二至丸检验规范

二至丸检验规范1范围本规范规定了二至丸的质量检验方法、判定规则以及检验过程中的注意事项，适用于二至丸的原料药检验、中间产品检验以及成品放行检验，涵盖实验室自检、委托检验以及监督抽查等各类检验场景，为二至丸的质量控制提供统一技术依据。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件；凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。《中华人民共和国药典》2025年版一部《中国药品检验标准操作规范》2023年版GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T27404实验室质量控制规范食品理化检测《药品生产质量管理规范》2010年修订版3检验原理二至丸由女贞子（蒸）、墨旱莲两味药材按1:1比例配伍制成，检验过程基于中药质量控制“性状-鉴别-检查-含量测定”四维控制体系，通过物理性状观察判断药品外观形态是否符合要求，利用薄层色谱法对处方中药材进行专属鉴别，通过检查项控制药品的安全性、均一性，采用高效液相色谱法测定特征成分含量，综合各项指标判定二至丸质量是否符合规定。4试剂与材料4.1试剂除非另有说明，所有试剂均为分析纯，色谱纯试剂用于含量测定，试验用水应符合GB/T6682中三级水的规定，含量测定用水为一级水。女贞子对照药材（中国食品药品检定研究院，批号：121042-202407）特女贞苷对照品（中国食品药品检定研究院，批号：111926-202405，含量以98.2%计）墨旱莲对照药材（中国食品药品检定研究院，批号：121203-202306）蟛蜞菊内酯对照品（中国食品药品检定研究院，批号：111884-202404，含量以96.5%计）硅胶G薄层板（青岛海洋化工厂，厚度0.2~0.25mm）甲醇、乙醇、乙酸乙酯、三氯甲烷、甲酸、乙醚等有机溶剂高效液相色谱用乙腈（色谱纯）、磷酸（色谱纯）中性氧化铝（100~200目）、硅藻土等吸附材料水合氯醛试液、稀甘油等显微制片试剂4.2仪器设备电子分析天平（感量0.01mg、0.1mg，梅特勒-托利多XSE205、ME204E型）高效液相色谱仪（配备二极管阵列检测器，安捷伦1260InfinityII型）薄层色谱成像系统（上海科哲GoodSee-20E型）超声波清洗器（功率250W，频率40kHz，昆山市超声仪器有限公司KQ-250DE型）恒温水浴锅（上海一恒HWS-26型）箱式电阻炉（上海精宏SX2-4-10型）干燥箱（上海一恒DHG-9070A型）电子显微镜（奥林巴斯CX33型）崩解时限测定仪（天津天大天发ZB-1E型）水分测定仪（梅特勒-托利多DL31型）无菌检查隔离器（泰林生物HTY-601型）微生物限度检查仪（赛多利斯MC-6型）5取样5.1取样原则按照《药品抽样指导原则》执行，遵循随机、均匀、代表性原则，避免取样过程中样品污染或成分变化。同一批次产品取样件数根据批量大小确定：批量n≤3件时逐件取样；4≤n≤300件时，取样件数为√n+1；n>300件时，取样件数为√n/2+1。每件取样量不少于检验用量的3倍，其中1/3用于检验，1/3用于复验，1/3作为留样。5.2取样方法成品取样从批产品的不同部位随机抽取独立包装单元，去除包装外层后，用洁净取样器从包装中心位置取样，装入洁净、干燥的棕色玻璃样品瓶中密封；原料药取样从药材包件的上、中、下不同部位分别取样，混合后作为检验样品；中间产品从制粒、干燥、总混、包装各工序的关键控制点取样，取样后标注样品名称、批号、取样日期、取样人等信息，及时送实验室检验。6检验项目及方法6.1性状检验取供试品适量，置于白色搪瓷盘内，在自然光下观察性状：二至丸为黑褐色的水蜜丸，气微，味甘而苦。观察有无粘连、变色、潮解、虫蛀、霉变等异常现象，记录性状特征。水蜜丸的粒度应符合丸剂项下要求，取供试品5袋，分别称定内容物重量，每袋装量与标示装量相比较，装量差异限度应在±5%以内，超出装量差异限度的不得多于2袋，且不得有1袋超出限度1倍。