药理实验设计专家讲座

阿司匹林与可待因联合镇痛作用研究药理实验设计专家讲座第1页联络效果美国药典收载有复方阿司匹林胶囊，由阿司匹林、可待因和咖啡因组成，其中阿司匹林和磷酸可待因百分比为25:1，临床用于各种疼痛和发烧，疗效很好。

相同镇痛效果降低两药使用剂量减轻了两药副作用背景郑惠玲药理实验设计专家讲座第2页、药理实验设计专家讲座第3页是美国政府对药品质量标准和检定方法作出技术要求,也是药品生产、使用、管理、检验法律依据。NF收载了美国药典(USP)还未收入新药和新制剂。美国药典正文药品名目分别按法定药名字母次序排列,各药品条目大都列有药名、结构式、分子式、CAS登记号、成份和含量说明、包装和贮藏规格、判定方法、干燥失重、炽灼残渣、检测方法等常规项目,正文之后还有对各种药品进行测试方法和要求通用章节及对各种药品普通要求通则。美国药典药理实验设计专家讲座第4页★一个国家记载药品标准、规格法典,普通由国家药品监督管理局主持编纂、颁布实施,国际性药典则由公认国际组织或相关国家协商编订。

药典由国家药品监督管理局主持编纂、颁布实施,国际性药典则由公认国际组织或相关国家协商订。

制订药典是从本草学、药品学以及处方集编著演化而来。药典主要特点是它法定性和体例规范化。特点药理实验设计专家讲座第5页药理实验设计专家讲座第6页我们依据国外上市品种处方百分比设计了复方阿司匹林片,并经过几个动物模型对阿司匹林与磷酸可待困镇痛协同作用进行了研究。

阿司匹林可待因7药理实验设计专家讲座第7页阿司匹林镇痛机制唐广博药理实验设计专家讲座第8页阿司匹林主要是经过抑制前列腺素及其它能使痛觉对机械性或化学性刺激敏感物质(如缓激肽、组胺)合成，属于外周性镇痛药。PG是一族含有一个五碳环和两条侧链二十碳不饱和脂肪酸，各种细胞都可合成。

细胞中花生四烯酸以磷脂形式存在于细胞膜中。各种刺激原因可激活磷脂酶A，使花生四烯酸从膜磷脂中释放出来。

游离花生四烯酸经细胞微粒体内环氧酶(COX)催化生成各种PG，其中PGE2主要参加疼痛调整。

药理实验设计专家讲座第9页COX是前列腺素类化合物生物合成关键酶，在体内有两种同工酶：COX-1与COX-2，COX-1是结构酶，正常生理情况下即存在，主要介导生理性前列腺素类物质形成。COX-2是诱导酶，在生理状态下基本不表示，在炎性刺激（如发烧)刺激下大量生成，介导花生四烯酸转化产生PGE2和PGI2，含有很强制痛作用。

药理实验设计专家讲座第10页可待因镇痛机制药理实验设计专家讲座第11页在体内存在有“抗痛系统”，它由脑啡肽神经元、脑啡肽及阿片受体共同组成。去极化或刺激脑啡肽神经通路可引发脑啡肽释放，并依赖于钙离子。在正常情况下约有20%～30%阿片受体与脑啡肽结合，起着疼痛感觉调控作用，维持正常痛阈，发挥生理性止痛机能，可待因作用是激动阿片受体，激活了脑内“抗痛系统”，阻断痛觉传导，产生中枢性镇痛作用。药理实验设计专家讲座第12页脊髓水平上网状结构、丘脑、大脑皮层等均参加疼痛调整机制,其通路复杂,也需要各种神经递质传递信号,在这些部位,阿片受体极为丰富,是可待因参加调整疼痛主要基础。

药理实验设计专家讲座第13页热板致痛原理于帆药理实验设计专家讲座第14页痛反应阈值:又称痛阈值,是疼痛刺激引发应激组织反应最低值,为临界值意思。也就是刺激生物体系时,即使对小刺激不反应,但当超出某程度时就会激烈反应界限值。

