《检验科标本采集与处理手册》

《检验科标本采集与处理手册》1标本采集前质量控制标本采集前质量控制是检验全流程质量管控的核心环节，国内外研究数据显示，分析前误差占临床检验总误差的60%~80%，且大部分误差可通过规范操作避免。采集前质量控制涵盖患者准备、器材准备、人员资质三个核心维度。1.1患者准备1.1.1饮食状态：常规生化、免疫检测需患者空腹8~12小时，期间可少量饮用常温白开水（单日饮用量不超过200ml，采血前1小时内禁水），禁止摄入浓茶、咖啡、含糖饮料、酒精类饮品。空腹时间不足可导致血糖、甘油三酯等项目假性升高；空腹时间超过16小时可导致血清白蛋白、转铁蛋白、血糖、胆红素水平降低，尿酮体阳性。特殊项目如糖耐量试验需严格按照试验要求摄入75g无水葡萄糖，期间禁止进食、剧烈运动、吸烟。1.1.2运动状态：采血前24小时内禁止剧烈运动，采血前需静坐休息5~10分钟。剧烈运动可导致肌酸激酶（CK）升高2~3倍、乳酸升高1~2倍，还可引起血钾、血钙、白蛋白等指标一过性升高，影响结果判读。1.1.3药物影响：应尽可能在采血前3~5天停用对检测结果有干扰的药物，无法停药的需在申请单上注明用药种类、剂量、用药时间。常见干扰药物包括：维生素C可导致血糖、尿糖、粪便隐血、尿隐血出现假阴性；广谱抗生素可导致血培养假阴性、血常规白细胞计数降低；噻嗪类利尿剂可导致血钾、血钠紊乱；肝素可导致凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）延长；糖皮质激素可导致血糖、白细胞计数升高。1.1.4体位与生理状态：采血时采用标准坐位，避免立位或卧位，立位较卧位血浆总蛋白、白蛋白、血脂、红细胞计数等指标升高5%~15%。女性患者应避开月经期留取尿液、粪便标本，避免阴道分泌物混入导致尿蛋白、尿白细胞假阳性；妊娠期女性血常规、生化指标存在生理性波动，需结合孕周判读。1.1.5采集时机：血培养标本需在寒战或发热初期（体温≥38.5℃）采集，且优先选择抗菌药物使用前；皮质醇、促肾上腺皮质激素需分别在8:00、16:00、0:00三个时间点采集；尿HCG检测以晨尿为最佳，灵敏度较随机尿高2~3倍；药物浓度监测需严格遵循采血时间要求（如谷浓度为下次给药前30分钟，峰浓度为给药后1~2小时，具体根据药代动力学特点调整）。1.2采集器材要求1.2.1采血管：严格按照检测项目选择对应添加剂的采血管，所有器材需在有效期内，无破损、无渗漏。常见采血管类型及对应检测项目如下：（1）枸橼酸钠1:9抗凝管（蓝盖）：用于凝血功能（PT、APTT、纤维蛋白原、凝血酶时间）、血栓弹力图检测，抗凝剂与血液比例需严格控制为1:9，采血量误差不得超过±10%，否则会导致凝血结果偏差。（2）枸橼酸钠1:4抗凝管（黑盖）：用于红细胞沉降率（血沉）检测，抗凝剂与血液比例为1:4。（3）血清分离胶促凝管（黄盖）：用于常规生化、免疫、内分泌、肿瘤标志物检测，分离胶密度介于血清与血细胞之间，离心后可将血清与血细胞完全分离，避免血细胞成分代谢干扰血清检测结果。（4）肝素锂抗凝管（绿盖）：用于急诊生化、血流变、血气分析（动脉血）检测，肝素通过激活抗凝血酶Ⅲ实现抗凝，不影响红细胞体积，适用于血流变检测，但不可用于血常规、凝血功能检测，也不可用于分子诊断检测（肝素会抑制Taq酶活性，导致扩增失败）。（5）EDTA-K2抗凝管（紫盖）：用于血常规、糖化血红蛋白、血型鉴定、DNA检测等，EDTA通过螯合钙离子实现抗凝，对血细胞形态、大小影响小，是血常规检测的标准抗凝剂。