2026年全自动样本前处理仪考核试题及答案

2026年全自动样本前处理仪考核试题及答案一、单项选择题（本大题共20小题，每小题1.5分，共30分。在每小题列出的四个备选项中只有一个是符合题目要求的，请将其代码填在题后的括号内。）1.2026年新型全自动样本前处理仪在液体处理模块中，为了实现高精度微量移液（如<1μL），最常采用的核心技术是（）。A.空气置换原理B.活塞正压置换原理C.蠕动泵输液原理D.重力自流原理2.在全自动固相萃取（SPE）系统中，为了确保目标化合物的高回收率，填料活化步骤的主要目的是（）。A.去除填料中的杂质B.溶剂化填料表面，创造适宜的吸附环境C.预平衡样本pH值D.增加柱床体积，提高载样量3.根据ISO20387:202X标准对生物样本库自动化设备的要求，样本前处理仪在处理冷冻样本时，为了防止样本反复冻融，通常配备的温控模块精度应达到（）。A.±5.0℃B.±2.0℃C.±0.5℃D.±0.1℃4.全自动样本前处理仪在进行高通量药物筛选时，若溶剂具有高挥发性且易产生气泡，导致移液体积不准，最有效的硬件解决方案是（）。A.增加移液速度B.采用防滴漏尖端并具备液面探测（LLD）后的气泡检测功能C.减小移液通道内径D.预先加热溶剂至沸腾5.在全自动氮吹浓缩模块中，控制浓缩终点的最关键技术是（）。A.氮气压力的恒定控制B.水浴温度的线性上升C.光电传感器或图像识别技术对液位的实时监控D.样本瓶的几何形状标准化6.某型号全自动前处理仪采用陶瓷移液泵，其主要优势在于（）。A.成本低廉，易于更换B.耐腐蚀性极强，适合强酸强碱及有机溶剂C.透明度高，便于观察气泡D.导热性好，适合温控移液7.在全自动蛋白沉淀法操作中，仪器加入沉淀剂（如乙腈）后，为了确保沉淀完全，通常进行的均一化处理是（）。A.高速离心（>10000rpm）B.涡旋振荡或高频摇匀C.超声波破碎D.静置孵育8.关于全自动样本前处理仪的交叉污染控制，下列描述中错误的是（）。A.采用具备表面疏水涂层（如SiO2）的移液枪头可有效减少液体挂壁残留B.设置独立的清洗站，使用强清洗剂冲洗外壁是标准流程C.移液通道内壁的残留是主要污染源，必须定期进行泵体清洗维护D.为提高效率，在进行不同项目切换时，无需进行清洗程序直接移液9.2026年主流前处理仪软件系统集成了LIMS（实验室信息管理系统）功能，其核心数据交换协议通常基于（）。A.XML自定义格式B.HL7标准C.ASTM标准或OPCUA协议D.纯文本CSV格式10.在液液萃取（LLE）自动化模块中，为了实现两相的高效分离，通常采用的物理手段是（）。A.离心力沉降结合精密移液B.膜过滤分离C.活性炭吸附D.柱层析分离11.全自动均质器在处理生物组织样本（如肝脏、肌肉）时，为了防止过热导致目标物降解，通常采用的制冷技术是（）。A.液氮浸泡制冷B.压缩机制冷（通常控制在4℃左右）C.半导体制冷D.风冷散热12.计算移液精度的相对标准偏差（RSD）公式为（）。A.RB.RC.RD.R13.在全自动QuEChERS（快速、简单、便宜、有效、耐用、安全）方法应用中，仪器自动完成净化步骤主要依赖（）。A.大体积固相萃取柱B.分散固相萃取剂（如PSA、C18、GCB）的加入与涡旋离心C.亲和层析填料D.免疫亲和磁珠14.若仪器在进行酸消解前处理时，需使用氢氟酸（HF），下列哪种材料的管路或容器是绝对禁止使用的？（）A.聚四氟乙烯（PTFE）B.聚丙烯（PP）C.全氟烷氧基树脂（PFA）D.硼硅酸盐玻璃15.全自动样本前处理仪的“抓板手”机械臂在抓取微孔板时，为了保证定位精度，最常用的传感器组合是（）。A.温度传感器+湿度传感器B.电容式传感器+机械限位开关C.激光测距传感器+视觉定位系统（相机）D.红外热像仪16.在进行内标法校准的自动化操作中，仪器加入内标的最佳时机通常是（）。A.样本提取完成后B.样本净化完成后C.样本称重/提取初始阶段，与提取溶剂同时加入D.进样分析前瞬间由仪器加入17.