CN119488608A 一种工程化双特异抗体偶联药物及其制备方法和应用 （上海药明合联生物技术有限公司）

一种工程化双特异抗体偶联药物及其制备本发明涉及一种工程化双特异抗体偶联药偶联药物的偶联物抗体比为2；所述药物负载的用双抗本身链间二硫键进行偶联而不引入任何2优选地，所述2个巯基分别位于第一Fab结构域与Fc结构域连接处和第二Fab结构域和5.根据权利要求4所述的工程化双特异抗体偶联6.一种根据权利要求1_5中任一项所述的工程化双特异抗体偶联药物的制备方法，其35,5'_二硫代双(2_硝基苯甲酸)、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸或烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸中苯基膦苯甲酸或三苯基膦三间磺酸中的任意一种或至10.一种根据权利要求1_5中任一项所述的工程化双特异抗体偶联药物在制备抗癌药4[0003]抗体偶联药物(Antibody_drugconjugates,ADC)通过抗体_抗原相互作用将细胞双抗ADC均采用引入工程反应性半胱氨酸残基或利用链间二硫键进行随机偶联的方式实现随机偶联的方式则会导致异质性ADC的产生。不同DAR值的产品混杂会阻碍治疗窗口的扩5[0014]优选地，所述2个巯基分别位于第一Fab结构域与Fc结构域连接处和第二Fab结构性地通过氨基酸工程改造产生空间效应从而有利于异二聚体形成而不利于同二聚体形成。[0022]所述MC_VC_PAB_MMAE的中文名称为马来酰亚胺己酰基_缬氨酸_瓜氨酸_对氨基苄括但不限于DNA损伤剂，DNA结合剂，酶抑制剂(如[0027]EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVLEDLKNVFPPEVAVFEPSEAEISHTQKATLVCLATGFYPDHVELSWWVNGKEVHSGVCTDPQPLKEQPALQDSRYALSSRLRVSATFWQNPRNHFRCQVQFYGLSENDEWTQDRAKPVTQIVSAEAWGRASDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKS6[0030]DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIKPDIQNPDCAVYQLRDSKSSDKSVCLFTDFDSQTQVSQSKDSDVYITDKCVLDMRSMDFKSNSAVAWSQKSDFACANAFQNSIIPE[0033]EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLV[0036]DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYIYPYTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSF[0039]EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVLEDLKNVFPPEVAVFEPSEAEISHTQKATLVCLATGFYPDHVELSWWVNGKEVHSGVCTDPQPLKEQPALQDSRYALSSRLRVSATFWQNPRNHFRCQVQFYGLSENDEWTQDRAKPVTQIVSAEAWGRASDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKS[0042]DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIKPDIQNPDCAVYQLRDSKSSDKSVCLFTDFDSQTQVSQSKDSDVYITDKCVLDMRSMDFKSNSAVAWSQKSDFACANAFQNSIIPE[0045]QVQLQQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTNYGMNWVKQAPGQGLKWMGWNTYTGEPTYTDDFKGRFAFSLDTSVSTAYLQISSLKADDTAVYFCARGGFGSSYWYFDVWGQGSLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLS7[0048]DIQLTQSPSSLSASVGDRVSITCKASQDVSIAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFAVYYCQQHYITPLTFGAGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSF后形成混合溶液进行静置，加入氧化剂进行氧化反应后加入淬灭氧化剂进行淬灭氧化反℃等。腺嘌呤二核苷酸或烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸中的任意一种或至少两种82_二苯基膦苯甲酸或三苯基膦三间磺酸(DiPPBS39SEQIDNO:1，第一轻链的氨基酸序列为SEQIDNO:2，第二重链的氨基酸序列为SEQID[0089](2)加入5,5'_二硫代双(2_硝基苯甲酸)至0.25mM，在12℃下反应1h。之后加入[0090](3)加入EDTA至浓度为5mM以捕获Zn2+，再加入溶解在二甲基乙酰胺中的MC_VC_[0091](4)使用超滤管(30K)将磷酸盐缓冲液置换成pH5.5，20mM的组氨酸缓冲液