（6）草酸钾-氟化钠管（灰盖）：用于血糖、乳酸检测，氟化钠可抑制糖酵解酶（烯醇化酶）活性，避免血糖在体外被血细胞代谢降低，室温下可稳定血糖24小时。1.2.2其他采集器材：尿液、粪便采集容器需为一次性清洁干燥聚丙烯容器，无渗漏、无化学污染物；微生物标本采集容器需为无菌容器，使用前检查包装完整性及灭菌有效期；分子诊断拭子需为尼龙植绒拭子，避免使用普通棉拭子（吸附核酸能力差，且含有PCR抑制物）。1.3人员资质要求标本采集人员需为经过临床检验采集规范、生物安全操作培训并考核合格的医护人员，熟悉各类标本采集的操作流程、注意事项、生物安全防护要求，能够准确核对患者身份、检测项目，识别采集禁忌，具备基本的应急处置能力。2各类标本采集操作规范2.1血液标本采集2.1.1静脉血采集（1）身份核对：采用双核对制度，核对患者姓名、住院号/门诊号、腕带信息，确认申请项目与采血管匹配。（2）血管选择：首选肘正中静脉，其次为头静脉、贵要静脉，避免选择输液侧肢体、水肿、瘢痕、炎症部位的血管，婴幼儿可选择头皮静脉或颈外静脉。（3）皮肤消毒：使用75%乙醇以穿刺点为中心螺旋式消毒，消毒范围直径≥5cm，待干30秒，禁止使用碘伏消毒（碘伏含碘成分，会干扰尿酸、磷酸盐、淀粉酶等项目检测）。（4）止血带使用：止血带结扎于穿刺点上方5~7cm处，结扎时间不得超过1分钟，禁止反复拍打血管、让患者反复握拳（会导致血钾、乳酸升高，红细胞比容增加）。（5）采血顺序：严格遵循CLSIH21-A5标准，采血顺序为：血培养瓶（厌氧瓶优先，其次为需氧瓶）→枸橼酸钠抗凝管（蓝盖）→血清管（红盖/黄盖分离胶）→肝素抗凝管（绿盖）→EDTA抗凝管（紫盖）→草酸钾-氟化钠管（灰盖），避免添加剂交叉污染。（6）采血后处理：拔针后嘱患者用干棉签沿血管方向按压3~5分钟，禁止揉搓，避免皮下淤血；抗凝管采集后立即颠倒混匀8~10次，力度适中，避免剧烈震荡导致溶血；血清管采集后静置待凝，避免晃动。2.1.2动脉血采集（1）适用范围：用于血气分析、血乳酸、血氨检测。（2）部位选择：首选桡动脉，其次为股动脉、肱动脉，采集桡动脉前需做Allen试验：同时压迫桡动脉和尺动脉，嘱患者反复握拳松拳至手掌苍白，松开尺动脉，10秒内手掌颜色恢复为Allen试验阴性，可采集桡动脉血；10秒以上不恢复为阳性，禁止采集桡动脉血，避免手部缺血。（3）抗凝剂：使用1000U/ml肝素钠溶液湿润注射器内壁，排尽多余肝素（肝素残留量不得超过0.05ml，避免稀释标本）。（4）采集要求：采血量1~2ml，采血后立即排除针筒内气泡（气泡占比超过1%会导致PaO₂升高、PaCO₂降低），用橡皮塞密封针头，颠倒混匀5次后搓滚针筒5秒，使肝素与血液充分混合。（5）送检要求：室温下15分钟内完成检测，4℃冰浴保存不得超过30分钟（白细胞代谢会导致PaO₂降低、PaCO₂升高、pH降低）。2.1.3末梢血采集（1）适用范围：用于血常规、快速血糖、血型、新生儿筛查等检测，适用于静脉采血困难的婴幼儿、老年患者。（2）部位选择：成人首选无名指内侧，婴幼儿首选足跟内侧，避免选择水肿、冻疮、炎症部位，禁止选择指尖正面（神经末梢丰富，痛感强）。（3）操作要求：消毒后用一次性采血针穿刺，深度2~3mm，弃去第一滴血（混有组织液，会稀释标本），用第二滴血进行检测，采血量严格按照项目要求（如血常规需≥20μl），采集后立即与抗凝剂混匀，避免凝血。2.2尿液标本采集2.2.1标本类型及适用范围（1）首次晨尿：清晨起床后第一次排尿，尿液浓缩，有形成分含量高，适用于尿沉渣、尿蛋白、尿HCG、尿浓缩功能检测，阳性检出率最高。