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文档简介

实验4蛋白质的沉淀反应

双缩服反应

当尿素经加热至1800c左右时，两分子尿素脱去一分

子氨，进而缩合成一分子双缩股。其在碱性条件下双缩版

与铜离子结合成红紫色络合物，此反应称为双缩版反应。

多肽及蛋白质分子结构中均含有许多肽键，其结构与双缩

服分子中的亚酰胺键相同。因此，在碱性条件下与铜离子

也能呈现出类似于双缩版的呈色反应。其反应过程如下:

NH2

R-CHH

H

o=cRN一C=0

加0H-

+Cu

R-CH

0=C0=C一

NH

R-CH

2苛三酮反应

在弱酸条件下（pH5-7）,蛋白质或氨基酸与苗三酮

共热，可生成蓝紫色缩合物。此反应为一切蛋白质和。一

氨基酸所共有（亚氨基酸如脯氨酸和羟脯氨酸产生黄色化

合物）。含有氨基的其他化合物亦可发生此反应。

第一步：

第二步：

II

oo

3黄色反应

在蛋白质分子中，具有芳香环的氨基酸（如酪氨酸，

色氨酸等）残基上的苯环经硝酸作用可生成黄色的硝基化

合物，在碱性条件下生成物可转变为桔黄色的硝醍衍生物，

反应为：

蛋白质分子含有带苯环的氨基酸，所以都会发生黄色反应。

苯丙氨酸不易硝化,需加少量浓硫酸后才能够发生黄色反应。

4考马斯亮蓝反应

考马斯亮蓝G25（XR250）具有红色和蓝色两种色调。

在酸性溶液中，其以游离态存在呈棕红色；当它与蛋白质

通过疏水作用结合后变为蓝色。它染色灵敏度高，比氨基

黑高3倍。反应速度快，约在2分钟左右时间达到平衡，

在室温一小时内稳定。在0.01~1.0mg蛋白质范围内，

蛋白质浓度与A595nm值成正比。所以常用来测定蛋白质

含量。

Go1

5蛋白质的盐析作用

盐析现象是指一般蛋白质在高浓度盐溶液中溶解度

下降，故向其溶液中加入中性盐至一定浓度时，蛋白质即

自溶液中沉淀析出。盐析作用与两种因素有关：①蛋白质

分子被浓盐脱水；②分子所带电荷被中和。

6重金属盐类沉淀蛋白质

溶液pH在蛋白质等电点以上时，重金属盐类（如Pb?+、

Cu2\Hg2+及Ag+等）易与蛋白质结合成不溶性盐而沉淀。

重金属盐类沉淀蛋白质通常比较完全，故常用重金属盐除

去液体中的蛋白质。但应注意，在使用某些重金属盐（如

硫酸铜或醋酸铅）沉淀蛋白质时，不可过量，否则将引起

沉淀再溶解。

7有机酸沉淀蛋白质

生物碱是植物中具有显著生理作用的一类含氮的碱

性物质。凡能使生物碱沉淀，或能与生物碱作用产生颜色

反应的物质，称为生物碱试剂。如猱酸、苦味酸和磷锯酸

等。当蛋白质溶液pH值低于其等电点时，蛋白质为阳

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