为了避免高浓度样本对低浓度样本的记忆效应（Carry-over），全自动进样针的清洗策略通常为（）。A.仅用纯水清洗一次B.先用强溶剂洗目标物，再用弱溶剂洗溶剂，最后用空气吹扫C.仅用弱溶剂清洗D.不清洗，依靠物理挥发18.2026年推出的智能型前处理仪在异常处理方面，引入了AI辅助诊断，其核心算法主要基于（）。A.固定的决策树逻辑B.机器学习对历史报警数据的模式识别C.简单的随机数生成D.操作员的手动复位指令19.在全自动在线SPE-LC联用系统中，切换流路的阀通常采用的是（）。A.手动多通阀B.两位六通或十通高压切换阀C.单向阀组合D.截止阀20.评价一台全自动样本前处理仪的综合性能，首要考察的指标trio（三要素）是（）。A.价格、外观、品牌B.准确度、精密度、通量C.体积、重量、功耗D.噪音、速度、颜色二、多项选择题（本大题共10小题，每小题3分，共30分。在每小题列出的五个备选项中至少有两个是符合题目要求的，请将其代码填在题后的括号内。多选、少选、错选均不得分。）1.全自动样本前处理仪的移液模块进行定期校验时，需要考察的关键性能指标包括（）。A.准确度B.精密度C.线性度D.移液速度E.通道间的一致性2.导致全自动移液工作站出现移液体积偏差偏大的可能原因有（）。A.移液尖未正确压紧，导致气密性泄漏B.样品温度与实验室环境温度差异过大（如4℃样品vs25℃环境）C.液面探测（LLD）灵敏度设置不当，导致插入深度错误D.溶剂粘度远超水的粘度且未进行补偿E.仪器外壳灰尘较多3.下列关于全自动固相萃取（SPE）方法开发中填料选择的描述，正确的有（）。A.非极性目标物通常选择C18、C8等反相填料B.极性目标物在非极性溶剂中可使用硅胶、氧化铝等正相填料C.离子型化合物通常选择离子交换填料，需注意pH控制以使其呈离子状态D.对于复杂基质（如血液、土壤），通常使用混合模式填料以增强选择性E.所有填料在使用前都无需活化，直接上样即可节省时间4.全自动样本前处理仪在处理易挥发有机物分析时，为了防止挥发损失，系统通常会采取的措施包括（）。A.使用带有密封垫或压盖功能的样品位B.在低温环境（如4℃）下进行操作C.采用密闭式的移液针头D.增加氮气吹扫流速E.延长样本在开放环境中的暴露时间5.仪器维护中，关于管路清洗的描述，正确的有（）。A.每日运行结束后，通常用去离子水清洗管路B.若使用过盐溶液或缓冲液，必须先用高纯水冲洗，再用有机溶剂冲洗C.长期不使用时，应排空管路液体，保持干燥D.可以直接使用强腐蚀性洗液（如浓硫酸）清洗常规泵体，无需查看说明书E.对于蛋白质污染，需使用专业酶清洗液进行处理6.全自动均质破碎系统的类型主要包括（）。A.拍击式均质器（如珠磨法）B.超声波均质器C.研磨珠震动均质D.高压匀浆泵E.手动玻璃研钵7.影响全自动氮吹浓缩效率的主要因素有（）。A.氮气流速B.水浴加热温度C.氮气吹扫角度（与液面接触方式）D.样本瓶的几何形状（特别是底面积）E.实验室的大气压强8.2026年高端全自动样本前处理仪在软件合规性方面，为了满足FDA21CFRPart11要求，必须具备的功能有（）。A.独立的用户权限管理（分级登录）B.完整的电子审计追踪C.不可篡改的电子签名D.历史数据自动备份与恢复E.允许随意删除已运行的历史记录9.全自动样品前处理中，常见的液液萃取辅助手段包括（）。A.盐析效应（加入氯化钠等无机盐）B.pH调节C.涡旋混合D.离心分层E.柱吸附过滤10.针对中药或天然产物复杂基质的全自动前处理，下列哪些技术组合是合理的？（）A.超声提取+固相萃取净化B.加压溶剂萃取（PLE）+凝胶渗透色谱（GPC）净化C.微波辅助提取+QuEChERS净化D.简单浸泡+直接进样E.手动过滤+机器移液三、填空题（本大题共20空，每空1分，共20分。请将正确答案填在题中横线上。）1.全自动移液工作站的液体探测技术主要分为接触式（如导电探测）和非接触式（如__________探测）。2.在定量分析中，加标回收率的计算公式为：。