（2）随机尿：随时留取的尿液，适用于急诊筛查、常规体检，但结果受饮食、运动影响较大。（3）24小时尿：用于尿蛋白定量、尿糖定量、尿电解质、尿肌酐、尿香草扁桃酸（VMA）等定量检测。留取方法：第一天清晨8点排空膀胱，弃去首次尿液，之后24小时内所有尿液收集于干净带盖容器中，根据检测项目加入对应防腐剂，至第二天清晨8点排空膀胱，将最后一次尿液加入容器，记录总尿量（精确到10ml），混匀后取10~20ml送检。（4）清洁中段尿：用于尿细菌培养，留取前用温水清洁外阴，消毒尿道口，弃去前段尿，留取中段尿10~20ml于无菌容器，严格无菌操作。（5）餐后2小时尿：午餐后2小时留取，适用于尿糖、尿蛋白筛查。2.2.2防腐剂使用规范（1）甲苯：每100ml尿液加入0.5~1ml甲苯，在尿液表面形成薄膜，防止细菌繁殖，适用于尿蛋白、尿糖、尿肌酐等生化定量检测。（2）浓盐酸：每100ml尿液加入1ml浓盐酸，保持尿液pH<2，适用于尿17-羟皮质类固醇、17-酮类固醇、儿茶酚胺、尿钙检测。（3）冰醋酸：每100ml尿液加入0.5~1ml冰醋酸，保持尿液pH3~5，适用于尿5-羟色胺、醛固酮检测。（4）麝香草酚：每100ml尿液加入<0.1g麝香草酚，适用于尿沉渣、尿结核菌检测，但会干扰尿蛋白定性试验。2.2.3注意事项：女性患者留尿时应分开阴唇，避免阴道分泌物混入；男性患者应避免精液、前列腺液混入；标本留取后1小时内送检，无法及时送检的4℃保存不超过6小时，避免细菌繁殖、有形成分溶解。2.3粪便标本采集2.3.1常规标本：留取新鲜粪便，挑取含有脓血、黏液、异常颜色的部分，量约黄豆大小（5~10g），置于清洁干燥容器，1小时内送检，避免尿液、污水、卫生纸混入。2.3.2隐血标本：试验前3天禁食动物血、肝脏、铁剂、富含叶绿素的食物，避免服用维生素C，防止假阳性或假阴性，留取方法同常规标本。2.3.3寄生虫标本：查阿米巴滋养体需保温送检（37℃），30分钟内完成检测，防止滋养体失去活力；查蛲虫卵需在清晨排便前用棉拭子在肛周皮肤褶皱处擦拭，立即送检；查蛔虫卵需留取24小时全部粪便，淘洗后送检。2.3.4粪便培养标本：无菌操作挑取脓血、黏液部分，置于无菌转运管，立即送检，怀疑沙门氏菌、志贺氏菌感染的标本需同时留取增菌管。2.4体液标本采集2.4.1脑脊液：由临床医生腰椎穿刺采集，通常留取3管，每管1~2ml，第一管用于生化、免疫检测（穿刺初期可能混入皮肤正常菌群，不适合培养），第二管用于微生物培养，第三管用于常规细胞学检测（穿刺后期细胞计数更准确，受穿刺出血影响小）。采集后立即送检，常规、生化检测1小时内完成，微生物标本尽快接种，避免细胞溶解、细菌死亡。2.4.2浆膜腔积液（胸水、腹水、心包积液）：由临床医生穿刺采集，常规细胞学检测用EDTA-K2抗凝管，生化检测用肝素锂抗凝管或血清管，微生物培养用无菌管，采集后立即送检，2小时内完成检测，无法及时送检的4℃保存不超过24小时。2.4.3精液标本：患者禁欲3~7天，手淫法采集全部精液于清洁无菌容器，禁止使用避孕套（含杀精剂），采集后30分钟内送检，保温（25~35℃），射精后30分钟内完成液化时间检测。2.4.4阴道分泌物：由妇科医生用无菌棉拭子采集，置于含有生理盐水的试管中，立即送检，避免干燥，用于白带常规、细菌性阴道病（BV）、滴虫、霉菌检测。2.5微生物标本采集2.5.1血培养：采集指征为不明原因发热（体温≥38.5℃）、寒战、感染性休克、疑似菌血症患者，优先选择抗菌药物使用前采集，成人每次采集2~3套（每套包括1个需氧瓶、1个厌氧瓶），每套采血量10~20ml（每瓶5~10ml）；儿童按体重计算，每瓶1~5ml。