结核感染 T 细胞检测解读课件

医学检验·专题课件结核感染T细胞检测解读课件原理·方法·判读·决策汇报日期2026年10月课程导览01检测缘起结核负担与传统检测局限02技术原理IGRA免疫机制与特异性抗原03方法学解析ELISPOT与ELISA技术路线04结果判读阳性阴性不确定与灰区05临床决策应用场景与指南定位CHAPTER检测缘起传统手段受限，新检测应运而生从疾病负担到检测瓶颈01结核病防控形势依然严峻1080万全球新增结核病新发病例125万结核病相关死亡死亡病例74.1万我国新发患者新发患者第三位我国发病数全球位次全球位次防阻断传播·防控要点传染风险一个未经诊治的肺结核患者，一年内可传染10至15人侵袭范围结核分枝杆菌可侵袭除头发和指甲外的全身各器官，以肺结核最常见传统检测方法的四重局限现有手段各有短板，敏感性与特异性均不理想检测方法主要局限胸部CT便捷迅速，但无法区分结核与其他疾病，存在辐射结核菌素试验易出现假阳性与假阴性，受卡介苗接种影响，需二次判读痰涂片简便便宜，但检出率低，仅适用于活动性肺结核痰培养诊断金标准，但培养周期长、阳性率低潜伏感染与肺外结核，恰恰是传统手段最难覆盖的盲区体外免疫检测的登场以血液为样本，捕捉机体对结核菌的免疫应答四项核心优势：特异性好、灵敏度高、检出率高、安全快速四项核心优势4项特异性好仅针对结核分枝杆菌复合群敏感，与绝大多数环境分枝杆菌和卡介苗无交叉反应灵敏度高基本不受免疫力低下或受抑制状态影响，能检出潜伏感染检出率高在肺外结核如肾结核、骨结核患者中有很高检出率安全快速仅需抽血，无创无辐射，通常一到两天可出结果适用定位2项首选卡介苗接种人群的结核感染检测首选可及儿童、孕妇、免疫力低下者均可开展检测技术的规范化进程从试剂获批到行业标准，检测能力持续被规范2011年7月IGRA试剂盒获批中国首个自主研产IGRA试剂盒A.TB获国家食品药品监督管理局批准2013年行业标准制定IGRA相关行业标准我国正式制定IGRA相关行业标准2018年纳入诊断标准正式纳入肺结核诊断标准IGRA纳入WS288-20172026年5月25日新标准发布WS/T884-2026发布《分枝杆菌感染实验诊断标准》2026年11月1日起实施标准起草华中科技大学同济医学院附属同济医院牵头，联合国内多家顶尖机构共同起草全球应用已在全球60多个国家和地区获准用于临床CHAPTER技术原理致敏T细胞是检测的生物学基础免疫记忆如何被检测捕获02免疫记忆是检测的生物学基础感染留下的免疫记忆，成为可被体外唤起的信号1阶段01致敏T细胞的形成感染阶段结核分枝杆菌感染后被巨噬细胞吞噬，但难以被