3.为了消除基质效应对定量结果的影响，全自动前处理仪常采用__________法进行校准，即向所有样本（包括标准品和待测样）中加入等量的内标物质。4.自动移液系统中，活塞泵的冲程体积与移液体积的关系取决于__________的直径。5.在全自动固相萃取过程中，淋洗步骤的目的是洗去干扰物，而__________步骤的目的是将目标物从吸附剂上洗脱下来。6.2026年新型仪器中，为了防止移液针头在抓取枪头时发生偏差，通常采用了__________定位技术。7.高通量药物筛选中，常用的384孔板和1536孔板对移液的__________要求比96孔板更高。8.全自动样本前处理仪的机械臂抓取微孔板时，若重心不稳导致滑落，通常是因为__________设置不合理或抓力不足。9.在环境水样自动前处理中，为了富集痕量有机物，常采用大体积__________技术。10.自动化系统中的急停按钮颜色应为__________色，按下后应切断所有运动部件的驱动电源。11.移液精度的另一个专业术语是变异系数，其英文缩写为__________。12.对于容易产生泡沫的生物样品（如血浆、血液），自动化移液时应选择__________模式的吸液策略（如“慢速吸液”或“反向吸液”）。13.全自动氮吹仪中，为了防止暴沸和交叉污染，针尖通常设计为__________型或多孔分散型。14.在色谱分析前处理中，为了去除颗粒物保护色谱柱，自动化系统最后一步通常是进行__________操作。15.全自动配液系统在配制不同浓度的标准曲线时，采用的算法通常是__________稀释法或单一浓度递归稀释法。16.仪器维护日志中，记录更换活塞密封圈的日期属于__________维护。17.某全自动前处理仪的XYZ轴移动采用步进电机驱动，其最小步进距离决定了仪器的__________。18.在处理强酸消解后的样本时，移液针头材质必须选用耐腐蚀的__________材料。19.全自动前处理流程中，若某一移液步骤失败，软件系统应触发__________机制，暂停运行并提示操作员。20.样本管条形码读取失败，常见原因包括条码污染、褶皱或__________设置不当。四、判断题（本大题共10小题，每小题1分，共10分。你认为正确的打“√”，错误的打“×”。）1.空气置换式移液原理受大气压和温度的影响较大，而正压置换式（注射泵）受影响较小，更适合高粘度液体移液。（）2.全自动样本前处理仪在运行过程中，操作人员可以随时打开机箱门查看进度而无需暂停。（）3.为了提高效率，在进行不同性质的有机溶剂切换时（如从二氯甲烷切换到甲醇），可以直接互洗，无需中间过渡溶剂。（）4.自动化固相萃取中，若发生干柱现象（填料变干），可能会导致填料产生裂缝，影响回收率和重现性。（）5.移液工作站的内壁冲洗功能是指吸取液体后再排回原容器，重复几次，主要用于清洗容器内壁。（）6.所有全自动样本前处理仪都具备离心功能，只需将离心模块集成即可。（）7.使用含盐缓冲液进行自动化移液后，若不及时清洗，泵体内部容易产生结晶，导致堵塞或密封性下降。（）8.机器视觉系统在自动化前处理中仅用于读取条形码，无法用于识别液面或孔板状态。（）9.电子记录中，审计追踪功能可以记录谁在什么时间修改了哪个方法参数。（）10.自动稀释样本时，若浓度跨度较大（如100倍稀释），必须分步进行，一次性稀释会导致误差过大。（）五、简答题（本大题共5小题，每小题8分，共40分。）1.请简述全自动样本前处理仪中“空气置换式”与“正压置换式”移液原理的区别，并说明各自的适用场景。2.在全自动固相萃取（SPE）方法开发中，若发现目标物的回收率偏低，请列举至少四种可能的原因及相应的排查/解决思路。3.某实验室的全自动移液工作站近期出现移液精度（RSD）异常波动（>5%），请作为维修工程师列出详细的故障排查步骤。4.简述全自动样本前处理仪软件符合GMP/GLP规范（如FDA21CFRPart11）的核心要素有哪些？5.