皮肤消毒采用三步法：75%乙醇擦拭30秒→碘伏螺旋式擦拭30秒（消毒范围直径≥8cm）→75%乙醇脱碘30秒，待干后采血，采血后立即注入血培养瓶，轻轻颠倒混匀5~6次，2小时内送检，无法及时送检的室温放置，禁止冷藏。2.5.2痰培养：清晨留取，先用清水漱口3次，用力咳出深部痰液，置于无菌痰杯，量≥1ml，2小时内送检。合格痰标本标准为：鳞状上皮细胞<10个/低倍视野，中性粒细胞>25个/低倍视野，不合格标本需通知患者重新留取。2.5.3伤口分泌物标本：先用生理盐水清洁伤口表面，去除表面污染菌，用无菌棉拭子采集深部脓液或肉芽组织分泌物，置于无菌转运管，立即送检，避免采集表面结痂或渗出液。2.6分子诊断标本采集2.6.1全血标本：用EDTA-K2抗凝管采集，采血量2~5ml，禁止使用肝素抗凝管，采集后24小时内分离血浆/白细胞，-20℃以下保存，避免反复冻融（冻融次数不超过2次）。2.6.2口咽/鼻咽拭子：用无菌尼龙植绒拭子，口咽拭子需擦拭双侧扁桃体及咽后壁，鼻咽拭子需插入鼻咽部停留15秒旋转3圈，采集后置于病毒保存液中，2小时内送检，4℃保存不超过24小时，-20℃保存不超过7天，-80℃可长期保存。2.6.3组织标本：手术切除的病变组织，无菌操作下取50~100mg病变部位组织，置于无酶冻存管，液氮速冻后-80℃保存，避免反复冻融。3标本转运与接收规范3.1转运要求3.1.1人员与容器：转运人员需经过生物安全培训，使用密闭式转运箱，箱内置吸水垫，防止标本泄漏、倒洒，转运过程中避免剧烈震荡，防止溶血。3.1.2温度控制：常规标本室温（18~25℃）转运；血气分析、血氨、乳酸标本需冰浴转运；精液、阿米巴滋养体标本需37℃保温转运；分子诊断标本长途转运需使用干冰，保持-20℃以下低温。3.1.3时限要求：常规生化、免疫标本2小时内送达检验科；血常规标本1小时内送达；血气分析标本15分钟内送达；尿、便常规标本1小时内送达；微生物标本2小时内送达；分子诊断标本4小时内送达。3.2接收规范3.2.1信息核对：接收人员逐一核对标本条码、姓名、性别、年龄、科室、住院号/门诊号、标本类型、采集时间、申请项目，确认信息一致后签收，记录接收时间。3.2.2质量评估：检查标本外观、量、抗凝比例、容器类型，评估是否合格。不合格标本包括：（1）标本信息不符，条码模糊无法识别；（2）标本类型与申请项目不匹配；（3）标本量严重不足（如凝血管采血量<1ml）；（4）中度以上溶血、脂血、黄疸，影响检测结果；（5）抗凝标本出现凝块；（6）超过送检时限且未按要求保存；（7）容器破损、标本泄漏、污染；（8）尿、便标本混入卫生纸、污水等异物。3.2.3不合格标本处理：符合拒收标准的，填写《不合格标本登记本》，注明拒收原因，第一时间通知临床科室重新采集，同时做好记录；特殊标本（如脑脊液、术中标本、稀有血型患者标本）无法重新采集的，需告知临床医生标本缺陷，在报告单上明确标注标本异常情况，提示结果仅供临床参考。4标本处理规范4.1血液标本处理4.1.1血清标本：分离胶促凝管采集后静置30~60分钟，待血液完全凝固后，3000r/min（离心力约1500g）离心10分钟，离心半径15cm，室温离心，分离后血清应清亮无溶血、无纤维蛋白凝块，2小时内完成检测，无法及时检测的2~8℃保存，7天内检测。