6.2显微鉴别取供试品，研细，取粉末少量置于载玻片上，滴加水合氯醛试液，透化后滴加稀甘油，盖上盖玻片，置显微镜下观察：果皮表皮细胞表面观类多角形，垂周壁薄，波状弯曲，胞腔含淡棕色物；内果皮纤维束上下层斜向或垂直交错排列，纤维梭形，直径12~25μm，壁厚，木化，纹孔及孔沟明显，为女贞子的显微特征。非腺毛多为3细胞，长260~700μm，基部细胞稍膨大，中部细胞较长，壁增厚，有明显疣状突起，顶端细胞急尖而短，近三角形；叶表皮细胞多角形，垂周壁波状弯曲，气孔不定式，副卫细胞3~4个，为墨旱莲的显微特征。上述两种显微特征应同时存在，缺一不可判定为不符合规定。6.3薄层色谱鉴别6.3.1女贞子薄层鉴别取供试品粉末2g，加乙醚30ml，加热回流30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。另取女贞子对照药材1g，同法制成对照药材溶液。再取特女贞苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸（40:1:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，且阴性对照样品（缺女贞子的阴性制剂）在相应位置无斑点。6.3.2墨旱莲薄层鉴别取供试品粉末3g，加乙醇30ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，加在中性氧化铝柱（100~200目，5g，内径为1~1.5cm）上，用40%乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取墨旱莲对照药材1g，同法制成对照药材溶液。再取蟛蜞菊内酯对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸（9:1:0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照样品（缺墨旱莲的阴性制剂）在相应位置无荧光斑点。6.4检查项6.4.1水分照水分测定法（烘干法）测定，取供试品粉末2~5g，平铺于干燥至恒重的扁形称量瓶中，厚度不超过5mm，精密称定，打开瓶盖在100~105℃干燥5小时，将瓶盖盖好，移置干燥器中，冷却30分钟，精密称定重量，再在上述温度干燥1小时，冷却，称重，至连续两次称重的差异不超过5mg为止。根据减失的重量，计算供试品中含水量，不得过12.0%。6.4.2崩解时限取供试品6丸，分别置于崩解时限测定仪的吊篮玻璃管中，启动仪器，在37℃±1℃的水中检查，各丸均应在1小时内全部崩解并通过筛网，如有1丸不能完全崩解，应另取6丸复试，均应符合规定。包衣丸的崩解时限为2小时，蜡丸应在人工胃液中检查2小时不得有裂缝、崩解或软化现象，再在人工肠液中检查，1小时内应全部崩解。6.4.3重量差异取供试品10丸，分别精密称定重量，计算平均丸重，每丸重量与平均丸重相比较，超出重量差异限度的不得多于2丸，并不得有1丸超出限度1倍。平均丸重0.1g及以下的重量差异限度为±10%，0.1g以上至0.3g为±8%，0.3g以上至1g为±7%，1g以上为±5%。6.4.4微生物限度照微生物限度检查法检查，细菌总数每1g不得过10^4cfu，霉菌和酵母菌总数每1g不得过10^2cfu，不得检出大肠埃希菌，含药材原粉的丸剂不得检出沙门菌。耐胆盐革兰阴性菌每1g不得过10^2cfu。6.4.5重金属及有害元素照铅、镉、砷、汞、铜测定法（原子吸收分光光度法或电感耦合等离子体质谱法）测定，铅不得过5mg/kg，镉不得过0.3mg/kg，砷不得过2mg/kg，汞不得过0.2mg/kg，铜不得过20mg/kg。6.4.6溶散时限除另有规定外，取供试品6份，分别加挡板，照崩解时限检查法检查，水蜜丸应在1小时内全部溶散，浓缩丸应在2小时内全部溶散，如有1份不能完全溶散，应另取6份复试，均应符合规定。6.4.7其他检查应符合丸剂项下有关的各项规定，包括外观均匀度、装量差异、微生物限度等，无粘连、变色、漏气等现象，包装材料应符合药用包装材料质量要求，直接接触药品的包装材料应经过相容性试验验证。