在进行高粘度样品（如血液、油脂、甘油）的自动化移液时，应采取哪些技术措施以保证移液的准确度和精密度？六、计算与分析题（本大题共2小题，每小题15分，共30分。）1.加标回收率计算与评价某实验室使用全自动样本前处理仪对某一食品基质中的农药残留进行加标回收实验。已知：样品的本底测定值为0.05mg/kg。向该样品中加入0.20mg/kg的标准品（即加标量为0.20mg/kg），经仪器自动前处理及分析后，测定值为0.248mg/kg。请计算：(1)该样品的加标回收率。(2)若该方法要求回收率范围在80%-110%之间，请判断该结果是否合格？若不合格，请分析可能的原因。2.移液线性与误差分析对一台全自动移液工作站的1000μL通道进行校准，设定目标体积为1000μL，使用电子天平称重法（假设水温20℃，密度ρ=测得质量数据如下（单位：g）：0.9965,0.9982,0.9970,0.9988,0.9955,0.9978,0.9962。请计算：(1)平均质量¯m(2)平均体积¯V(3)系统误差（准确度Error），以绝对误差（μL）和相对误差（%）表示。(4)相对标准偏差（RSD%）。(5)依据常用的计量性能指标（如误差<1.0%，RSD<0.5%），判断该通道是否需要重新校准。七、综合应用与案例分析题（本大题共2小题，第1题25分，第2题35分，共60分。）1.案例一：全自动固相萃取（SPE）流程异常排查背景：某第三方检测实验室引入了一台2026年新型全自动固相萃取仪，用于检测环境水样中的多环芳烃（PAHs）。方法流程为：活化（5mL二氯甲烷，5mL甲醇）->平衡（5mL纯水）->上样（500mL水样）->淋洗（5mL40%甲醇水）->洗脱（5mL二氯甲烷）->氮吹浓缩->定容。问题现象：在最近的一批次20个样本运行中，前5个样本的回收率正常（85%-95%），但从第6个样本开始，回收率逐渐下降，第20个样本的回收率仅为45%。且所有样本的平行性变差。分析要求：(1)根据现象描述，判断最可能的故障类型是属于仪器硬件故障、方法学问题还是耗材问题？(2)结合SPE原理，详细分析导致“回收率随样本批次逐渐下降”的三种具体技术原因。(3)针对上述分析，请设计一套具体的排查方案（包括检查步骤和验证方法）。(4)如果确认是洗脱溶剂流穿问题，应如何调整仪器参数或方法设置？2.案例二：高通量药物代谢实验前处理方案设计与验证背景：某药企研发中心需要筛选500个化合物对肝细胞CYP450酶的抑制活性。实验流程如下：1.在96孔板中加入肝细胞孵育体系。2.加入待测化合物（DMSO储备液稀释）。3.孵育30分钟。4.加入终止剂（含内标物的乙腈）。5.高速离心（或过滤）去除蛋白。6.上清液转移至新96孔板进行LC-MS/MS分析。任务：作为技术专家，请利用全自动样本前处理仪设计并验证该方案。设计要求：(1)移液策略设计：针对DMSO储备液（粘度大，易挥发）和微量添加（如0.1μL到100μL体系中），应选择何种类型的移液泵和针头？如何避免交叉污染？(2)流程逻辑优化：请画出（或用文字描述）仪器自动完成上述6个步骤的逻辑控制流程（注意时间控制和板位切换）。(3)验证方案：在正式运行前，需要进行方法验证。请列出针对该自动化方案必须验证的关键参数（至少4个），并说明如何利用仪器进行验证（如配制梯度浓度考察线性）。(4)异常处理：如果在第3步孵育过程中，仪器温控模块报警显示温度失控（偏离37℃），自动化软件系统应如何响应以保证样本完整性？请设计一个应急逻辑。(5)通量计算：若仪器完成一块96孔板的所有前处理步骤耗时45分钟，每天运行20小时（预留4小时维护），计算该仪器3天内能否完成500个化合物（每个化合物做3复孔）的筛选？请列出计算过程。答案及解析一、单项选择题1.B解析：正压置换（注射泵）直接通过活塞推动液体，受气压和温度影响小，适合高粘度、挥发性及微量液体的移液。2.B解析：活化目的是溶剂化填料表面，打开吸附位点，创造适合目标物保留的疏水或离子环境。