大肠菌群测定

GB4789.3-2010大肠菌群测定GB4789.3-2010大肠菌群测定□定义:大肠菌群:一群在36°C培养48h可发状况:推断食品中肠道致可能。酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏染色阴性

无芽孢杆菌。该菌主要来源自人畜粪便,作为粪便污染指标评价食品的卫生大肠菌群的食品卫生学意义□作为粪便污染食品的指标菌,MPN值愈低则说

明食品受粪便污染程度及对人体健康危害程度

愈低□作为肠道致病菌污染食品的指针,大肠菌群数量越多则肠道致病菌存在的可能性就越高,但两者之间并不总是呈平行关系

□要求食品中大肠菌群完全不存

在是不可能的,重要的是其污

染程度,即菌量3大肠菌群、粪大肠菌群、大肠杆菌的从属关系大肠歯群并非细菌学分类命名,而是卫生细菌领域的用语,大肠杆菌是人和温血动物肠道它不代表某一个或某一属细菌,而指的是具有某些特性的

一组与粪便污染有关的细菌,这些细菌在生化及血清学方内普遍存在的细菌,是粪便中

的主要菌种。一般生活在人大面并非完全一致。一般认为可包括大肠埃希氏菌、拧檬酸肠中并不致病,但它侵入人体产气克雷白氏圍杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。总大肠菌群系指一群在37°C培养24小时能发酵乳酸、产酸产气、需氧和兼j性厌氧的革兰氏阴'性无芽胞杆歯。太肠埃耐热大肠歯群即粪大肠菌

群,作为一种卫生指标菌,耐热大肠菌群中很可能含

有粪源微生物,因此耐热

大肠菌群的存在表明可能

受到了粪便污染,可能存

在大肠杆菌。但是,耐热

大肠菌群的存在并不代表

对人有什么直接的危害。

致病性大肠杆歯能引起食物

中毒。致病性菌株能侵入肠

粘膜上皮细胞，具有痢疾杆

菌样致病力。肠致病性大肠

杆菌（EPEC)、肠毒素性

大肠杆菌（ETEC)和肠侵

袭性大肠杆菌（EIEC)等。

一些部位时,可引起感染。

O157:H7(EHEC)肠出血性大肠杆菌,感染性腹泻

是近年来新发现的危害严重的肠

道传染病,己逐渐成为威胁人群

健康的重要公共卫生问题。

阴_2第一法大肠菌群MP^I计数法□初发酵:月桂基硫酸盐蛋白胨肉汤(LST)替代了乳糖胆盐发酵培基□确证实验:煌绿乳糖胆盐肉汤代了乳糖胆盐发酵培基□确证实验:煌绿乳糖胆盐肉汤代了乳糖胆盐发酵培基□确证实验:煌绿乳糖胆盐肉汤代了乳糖胆盐发酵培基□确证实验:煌绿乳糖胆盐肉汤代了乳糖胆盐发酵培基□确证实验:煌绿乳糖胆盐肉汤代了乳糖胆盐发酵培基□确证实验:煌绿乳糖胆盐肉汤代了乳糖胆盐发酵培基□确证实验:煌绿乳糖胆盐肉汤代了乳糖胆盐发酵培基□确证实验:煌绿乳糖胆盐肉汤代了乳糖胆盐发酵培基□确证实验:煌绿乳糖胆盐肉汤代了乳糖胆盐发酵培基□确证实验:煌绿乳糖胆盐肉汤代了乳糖胆盐发酵培基□确证实验:煌绿乳糖胆盐肉汤代了乳糖胆盐发酵培基□确证实验:煌绿乳糖胆盐肉汤代了乳糖胆盐发酵培基□确证实验:煌绿乳糖胆盐肉汤代了乳糖胆盐发酵培基□确证实验:煌绿乳糖胆盐肉汤代了乳糖胆盐发酵培基□确证实验:煌绿乳糖胆盐肉汤5第一法大肠菌群MPjM计数法未接种的LST肉汤未接种的乳糖胆盐肉汤第一法大肠菌群MP^I计数法LST肉汤乳糖胆盐肉汤7如何报告结果?□根据经确证后的对应浓度阳性管数查MPN表□MPN:最可能数，基于泊松分布的一种间接计数方j旧性管数MPN95%可信限❶.100.010.001下限上限000<3.0■9.50❶3.❶0.159.61003.60.1718333>1100420如何报告结果?□现国标的MPN表与原国标的MPN表的不同点:1现表里的数字是有小数点的，而原标准对小数点

