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第55讲基因工程的基本操作程序考点1基因工程的基本操作程序一、目的基因的筛选与获取1．筛选合适的目的基因(1)目的基因：在基因工程的设计和操作中，用于改变________________或获得________________等的基因。主要是指____________的基因。(2)筛选目的基因的方法：从相关的已知__________清晰的基因中进行筛选是较为有效的方法之一。2．利用PCR获取和扩增目的基因(1)原理：DNA半保留复制。(2)条件：DNA模板、2种引物、________________和4种脱氧核苷酸。(3)PCR反应过程(4)PCR产物的鉴定：常采用________来鉴定。二、基因表达载体的构建——基因工程的核心1．构建基因表达载体的目的(1)使目的基因在受体细胞中________，并且可以遗传给下一代。(2)使目的基因能够________和发挥作用。2．基因表达载体的组成3．基因表达载体的构建过程三、将目的基因导入受体细胞四、目的基因的检测与鉴定考点2DNA片段的扩增及电泳鉴定1．实验基础(1)PCR原理：利用了______________原理，通过调节温度来控制DNA双链的解聚与结合。(2)电泳：DNA分子具有可解离的基团，在一定的pH下，这些基团可以带上正电荷或负电荷。在电场的作用下，这些带电分子会向着与它所带电荷________的电极移动，这个过程就是电泳。(3)PCR的产物一般通过琼脂糖凝胶电泳来鉴定。在凝胶中DNA分子的迁移速率与凝胶的浓度、DNA分子的__________等有关。2．实验步骤(1)DNA片段的扩增(2)DNA片段的电泳鉴定①根据待分离DNA片段的大小，用____________配制琼脂糖溶液，一般配制质量分数为0.8%～1.2%的琼脂糖溶液。在________或微波炉内加热至琼脂糖熔化。稍冷却后，加入适量的________混匀。②将温热的琼脂糖溶液迅速倒入模具，并插入合适大小的梳子，以形成加样孔。③待凝胶溶液完全凝固后，小心拔出梳子，取出凝胶放入________内。④将电泳缓冲液加入电泳槽中，电泳缓冲液没过凝胶________为宜。⑤将扩增得到的PCR产物与凝胶载样缓冲液(内含指示剂)混合，再用______________________________将混合液缓慢注入凝胶的加样孔内。留一个加样孔加入指示分子大小的标准参照物。⑥接通电源，根据电泳槽阳极至阴极之间的距离来设定电压，一般为1～5V/cm。待指示剂前沿迁移接近凝胶边缘时，停止电泳。⑦取出凝胶置于紫外灯下观察和照相。自主诊断考点1一、1．(1)受体细胞性状预期表达产物编码蛋白质(2)结构和功能2．(2)耐高温的DNA聚合酶(3)50℃72℃(4)琼脂糖凝胶电泳二、1．(1)稳定存在(2)表达2．RNA聚合酶转录三、花粉管通道T-DNA染色体DNA显微注射Ca2+四、染色体DNAmRNA抗原—抗体考点21．(1)DNA的热变性(2)相反(3)大

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