3.C解析：生物样本库对温度波动极其敏感，高精度前处理仪通常需达到±0.5℃甚至更高精度。4.B解析：液面探测后的气泡检测能有效识别并处理因挥发性产生的气泡，防止吸空或体积误差。5.C解析：光电传感器或图像识别能实时监控液位变化，精准控制吹干终点，防止过度吹干导致目标物损失。6.B解析：陶瓷材料具有极佳的耐酸碱和耐有机溶剂腐蚀性能。7.B解析：蛋白沉淀需要沉淀剂与蛋白充分接触，涡旋振荡是保证均一化的关键。8.D解析：不同项目切换必须进行严格的清洗，否则会带来严重的交叉污染，这是自动化操作的大忌。9.C解析：ASTM标准和OPCUA是工业和实验室自动化设备常见的数据交换协议。10.A解析：LLE利用密度差，通过离心加速分层，再配合精密移液吸取目标层。11.B解析：压缩机制冷能稳定维持低温环境，防止生物酶解或热降解。12.B解析：RSD即相对标准偏差，是标准差除以平均值。13.B解析：QuEChERS核心是分散固相萃取，直接在离心管中加入吸附剂净化。14.D解析：氢氟酸腐蚀玻璃，绝对不能使用玻璃容器或管路。15.C解析：激光测距和视觉定位是高精度抓取和定位的主流技术。16.C解析：内标应在提取开始前加入，以补偿后续所有步骤的损失。17.B解析：先用强溶剂洗去残留目标物，再洗去溶剂，最后吹扫，是标准的清洗逻辑。18.B解析：AI辅助诊断基于机器学习对历史大数据的模式识别，而非简单的逻辑判断。19.B解析：在线SPE-LC联用需承受高压，通常使用高压切换阀。20.B解析：准确度、精密度和通量是评价前处理仪性能的核心指标。二、多项选择题1.ABCDE解析：所有选项均影响移液质量。2.ABCD解析：外壳灰尘不影响内部移液精度；其他选项均为常见误差源。3.ABCD解析：填料活化是必须的，E错误。4.ABC解析：增加氮气流速会加速挥发，D错误；延长暴露时间E错误。5.ABCE解析：强腐蚀性洗液需严格按说明书使用，不可随意用于常规泵体，可能损坏密封件。6.ABC解析：D属于工业均质，E属于手动，不在此列。7.ABCDE解析：所有物理环境因素均影响浓缩效率。8.ABCD解析：合规性要求禁止随意删除记录，E错误。9.ABCD解析：柱吸附过滤是固相萃取原理，不属于LLE辅助手段，E错误。10.ABC解析：D简单浸泡通常无法满足复杂基质前处理要求。三、填空题1.电容/超声/气压2.加标样品测定值3.内标4.柱塞/注射器内径5.洗脱6.机器视觉/视觉7.准确度与精密度8.抓取中心/机械臂9.固相萃取/在线富集10.红11.CV12.反向吸液/慢速吸液13.针尖/鹅颈14.过滤/滤膜15.系列稀释16.预防性17.定位精度/分辨率18.PTFE/聚四氟乙烯/PEEK19.报警/暂停20.扫描器焦距/光线四、判断题1.√解析：正压置换受环境影响小。2.×解析：运行中严禁开门，需暂停以确保安全和机械臂复位。3.×解析：互溶的溶剂切换有时可行，但极性差异大时需过渡，以防管路内残留析出，且互洗逻辑需谨慎。4.√解析：干柱导致沟流，重现性变差。5.×解析：这是指“预润湿”枪头，内壁冲洗通常指清洗管路。6.×解析：需要配合离心机接口，并非所有仪器都内置离心功能。7.√解析：盐结晶是常见的堵塞原因。8.×解析：机器视觉可用于液面探测（LLD）、孔有无检测等。9.√解析：这是审计追踪的核心功能。10.√解析：大倍数稀释分步进行误差更小。五、简答题1.答：空气置换式：依靠活塞运动排出空气，在大气压作用下吸入液体。适用：常规水性溶液、一般有机溶剂，通用性强，成本低。局限：受气压、温度、蒸汽压影响大，挥发性或高粘度液体误差大。正压置换式：活塞直接接触液体或通过惰性流体推动液体，无空气间隙。适用：高挥发性、高粘度、高蒸汽压液体，以及移液精度要求极高的微量移液。局限：结构复杂，成本较高，需防止交叉污染（通常使用一次性活塞或管路）。2.答：填料选择不当：目标物在填料上保留太强或太弱。解决：重新筛选填料极性或类型。