是机体对外力刺激最大承受能力,痛阈值越高,承受疼痛能力越强,反之越弱。

间接测量药理实验设计专家讲座第15页痛阈值提升是身体正常调整机制,是合理、有益调整。

痛阈值提升,并不表示刺激也要对应增强。如果刺激量超出了正常范围,但还未到达痛阈值,很有可能会在感觉不痛情况下受伤。

不可盲目用药药理实验设计专家讲座第16页将小鼠置于一定温度热板上,热刺激小鼠足部产生痛反应,即舔足反应。以小鼠出现舔足时间作用为痛反应指标,判断药品镇痛作用好坏。

热板致痛法控温准确计时准确发烧均匀药理实验设计专家讲座第17页选取生长情况相近且适于试验小鼠并分组测定给药前各组动物痛反应阈值分别给予不一样剂量阿司匹林、磷酸可待因和复方混合物热板测痛仪测其用药后痛阈值（指标)统计并分析思绪药理实验设计专家讲座第18页试验动物、器材和药品肖健林药理实验设计专家讲座第19页试验动物:雌性昆明小鼠(18g—22g)药理实验设计专家讲座第20页普通试验选择小鼠原因:1.哺乳动物,解剖和生理结构与人较相同2.体型小,喂养管理方便3.生长久短,成熟早,繁殖力强4.性情温顺,胆小怕惊,对环境改变敏感5.种系纯,轻易作比较,能够排除不一样种系干扰原因

药理实验设计专家讲座第21页选择昆明小鼠（Kunmingmice，KM小鼠)原因：起源：1926年美国Rockfeller研究所从瑞士引入白化小鼠培育成Swiss小鼠

。1944年3月17日由汤飞凡教授从印度Hoffkine研究所引进Swiss小鼠，喂养在昆明中央防疫处。因为该小鼠起初引入地是昆明，故称之为昆明小鼠。解放后中央防疫处迁回北京天坛，更名为卫生部生物制品研究所。1950年小鼠随之引到北京天坛（检定所现址)，当初保种9对。1953年10月移至北京东郊，1954年扩种，相继引到其它单位，现已遍布全国各地。

药理实验设计专家讲座第22页主要特征:KM小鼠是我国生产量、使用量最大远交群小鼠。基因库大，基因杂合率高，我国学者已从KM小鼠远交群中先后培育出不少近交系小鼠。经50多年选育，现在KM小鼠肿瘤自发率极低。不一样地喂养昆明小鼠封闭群生长发育与繁殖性能存在一定差异，但其共同特点是抗病力和适应力很强，繁殖率和成活率高。它在我国生物医学动物试验中约为小鼠总用量70%。

药理实验设计专家讲座第23页选择雌性小鼠普通原因1.雌鼠性情温顺,公鼠易打斗2.雌鼠免疫反应强本试验选择雌性小鼠原因是?药理实验设计专家讲座第24页试验器材YLS-6B智能热板仪、1mL注射器、12号灌胃针头三个关键

1.表面导热性和光洁度

2.温度控制

3.计时准确程度药理实验设计专家讲座第25页药品配制75mg/mL阿司匹林溶液、3mg/mL磷酸可待因溶液，二者按1：1体积比配制混合溶液（25:1)、生理盐水药理实验设计专家讲座第26页试验步骤与分组宋毅涵药理实验设计专家讲座第27页试验步骤与分组1)先测定给药前各组动物痛反应阈值，选取体重在18g一22g，痛阈值在5～30s雌性小鼠，随机分成15组,并编号1—20，每组20只小鼠。试验室温度控制在20℃～25℃。

药理实验设计专家讲座第28页2)1-5组、5-10组、11-15组、15-20组分别注射0.10mL、0.20mL、0.30mL、0.40mL、0.50mL阿司匹林溶液（50mg/mL)、