4.1.2血浆标本：抗凝管采集后立即颠倒混匀，确认无凝块后离心，凝血功能标本需以3000r/min离心10分钟，分离乏血小板血浆，2小时内完成PT、APTT检测，4小时内完成纤维蛋白原检测；急诊生化标本离心后立即检测。4.1.3血常规标本：EDTA-K2抗凝管采集后室温放置，1小时内完成白细胞分类，6小时内完成红细胞、血小板、血红蛋白检测，2~8℃保存可延长至24小时；网织红细胞检测需在采集后24小时内完成。4.1.4特殊项目处理：血氨标本采集后立即冰浴，4℃下3000r/min离心10分钟，分离血浆后30分钟内完成检测；肾素、血管紧张素标本4℃离心，分离血浆后-20℃保存待测。4.2尿液标本处理4.2.1尿常规标本：接收后1小时内完成检测，尿沉渣检测需取10ml混匀尿液，1500r/min（离心力约400g）离心5分钟，弃去上清液，留取0.2ml沉渣，混匀后涂片镜检。4.2.224小时尿标本：核对总尿量，混匀后取10ml，离心取上清液进行生化定量检测，结果需按总尿量换算为24小时排泄量。4.2.3尿培养标本：接收后立即接种，定量接种10μl尿液至血平板、麦康凯平板，35℃培养18~24小时观察结果，菌落计数≥10^5CFU/ml提示尿路感染。4.3微生物标本处理所有微生物标本处理必须在生物安全二级实验室的Ⅱ级生物安全柜内进行，操作人员穿工作服、戴医用外科口罩、乳胶手套、护目镜，严格无菌操作。标本接种后，平板置于35℃培养箱，按要求时间观察菌落形态，细菌鉴定采用质谱法或生化反应，阳性结果及时报告临床，危急值（如血培养阳性、脑脊液培养阳性）需在1小时内上报临床科室。4.4分子诊断标本处理严格遵循分区操作原则，标本制备、试剂配制、扩增检测分别在不同区域进行，避免交叉污染。核酸提取采用磁珠法或离心柱法，提取的核酸纯度要求A260/A280在1.8~2.0之间，浓度符合检测要求，提取后立即进行扩增检测，无法及时检测的-20℃保存，避免反复冻融。5标本保存与废弃管理5.1标本保存5.1.1保存原则：根据检测项目要求选择保存温度和时间，遵循“先检测后保存”原则，检测完成后按要求留存标本，便于结果复查、争议溯源。5.1.2常规标本保存：生化、免疫标本2~8℃保存7天；血常规标本2~8℃保存3天；尿液、粪便标本检测后不保存；脑脊液、浆膜腔积液标本2~8℃保存3天；微生物培养阳性标本保存至报告发出后14天；分子诊断阳性标本-80℃保存至少3个月；血型鉴定、交叉配血标本2~8℃保存7天。5.1.3特殊标本保存：亲子鉴定标本-20℃长期保存；罕见阳性标本（如稀有细菌、特殊基因突变）-80℃长期保存，用于科研及质量控制。5.2标本废弃5.2.1废弃标准：超过保存期限的标本、检测完成后无需留存的标本、不合格标本，均按感染性医疗废物处理。5.2.2废弃流程：标本置于黄色医疗废物袋中，密封后送高压灭菌室，采用121℃、103.4kPa高压灭菌20~30分钟，灭菌后由医院医疗废物管理部门统一转运至有资质的处置机构处理，做好废弃登记，包括标本数量、废弃时间、经办人、灭菌参数。5.2.3泄漏应急处理：标本发生泄漏时，立即用吸水纸覆盖泄漏区域，倾倒1000mg/L含氯消毒剂，作用30分钟后清理，清理时戴双层手套、穿防护服，被污染的台面、地面用消毒剂反复擦拭，接触泄漏标本的人员需进行职业暴露评估，做好记录。6常见不合格标本的结果影响6.1溶血标本：红细胞破裂后血红蛋白释放到血清/血浆中，当血浆游离血红蛋白浓度≥1g/L时，血清钾可升高0.2~0.3mmol/L，乳酸脱氢酶（LDH）活性升高10%~20%，门冬氨酸氨基转移酶（AST）升高5%~10%；同