6.5含量测定6.5.1特女贞苷含量测定照高效液相色谱法测定。色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.1%磷酸溶液（20:80）为流动相；检测波长为224nm。理论板数按特女贞苷峰计算应不低于4000。对照品溶液的制备：取特女贞苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含40μg的溶液，即得。供试品溶液的制备：取本品粉末（过三号筛）约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。本品每1g含女贞子以特女贞苷（C31H42O17）计，不得少于4.5mg。6.5.2蟛蜞菊内酯含量测定照高效液相色谱法测定。色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，0.1%磷酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为350nm。理论板数按蟛蜞菊内酯峰计算应不低于3000。时间（分钟）流动相A（%）流动相B（%）0~1020→3580→6510~2035→5065→5020~2550→2050→80对照品溶液的制备：取蟛蜞菊内酯对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含20μg的溶液，即得。供试品溶液的制备：取本品粉末（过三号筛）约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理（功率250W，频率40kHz）30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。本品每1g含墨旱莲以蟛蜞菊内酯（C16H10O7）计，不得少于0.6mg。7结果判定7.1合格判定所有检验项目均符合本规范及《中华人民共和国药典》2025年版一部二至丸项下规定的，判定为合格产品。其中含量测定项应同时满足特女贞苷和蟛蜞菊内酯的含量要求，薄层鉴别项应同时检出女贞子和墨旱莲的特征斑点，检查项所有指标均在规定限度范围内。7.2不合格判定出现下列情形之一的，判定为不合格产品：性状不符合规定，存在严重粘连、变色、霉变、虫蛀等现象；显微鉴别缺女贞子或墨旱莲的特征性显微结构；薄层鉴别未检出对应药材的特征斑点，或斑点位置与对照品、对照药材不一致；水分、崩解时限、重量差异、微生物限度等检查项有1项及以上不符合规定；特女贞苷或蟛蜞菊内酯含量低于规定限度；重金属及有害元素超出限度要求。7.3复验规则对检验结果有异议的，应在收到检验报告之日起7个工作日内提出复验申请，复验样品为留存的同批次样品，复验项目为异议项目。复验结果与原检验结果一致的，以原检验结果为准；复验结果与原检验结果不一致的，以复验结果为准，复验结论为最终结论。8检验记录与报告8.1检验记录检验过程中应及时、准确、完整地记录各项检验数据，记录内容包括样品信息、检验日期、检验依据、所用仪器设备编号、试剂批号、检验原始数据、计算过程、检验人签字、复核人签字等。记录不得涂改，如需修改，应在修改处签名并注明修改日期，保证原始数据可追溯。8.2检验报告检验完成后应出具规范的检验报告，报告内容包括样品名称、批号、规格、生产单位、检验类别、检验项目、检验结果、标准规定、单项判定、综合判定结论、检验人、审核人、批准人签字，检验机构盖章，报告日期等。检验报告一式三份，一份送检单位留存，一份检验机构留存，一份用于产品质量归档。9注意事项检验过程中使用的对照品应从合法渠道获取，在有效期内使用，对照品溶液应按规定条件储存，定期复标。薄层色谱展开前应预饱和15~30分钟，避免边缘效应影响斑点分离效果，展开剂应新鲜配制，重复使用次数不超过3次。高效液相色谱分析前应过滤流动相并超声脱气，进样前用流动相平衡色谱柱至少30分钟，每批样品测定后应冲