磷酸可待因溶液（2mg/mL)、混合溶液（25：1)和生理盐水3)于给药后1h分别将各组小鼠置于55℃±0．5℃热板测痛仪金属板上，以舔后足作为痛反应指标，统计小鼠投入热板至舔后足时间作为痛反庙闺值，以痛反应阈值超出60S作为有效指标，计数痛反应时间超出60s动物数，药理实验设计专家讲座第29页小鼠捉拿从笼盒内将小鼠尾部捉住并提起,放在笼盖(或表面粗糙物体)上,轻轻向后拉鼠尾,在小鼠向前摆脱时,用左手(熟练者也可用同一只手)拇指和食指抓住两耳和颈部皮肤,无名指,小指和手掌心夹住背部皮肤和尾部,并调整好动物在手中姿势。

药理实验设计专家讲座第30页小鼠灌胃1.

准备灌胃针头。普通能够从市场上面买到,实在没有话,能够用12号针头,剪去针尖,用砂纸将头端磨平,也能够用。不过买灌胃针头头端用锡或者适宜方法处理了针头锐口,自己用砂纸不可能将全部锐口都磨掉,用这么针头灌胃,损失小鼠食道可能性比较大。药理实验设计专家讲座第31页2.

抓住小鼠,使其头、颈和身体呈一直线。抓小鼠动作很简单,左手小指和无名指抓住小鼠尾巴,另外三个手指抓住小鼠颈部即可。因为小鼠一直在活动中,若一次抓感觉不是很顺手,要放开重新抓,不要逞强进行下一步操作。

药理实验设计专家讲座第32页3.

抓好小鼠就能够灌胃了,普通用1ml注射器配灌胃针头。灌胃针头从小鼠嘴角进入,压住舌头,抵住上颚,轻轻向内推进,进入食管后会有一个刺空感,进入食道后就能够推注药液了。4.灌胃容积普通是0.1～0.2ml/10g,最大0.35ml/10g,每只小鼠灌胃最大容积不超出0.8ml。

药理实验设计专家讲座第33页结果分析张敏洁药理实验设计专家讲座第34页结果分析生理盐水（mg/kg)生理盐水（mg/kg)生理盐水（mg/kg)生理盐水（mg/kg)生理盐水（mg/kg)生理盐水（mg/kg)生理盐水（mg/kg)生理盐水（mg/kg)生理盐水（mg/kg)生理盐水（mg/kg)生理盐水（mg/kg)生理盐水（mg/kg)生理盐水（mg/kg)生理盐水（mg/kg)生理盐水（mg/kg)生理盐水（mg/kg)生理盐水（mg/kg)生理盐水（mg/kg)表1.生理盐水灌胃小鼠热板致痛反应（n=20)药理实验设计专家讲座第35页结果分析阿司匹林（mg/kg)阿司匹林（mg/kg)阿司匹林（mg/kg)阿司匹林（mg/kg)阿司匹林（mg/kg)阿司匹林（mg/kg)阿司匹林（mg/kg)阿司匹林（mg/kg)阿司匹林（mg/kg)阿司匹林（mg/kg)阿司匹林（mg/kg)阿司匹林（mg/kg)阿司匹林（mg/kg)阿司匹林（mg/kg)阿司匹林（mg/kg)阿司匹林（mg/kg)阿司匹林（mg/kg)阿司匹林（mg/kg)表2.阿司匹林对小鼠热板致痛反应镇痛作用（n=20)药理实验设计专家讲座第36页结果分析磷酸可待因（mg/kg)磷酸可待因（mg/kg)磷酸可待因（mg/kg)磷酸可待因（mg/kg)磷酸可待因（mg/kg)磷酸可待因（mg/kg)磷酸可待因（mg/kg)磷酸可待因（mg/kg)磷酸可待因（mg/kg)磷酸可待因（mg/kg)磷酸可待因（mg/kg)磷酸可待因（mg/kg)磷酸可待因（mg/kg)磷酸可待因（mg/kg)磷酸可待因（mg/kg)磷酸可待因（mg/kg)磷酸可待因（mg/kg)磷酸可待因（mg/kg)表3.磷酸可待因对小鼠热板致痛反应镇痛作用（n=20)药理实验设计专家讲座第37页结果分析复方混合物（阿司匹林：磷酸可待因=25：1)（mg/kg)复方混合物（阿司匹林：磷酸可待因=25：1)（mg/kg)复方混合物（阿司匹林：磷酸可待因=25：1)（mg/kg)复方混合物（阿司匹林：磷酸可待因=25：1)（mg/kg)复方混合物（阿司匹林：磷酸可待因=25：1)（mg/kg)复方混合物（阿司匹林：磷酸可待因=25：1)（mg/kg)复方混合物（阿司匹林：磷酸可待因=25：1)（mg/kg)复方混合物（阿司匹林：磷酸可待因=25：1)（mg/kg)复方混合物（阿司匹林：磷酸可待因=25：1)（mg/kg)复方混合物（阿司匹林：磷酸可待因=25：1)（mg/kg)复方混合物（阿司匹林：磷酸可待因=25：1)（mg/kg)复方混合物（阿司匹林：磷酸可待因=25：1)（mg/kg)复方混合物（阿司匹林：磷酸可待因=25：1)（mg/kg)复方混合物（阿司匹林：磷酸可待因=25：1)（mg/kg)复方混合物（阿司匹林：磷酸可待因=25：1)（mg/kg)复方混合物（阿司匹林：磷酸可待因=25：1)（mg/kg)复方混合物（阿司匹林：磷酸可待因=25：1)（mg/kg)复方混合物（阿司匹林：磷酸可待因=25：1)（mg/kg)表4.复方混合物对小鼠热板致痛反应镇痛作用（n=20)药理实验设计专家讲座第38页对比表1.表2.&表3.若复方混合物镇痛有效率大于阿司匹林、磷酸可待因镇痛有效率，则两种药品之间含有协同镇痛作用。若复方混合物镇痛有效率小于阿司匹林、磷酸可待因镇痛有效率，则两种药品之间含有拮抗镇痛作用。若复方混合物镇痛有效率等于阿司匹林、磷酸可待因镇痛有效率，则两种药品之间无相互作用。