完全清除巨噬细胞凋亡后释放

特异性抗原，递呈给CD4、CD8T细胞T细胞被激活致敏，长期存在于外周血，形成

免疫记忆2阶段02体外再激活检测阶段受检者外周血与结核特异性抗原

共同孵育致敏效应T细胞再次接触抗原后迅速活化，大量分泌

γ干扰素γ干扰素属Th1型细胞因子，其水平反映机体

结核细胞免疫状态特异性抗原决定检测特异性抗原选得准，结果才敢信因两大核心抗原ESAT-6早期分泌靶向抗原CFP-10培养滤过蛋白RD1区二者由结核杆菌基因组相同操纵子编码RD1区操纵子布分布特征复合群仅结核分枝杆菌复合群：人型、牛型、非洲型致病株亦见于堪萨斯、苏氏、海等少数致病性分枝杆菌环境株在卡介苗菌株与绝大多数环境分枝杆菌中并不存在复合群致病株环境株价临床价值消除交叉反应，IGRA特异性更优卡介苗规避卡介苗接种引起的交叉反应非结核规避非结核分枝杆菌感染的交叉反应IGRAIGRA特异性优于结核菌素皮肤试验的分子基础一个斑点就是一个T细胞看不见的免疫应答，被转化为可计数的斑点信号转化三步一次分泌、一次捕获、一次显色，一个T细胞的应答信号就被定格为一个可计数的斑点1分泌活化的效应T细胞释放γ干扰素2捕获γ干扰素被预包被的特异抗体就地捕获，在扩散稀释前完成固定3显色加入底物后于细胞因子分泌部位形成不溶性色素沉淀斑点定量逻辑每一个斑点，代表一个被抗原激活并分泌γ干扰素的T细胞计数斑点数量，即可获得外周血中结核致敏T细胞的水平由于在细胞因子扩散前即时捕获，其灵敏度超过传统酶联免疫吸附实验结果常以每百万个外周血单个核细胞中的斑点形成细胞数来描述检测全流程的四个环节从采血到判读，每一步都影响结果可靠性步骤1采血外周静脉血采集外周静脉血，无需空腹步骤2分装三管对照分别加入阴性对照管、结核抗原管与阳性对照管步骤3孵育16至24小时37摄氏度条件下培养步骤4检测γ干扰素水平酶联免疫斑点法或酶联免疫吸附法测定三管对照设置阴性对照管不含抗原，测量本底水平阳性对照管植物血凝素等非特异性刺激物，确认免疫细胞功能正常抗原管ESAT-6、CFP-10等特异性抗原，判读的核心依据结果报告周期通常为

36至48小时原理划定的能力边界原理给了它高特异性，也限定了它的解释范围原理带来的优势3项抗原不在卡介苗中，不受卡介苗接种史干扰检测血液中的效应T细胞，与感染部位无关，肺外结核同样可查与是否排菌无关，菌阴患者同样可能呈阳性原理划定的边界4项只能判断是否存在结核致敏T细胞，无法区分潜伏感染与活动性结核无法判断是既往感染还是近期感染无法据此判断是否为现患结核病抗结核治疗后效应T细胞消失，可使斑点数减少甚至转阴高特异性不等于高确诊力，判读必须回到临床整体CHAPTER方法学解析两条路线，各有取舍ELISPOT与ELISA的技术分野03两条并行的技术路线同属IGRA，走的却是两条路01路线一酶联免疫斑点法代表产品为T-SPOT.TB由英国牛津大学研发，采用简化的酶联免疫斑点技术检测对象是分泌γ干扰素的单个T细胞，结果以斑点计数呈现需分离外周血单个核细胞，经洗涤、计数后接种02路线二酶联免疫吸附法代表产品为QuantiFERON-TBGold检测对象是血浆中的总γ干扰素浓度全血直接加入反应管，无需分离细胞，操作相对简便可引入全自动检测仪器，适合批量处理两条路线，各有取舍：一个看细胞，一个看浓度。两大方法的关键维度对比同一目的，不同的技术取舍维度酶联免疫斑点法酶联免疫吸附法检测对象单个T细胞斑点计数血浆总γ干扰素浓度标本类型分离的单个核细胞全血直接加管孵育时间16至20小时16至24小时操作复杂度步骤较多，需细胞分离相对简便，可自动化免疫抑制影响较小，斑点数值降低较大，不确定结果增多结果报告阴阳性加斑点数值阴阳性加浓度值结论免疫抑制人群筛查，斑点法的不确定结果比例相对更低标本采集的规范要求标本不合规，结果必然不可靠采血前无需空腹，按规定抗凝、定量、限时送达，才能保证结果可靠采集要点4项无需空腹使用肝素或肝素锂、肝素钠抗凝的真空采血管不推荐使用EDTA抗凝会影响检测采血量按人群区分2岁以下儿童

