酸D.氢氧化钠7.无菌操作时需要注意的事项有（）A.操作前洗手消毒B.避免在超净台外操作C.定期更换超净台滤网D.操作时保持台面整洁8.细胞传代的基本步骤包括（）A.消化细胞B.离心收集细胞C.重悬细胞D.接种培养9.下列哪种情况提示细胞可能污染？（）A.培养基浑浊B.细胞形态异常C.细胞生长速度减慢D.培养基颜色快速变黄10.细胞计数的正确方法是（）A.取细胞悬液与台盼蓝混合B.计数活细胞（不着色）C.计数四个角大方格的细胞数D.计算平均值后换算浓度四、判断题（共10题，每题2分，共20分）1.细胞培养时，培养瓶可以不盖紧盖子。（）2.胰酶消化细胞时，需要在37℃下进行。（）3.细胞冻存时，DMSO的浓度一般为10%。（）4.支原体污染可以通过肉眼直接观察到。（）5.原代细胞可以无限传代。（）6.细胞培养基的pH值过高会导致细胞死亡。（）7.超净工作台使用前需要开启风机和紫外灯。（）8.贴壁细胞传代时，不需要离心收集细胞。（）9.细胞计数时，死细胞会被台盼蓝染色。（）10.细菌污染会导致培养基快速浑浊。（）五、简答题（共4题，每题5分，共20分）1.简述细胞传代的基本流程。2.如何预防细胞培养中的污染？3.细胞冻存的注意事项有哪些？4.简述贴壁细胞与悬浮细胞的培养差异。六、讨论题（共2题，每题5分，共10分）1.细胞培养中出现细胞生长缓慢的可能原因及解决措施。2.如何判断细胞培养中的污染类型及处理方式？答案：一、填空题1.胎牛血清2.303.胰蛋白4.55.二甲基亚砜（DMSO）6.支原体7.有限增殖能力8.7.2-7.49.贴壁10.血细胞计数板二、单项选择题1.C2.B3.B4.C5.B6.C7.C8.C9.A10.B三、多项选择题1.ABC2.ABCD3.ABC4.ABCD5.BC6.ABCD7.ABCD8.ABCD9.ABCD10.ABCD四、判断题1.错2.对3.对4.错5.错6.对7.对8.错9.对10.对五、简答题1.流程：1.准备无菌环境，预热培养基和胰酶；2.移除旧培养基，PBS冲洗2-3次；3.加胰酶37℃孵育至细胞脱落；4.加含血清培养基终止消化，吹打分散；5.离心收集细胞，弃上清；6.新鲜培养基重悬，调整浓度接种；7.置于培养箱培养。全程无菌操作。2.措施：1.操作前紫外消毒超净台，双手消毒；2.使用无菌耗材，瓶口火焰消毒；3.培养基加适量抗生素；4.定期清洁培养箱，更换滤膜；5.定期观察细胞状态，发现污染及时处理；6.试剂4℃保存，避免反复冻融。3.注意事项：1.选对数生长期细胞；2.冻存液含10%DMSO+90%血清；3.梯度降温：4℃→-20℃→-80℃→液氮；4.标记清晰细胞信息；5.复苏快速解冻，离心去冻存液；6.定期检查液氮液位。4.差异：1.生长方式：贴壁需附着表面，悬浮无需；2.容器：贴壁用普通瓶，悬浮用摇瓶；3.传代：贴壁需胰酶消化，悬浮离心稀释；4.形态：贴壁多样，悬浮圆形；5.应用：贴壁用于分化筛选，悬浮适合大规模培养。六、讨论题1.原因及措施：1.培养基问题：营养不足→换新鲜培养基，调血清浓度；pH异常→调整至7.2-7.4；2.污染：支原体→丢弃或用清除试剂；3.代次高→换低代次细胞；4.培养条件：温度/CO₂不当→检查参数；5