在对应

药品剂量

比条件下,

比较镇痛

有效率。

药理实验设计专家讲座第39页结果分析受试药品名ED50（mg/kg）95%可倍限（mg/kg）阿司匹林磷酸可待因复方混合物生理盐水表5.阿司匹林、磷酸可待因以及二者复方对小鼠热板致痛反应镇痛ED50ED50：半数有效量。在量反应中指能引发50%最大反应强度药量，在质反应中指导起50%试验对象出现阳性反应时药量。LD50：半数惊厥量或半数致死量。（药品ED50越小，LD50越大说明药品越安全。)95%可倍限：在此剂量范围内95%试验对象出现阳性反应。

药理实验设计专家讲座第40页注意事项选择雌性小鼠以防止雄性小鼠阴囊与Woolfe热板接触而影响试验结果为尽可能降低个体差异，应事先筛选痛阈小于30秒小鼠作为试验鼠试验室室温应在15℃左右，Woolfe热板温度55℃左右；痛阈超出60秒小鼠应马上取出以免烫伤各组给药后观察痛阈时间要一致吴紫薇药理实验设计专家讲座第41页可行性分析罗欣然药理实验设计专家讲座第42页1.本试验操作简单，不需要过多专业操作技术;经过舔后足、扭体反应和痛反应时间作为效应指标，直观、易测;2.热板测痛仪能较准确地调定温度，且温度较恒定，不会因为温度过高而使小鼠提前死亡，同时能较少试验误差;3.阿司匹林和可待因有很好镇痛作用，效果显著，而且有显著浓度梯度差异，在本试验中能在较短时间内观察到伴随浓度改变而改变镇痛有效率。技术可行性药理实验设计专家讲座第43页1.本试验用昆明种小鼠和Wistar大鼠轻易购得、繁殖能力强，个体差异相对较小，适适用于本试验;2.阿司匹林和可待因是惯用镇痛药，价格低廉，轻易取得，可购置充分药品用于试验;经济可行性药理实验设计专家讲座第44页讨论&小结闫睿药理实验设计专家讲座第45页