2至3毫升；其他患者

4至6毫升；免疫力低下或受抑制者

6至8毫升部分规范建议成年人或10岁以上儿童采集

8毫升运输与保存3项室温15至25摄氏度

保存与运输严禁冷冻或冷藏标本采集后应尽快送达实验室通常要求在

4至6小时内

完成一周内有输血史或做过PET-CT者建议

2周后

再行检测特殊标本与替代路径取材困难时，还有另一条路可走取材困难时，还有另一条路可走胸腹水标本采集4项需无菌采集肝素抗凝每100毫升样本中加入

2500国际单位

肝素抗凝，并立即混匀推荐盐水瓶留取避免使用饮料瓶或塑料酒精瓶防止溶血运输过程需注意，以免影响结果准确性胸腔积液检测的价值斑点法检测可疑结核性胸膜炎患者病原学检测为阴性时，可采集胸腔积液进行检测肺外结核辅助诊断这是斑点法在肺外结核辅助诊断中独具优势的应用场景需注意该路径对标本处理与实验室条件要求较高免疫抑制人群的方法选择免疫状态不同，方法表现也不同方法选择应因人而异：免疫抑制人群需优先考虑假阴性风险两类方法的差异表现斑点法受免疫抑制状态影响较小，但合并免疫抑制时斑点数值会降低吸附法受免疫抑制状态影响较大，不确定结果比例显著增高临床选择倾向肿瘤、器官移植、自身免疫病等需接受免疫抑制治疗的人群开展潜伏感染筛查时斑点法可能是更优选择不确定结果比例较低，假阴性风险相对可控无论采用何种方法免疫功能严重低下者的阴性结果不能简单等同于未感染质量控制决定结果可信度再好的方法，也依赖规范的操作结果的可信度，取决于操作全链条每个环节的规范程度影响结果质量的环节3项标本采集与运输是否在规定时限与温度范围内完成细胞分离与计数规范操作，保证斑点法有效细胞数孵育时间与温度稳定控制，影响γ干扰素累积水平性能参考不确定结果发生率2%—4%有效结果获取率超96%成因可能源于样本处理不当，也可能源于免疫系统无反应处置应结合临床判断，必要时重新采血复查CHAPTER结果判读读懂斑点与浓度背后的含义从对照孔到临床结论04判读第一步先看对照孔不看对照就下结论，是判读中最常见的错误判读第一原则：先看对照孔，再下结论1先看阳性对照孔判断实验是否有效，确认免疫细胞功能正常。阳性对照孔2再看阴性对照孔排除本底干扰因素。阴性对照孔3最后分析抗原孔比较抗原A孔与抗原B孔的斑点数。抗原A孔·抗原B孔对照孔的参考表现空白对照孔没有或仅有很少斑点阳性对照孔斑点数通常超过20个对照孔表现合格抗原孔结果才具备解读价值斑点法的阳性判定标准阈值分档，是两个条件的组合判断空白对照孔斑点数有反应性判定条件0至5个抗原A或抗原B孔斑点数减去空白对照孔后

大于等于66至10个抗原A或抗原B孔斑点数

大于等于

空白对照孔斑点数的

2倍未达标判定不符合上述标准且阳性对照孔正常时，判为无反应性。无反应性表明样本中可能不存在针对结核杆菌特异的效应T细胞。判读注意事项部分实验室以0至14作为参考区间，但不同试剂盒判读标准存在差异，应以本实验室说明书为准。灰区与不确定结果的处理最考验临床判断的，往往是中间地带让每一次判读都回归临床整体灰区空白对照孔斑点数