进行了四舍五入的处理。2现标准的MPN表比原标准的MPN表要简化一些。

原标准MPN表有64个组合，而现标准MPN表只

有40个组合。3报告单位不同。现报告单位为g/ml,而原报告

单位是10Og/ml。

关于新国标大肠菌群MPN表的理解问题□新国标的MPN表的基准问题。1.新国标的MPN表采用了3个稀释度，分别是

十倍一百倍一千倍，加样量是3管，每管1毫升，

意味着加入样品的量为0.333克。

2.在样品加入量为0.333克的情况下，使用新

国标MPN表，得到MPN/克的数值。

关于新国标大肠菌群MPN表的理解问题□改变加样量的问题。在实际操作中，因为一些原因需要改变加样

量，一般是10倍增加或者降低，同样使用本表，

得到的数值需要做10倍调整。比如：加样量为3.33克（这样的情况一般是十倍稀释液用3管，每管10毫升，需要用双料

管。十倍百倍稀释液，各用三管，每管1毫升)。

关于新国标大肠菌群MPN表的理解问题口改变加样量的问题。这样查表得到的数值,应该降低10倍。加样量为3.33克,阳性管为2-1-0,查表为15,这样的话,结果应该为MPN1.5/克,或者MPN15/10克,或者MPN150/100克。

关于新国标大肠菌群MPN表的理解问题□改变加样量的问题。再比如：加样量为0.0333克（这样的情况是，不使

用十倍稀释液，而使用百倍一千倍一万倍稀释液，

各用三管，每管1毫升)。这样表得到的数应该增高10倍。加样量为0.0333克，阳性管为2-1-0,查表为15,这样的话，结果应该为MPN150/克，或者MPN1500/10克，或者MPN15000/100克。

关于新国标大肠菌群MPN表的理解问题口关于和产品标准对应的问题。大家应该注意到，这个问题其实是一个稀释

度的选择问题。另外，这个问题也可以回答是否

可以直接换算的问题。比如:某产品要求MPN＜30/100克。在这种情况下，我们如果使用加样量0.333,如果全部是阴性0-0-0,得到的结果为＜3/克，

或者是＜30/10克，或者是＜300/100克。很

明显，在这种加样量情况下是不能做出是否符合

结果的判定的。

关于新国标大肠菌群MPN表的理解问题口关于和产品标准对应的问题。这样的话,就需要增加加样量,变成加样量为3.33克,如果全部是阴性0-0-0,得到结果为<0.3/克,或者是<3/10克,或者是<30/100克。这样的结果才能符合要求。如果更精确的操作,应该是加样量为33.3克。

这样如果全部是阴性0-0-0,得至iJ<3/100克,结果为2-1-0,得到MPN15/100克,也是合

格产品。

16关于新国标大肠菌群MPN表的理解问题□关于和产品标准对应的问题。从这个意义上讲，稀释度的选择是根据产品要求进行的，理论上:如果要求得到每克产品菌群含量，加样量应该

是0.333克比较合适。如果要求得到每10克产品菌群含量，加样量应该是3.33克比较合适。如果要求得到每100克产品菌群含量，加样量

应该是33.3克比较合适。

第二法大肠菌群平板计数法用无苗生理盐水10侑系列格釋样品1:10稀释«*-J9典2啬落为紫紅f周围有红色胆盐沉淀环,0.5mm选择30-150平板计数典舉和•可疑菌•落hiooftn。i:iooo««挑选10个菌落\接种到BGLB取若干适当稀释度的样品ImL将46X?的VRBA倾注至培养皿加入无菌培养皿中

中,转动混匀之待凝固后再覆36°C±>°C18h-24h^j^lvrba第三法大肠菌群Petrifilm™测试片法—、_«大扬》作方法t未开妇时,冷藏于＜8*C(＜467).并在

保存期内用芫,®通度时,«囲水町以撕險»包装物最好于靈«0开*已开封的,格射口以胶署封龙.3ee开的袋不饜冷藏并于一个月内使用完•＜制备食物祥品秘找液,称取戒级

取食物袢品,置入通富的无s容器

内,如均质袋,M找瓶、Whirl?«k者;K他灭菌容骼内5加入通量的无囲W释液,色括Bu££«rUp«pton«BufferCDFphopsphkt*buffer,用0.0425c/Lfl<J»eP04ifflPH72)、01*60旦白胶

水OSO方法688T)、«冲旦白胶水aso方法6579)、益港破（005-090M),fr««letheenbrothM^想it番水但不町用含有物梅曲盆、bisuLfit*or的報冲液因为它能抑让菌生长•6、担拌或均质祥S样品的栴味液6-72对性禕用INMeOK、破性祥用UOCI谰PH,格澜试片»于平坦褒面处•J*开上是JB.9.曲心祐上遷质援倦a下,»免頁气光通严

生,切匆使上房腼fi接落下,10、《用压®(平面底朗下＞»fi在上厗購中央处《19结果判读大肠苗群签定，在不W国家可以有（J4海界时^和通度部分提示)KDAC_U的方法colifor»=69(有气泡的苗T«talcollfor*c・un兔=79Petrifil»ccM试片菌落数潘S记数范®*1S_15O,不饔0簏圓型埒S舛的苗落.因方潘棟上已不含逸择性埼解基见画田1TITCCS数太多无抹计數)P.trifiLhcciftiM片®落无法1十数

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