活化不充分：填料未完全润湿，导致保留能力下降。解决：增加活化溶剂体积或延长浸润时间。洗脱溶剂强度不足：无法将目标物完全洗脱。解决：增加洗脱溶剂极性（如增加甲醇比例）或加大洗脱体积。流速过快：目标物与填料未充分作用或未达到平衡即穿透。解决：降低上样和洗脱流速。柱床干涸：活化或上样过程中气泡进入或流干。解决：操作中始终保持液面高于填料。3.答：1.检查耗材：确认移液枪头是否匹配，是否有破损或漏气；检查是否有滤芯阻碍。2.检查气路/液路密封性：进行管路压力测试，检查活塞密封圈是否老化或磨损，检查管路接口是否松动。3.检查LLD（液面探测）设置：确认液面探测灵敏度是否因溶剂类型改变而需调整，验证插入深度是否一致。4.检查机械结构：确认Z轴电机运行是否平稳，有无抖动；检查注射泵活塞运动是否平滑。5.环境因素：检查实验室温度是否有剧烈波动，样品是否均一，是否有气泡产生。6.软件校准：查看是否需要重新进行多点校准。4.答：用户权限管理：不同级别的操作员（如操作员、管理员、超级用户）拥有不同权限，防止未授权修改。电子审计追踪：记录所有操作（创建、修改、删除、运行、登录等），包含时间、用户、操作内容，且不可篡改。电子签名：关键操作（如审批方法、发布报告）需进行电子签名，具有唯一性和法律效力。数据安全与备份：数据库应定期自动备份，具备断电保护和数据恢复功能。系统验证：安装验证（IQ）、操作验证（OQ）、性能验证（PQ）文件齐全。5.答：选用合适的移液原理：优先使用正压置换式注射泵。优化吸液速度：降低吸液速度，避免湍流和空穴效应。反向移液法：先吸入多于设定体积的液体，排出时再排出一部分，以补偿挂壁。预润湿：吸液前先吸取并排出液体1-2次，润湿内壁减少表面张力影响。使用宽口或特制枪头：减少液体流动阻力。增加延迟：吸液后增加延迟时间，等待液面平稳再提起。温度控制：保持样品、溶剂和仪器环境温度一致。六、计算与分析题1.解：(1)加标回收率=回收率=×(2)判断：99.0%落在80%-110%范围内，结果是合格的。(若不合格，可能原因：本底测定误差大、加标混合不均匀、基质效应干扰、前处理损失或污染。)2.解：(1)平均质量¯¯(2)平均体积¯(3)系统误差（绝对误差）=998.9相对误差=×(4)计算标准偏差S：S:998.2,1000.0,998.8,1000.6,997.3,999.6,998.0¯偏差平方和：(((((((∑SR(5)结论：相对误差-0.11%(<1.0%)，RSD0.12%(<0.5%)，无需重新校准，该通道性能优异。七、综合应用与案例分析题1.答：(1)故障类型判断：最可能属于耗材问题（SPE柱填料质量或装填不均一）或仪器流体控制问题（如压力异常、密封性随时间下降），单纯方法学问题可能性较小（因为前5个正常）。考虑到“逐渐下降”的趋势，SPE柱床塌陷或密封圈磨损导致漏液的可能性最大。(2)技术原因分析：SPE柱床塌陷或穿透：随着样本数量增加，若填料装填紧密度不够，在大体积上样（500mL）的高压冲击下，柱床逐渐被压实或产生沟流，导致保留能力下降，目标物提前流失。管路或阀密封磨损：仪器内部的流路切换阀或密封圈在处理大量有机溶剂（特别是二氯甲烷）后可能发生溶胀或磨损，导致随着运行进行，内泄漏增加，部分上样液未经过柱子直接流出，或洗脱液未完全收集。废液路堵塞导致背压变化：若废液管路部分堵塞，随着废液积累，柱内背压逐渐升高，可能导致流速变慢甚至发生“吹穿”现象，破坏保留平衡。(3)排查方案：压力监控：调取仪器运行时的压力曲线，观察上样和洗脱步骤的压力是否随样本序号增加而异常升高或降低。空白测试：不装柱子，运行管路，检查流速和体积准确性，排除泵和阀的问题。手动测试：取第6、10、20号的同批次SPE柱，手动操作相同流程，对比回收率。若手动也低，则是柱子质量问题；若手动正常，则是仪器问题。密封检查：检查阀转子及密封圈是否有腐蚀或磨损痕迹。(4)调整措施：若确认是洗脱溶剂流穿（即流速过快或洗脱不充分），应：降低洗脱流速：增加洗脱