0至5个，且抗原孔减去空白对照孔的差值为

5至7结果处于临界区间，应结合所有可用的临床信息综合判断必要时安排复查不确定结果空白对照孔斑点数

超过10个，判为不确定阳性对照孔斑点数

少于20个，同样判为不确定意味着不能确定是否存在结核感染T细胞免疫反应处理原则：重新采血检测，并结合临床症状与其他检测结果综合判断阳性结果意味着三种可能阳性说明免疫系统见过结核菌，但故事有多个版本阳性结果不能作为单独的或决定性的诊断依据是否为活动性结核需结合症状、影像学及其他检查综合判断阳性不等于必须抗结核治疗阳性结果意味着三种可能：既往感染、活动性结核或潜伏感染，需进一步甄别既往感染体内存留记忆性特异性T细胞，再次接触抗原后释放γ干扰素使检测值升高活动性结核检测数值明显高于参考水平时需高度怀疑，肺外结核尤应警惕潜伏感染结核菌处于潜伏状态，尚未发展为临床结核病阴性结果与假阴性因素阴性有助于排除，但不能一票否决阴性的通常含义提示患者体内不存在针对结核杆菌特异的效应T细胞在免疫健全的个体中，阴性结果有助于排除结核感染需警惕的假阴性情形感染阶段不同，标本在细胞免疫反应发生之前获取少教免疫系统功能不全或有基础疾病者，如HIV感染者、肿瘤患者、儿童高龄人群，如65岁以上，可能因免疫功能下降出现假阴性抗结核治疗后效应T细胞消失使用免疫抑制剂治疗的免疫力低下患者标本保存运输不规范或实验操作异常假阳性因素与数值局限两个容易被过度解读的地方假阳性风险与数值解读需谨慎对待，定量结果不等同于活动性诊断可能引起假阳性的菌种4项堪萨斯分枝杆菌环境分枝杆菌之一，感染时可能出现阳性结果苏氏分枝杆菌环境分枝杆菌之一，感染时可能出现阳性结果海分枝杆菌环境分枝杆菌之一，感染时可能出现阳性结果戈登分枝杆菌环境分枝杆菌之一，感染时可能出现阳性结果上述四种环境分枝杆菌感染时，可能出现阳性结果02数值解读数值解释的边界不宜使用斑点数值区分活动性与潜伏性结核感染斑点计数不足以区分活动性结核与潜伏感染研究领域正探索抗原与阳性对照比值、抗原特异性反应模式等新方法，以期突破这一瓶颈CHAPTER临床决策辅助诊断，而非单独定论让检测结果进入临床路径05首要用途是潜伏感染筛查在发病之前找到人，是这项检测最大的价值潜伏感染者是潜在的传染源，筛查的意义在于早发现，阻断向活动性结核的转化。筛应重点筛查的人群用药使用生物制剂、免疫抑制剂或大剂量激素的患者感染HIV感染者代谢糖尿病患者肿瘤血液病及癌症放化疗前的患者移植器官移植术前评估者职业医务工作者等职业暴露人群接触与活动性肺结核患者有密切接触史者阳性结核菌素试验阳性但无法确认是否感染者八类高危人群价干预价值早发早发现、早干预，可降低潜伏感染者发展为活动性结核的风险防传阻断进一步传播，推动防控关口前移辅助诊断菌阴与肺外结核病原学查不到的时候，免疫学证据开始发挥作用免疫学证据当病原学查不到时，免疫学检测聚焦三类典型场景，并给出高阳性率诊断支持92.08%疑似活动性肺结核确诊患者阳性率01场景聚焦三类典型场景菌阴肺结核：痰涂片或培养阴性但临床高度怀疑者，可提供免疫学支持。肺外结核：如结核性胸膜炎、肠结核等，尤其在难以取材时意义更大。不明原因发热：用于结核的排查与筛除。菌阴与肺外结核中的补位作用📊诊断性能参考阳性率疑似活动性肺结核确诊患者中，该方法阳性率为92.08%。阳性率痰涂片阴性患者中阳性率为93.06%，高于涂片阳性患者的89.66%。曲线下面积诊断活动性肺结核的曲线下面积为0.896。限定上述数据来自单中心研究，不能替代病原学诊断。特殊人群的应用考量同一项检测，不同人群要有不同的读法儿童采血量按年龄调整2岁以下为2至3毫升免疫系统