生物技术制药题库及答案

生物技术制药题库及答案一、单项选择题（每题1分，共20分）1.下列药物中，属于典型基因工程药物的是A.青霉素B.重组人胰岛素C.维生素CD.紫杉醇2.单克隆抗体制备过程中，用于融合的骨髓瘤细胞必须具备的特点是A.能分泌抗体，缺乏HGPRT酶B.不能分泌抗体，缺乏HGPRT酶C.能分泌抗体，含有HGPRT酶D.不能分泌抗体，含有HGPRT酶3.发酵工程制药中，种子罐培养的核心目的是A.合成目标代谢产物B.扩大菌种数量与活性C.诱导合成关键酶D.去除杂蛋白杂质4.下列疫苗中，属于减毒活疫苗的是A.重组乙肝疫苗B.新冠灭活疫苗C.卡介苗D.HPV疫苗5.基因工程制药中，最常用的原核表达宿主是A.大肠杆菌B.酿酒酵母C.CHO细胞D.毕赤酵母6.植物细胞培养生产的紫杉醇前体物质是A.青蒿素B.巴卡亭IIIC.人参皂苷D.长春新碱7.固定化酶的优点不包括A.可重复使用B.催化稳定性提升C.产物易分离纯化D.酶活性无限提高8.生物药物分离纯化的盐析法中，最常用的盐是A.氯化钠B.硫酸铵C.硫酸钠D.氯化钾9.动物细胞工程制药中，应用最广泛的宿主细胞是A.大肠杆菌B.枯草芽孢杆菌C.CHO细胞D.链霉菌10.基因工程菌构建中，限制性内切酶的作用是A.连接DNA片段B.切割特定DNA序列C.扩增目的基因D.逆转录合成cDNA11.下列药物中，属于治疗性单克隆抗体的是A.曲妥珠单抗B.重组人胰岛素C.重组人生长激素D.重组人干扰素12.疫苗的基本组成成分不包括A.抗原B.佐剂C.防腐剂D.抗生素13.发酵过程中，不能用于提升溶氧浓度的操作是A.提高搅拌转速B.增大通气量C.适当降低培养温度D.增加培养基碳源浓度14.下列层析方法中，根据分子大小差异实现分离的是A.离子交换层析B.凝胶过滤层析C.亲和层析D.疏水层析15.基因工程药物质量控制中，生物学活性测定的核心目的是A.检测蛋白质含量B.评价药物有效性C.检测杂质残留量D.检测热原水平16.HAT选择培养基的三种核心成分依次是A.次黄嘌呤、氨基蝶呤、胸腺嘧啶核苷B.次黄嘌呤、胸腺嘧啶核苷、氨基蝶呤C.氨基蝶呤、次黄嘌呤、胸腺嘧啶核苷D.胸腺嘧啶核苷、次黄嘌呤、氨基蝶呤17.下列发酵方式中，微生物生长具有明显延滞期、对数期、稳定期、衰亡期四个阶段的是A.分批发酵B.补料分批发酵C.连续发酵D.半连续发酵18.植物细胞培养的特点不包括A.生长速度慢B.对剪切力敏感C.细胞密度高D.易受微生物污染19.基因工程中，用于连接目的基因与载体的酶是A.限制性内切酶B.DNA连接酶C.TaqDNA聚合酶D.逆转录酶20.生物药物质量控制中，细菌内毒素检查的常用方法是A.家兔法B.鲎试剂法C.凯氏定氮法D.SDS法二、多项选择题（每题2分，共20分，多选、少选、错选均不得分）1.下列属于生物技术制药技术范畴的有A.基因工程B.细胞工程C.发酵工程D.酶工程E.化学合成2.下列属于真核表达系统的有A.大肠杆菌B.酿酒酵母C.CHO细胞D.毕赤酵母E.枯草芽孢杆菌3.单克隆抗体制备中，常用的细胞融合方法有A.聚乙二醇（PEG）诱导法B.灭活仙台病毒介导法C.电融合法D.氯化钙法E.磷酸钙共沉淀法4.发酵过程中需要监测与控制的参数有A.培养温度B.培养基pH值C.溶解氧浓度D.搅拌转速E.通气量5.生物药物分离纯化的原理包括A.分子大小与形状差异B.电荷差异C.溶解度差异D.亲和力差异E.疏水性差异6.减毒活疫苗的特点包括A.免疫力持久B.接种次数少C.安全性高于灭活疫苗D.可诱导细胞免疫E.存在毒力回复风险7.动物细胞培养的培养基必需成分包括A.葡萄糖B.氨基酸C.血清或生长因子D.无机盐E.维生素8.基因工程菌的构建步骤包括A.目的基因的获取B.表达载体的制备C.目的基因与载体的连接D.重组载体导入宿主细胞E.重组子的筛选与鉴定9.下列已上市药物中，属于抗体类药物的有A.利妥昔单抗B.帕博利珠单抗C.阿达木单抗D.重组人胰岛素E.重组人促红素10.生物药物成品质量检验的核心内容包括A.理化鉴别B.杂质检查C.含量测定D.生物学活性测定E.安全性检查三、名词解释（每题3分，共15分）1.基因工程制药2.单克隆抗体3.发酵工程制药4.减毒活疫苗5.固定化酶四、简答题（每题5分，共25分）1.简述基因工程制药的基本流程。2.简述杂交瘤技术制备单克隆抗体的基本原理。3.比较分批发酵与连续发酵的主要区别。4.简述生物药物分离纯化的一般原则。5.简述灭活疫苗的优缺点。五、论述题（每题10分，共20分）1.试论述动物细胞工程制药的特点，及常用宿主细胞的优缺点。2.结合当前生物技术制药的发展趋势，论述mRNA疫苗的技术原理、优势及应用前景。参考答案与解析一、单项选择题1.答案：B2.答案：B解析：骨髓瘤细胞需缺乏HGPRT酶才能在HAT选择培养基中被淘汰，同时不能分泌自身抗体，避免杂抗体污染，保证最终获得的抗体为单一特异性的单克隆抗体。3.答案：B4.答案：C5.答案：A6.答案：B7.答案：D8.答案：B解析：硫酸铵溶解度高、温度系数小、对蛋白质活性影响小，是盐析法的首选试剂。9.答案：C10.答案：B11.答案：A12.答案：D解析：抗生素不属于疫苗的必需组成，仅部分疫苗可能残留微量生产过程中使用的抗生素，且需严格控制限量。13.答案：D解析：增加碳源浓度会促进微生物生长代谢，加快耗氧速率，反而会降低溶氧水平。14.答案：B15.答案：B16.答案：A解析：H代表次黄嘌呤、A代表氨基蝶呤、T代表胸腺嘧啶核苷；氨基蝶呤抑制DNA从头合成途径，只有融合的杂交瘤细胞可通过B细胞提供的HGPRT酶利用次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷合成DNA，从而存活。17.答案：A18.答案：C解析：植物细胞体积远大于微生物细胞，培养时的细胞密度（细胞数/mL）远低于微生物发酵，因此单位体积产量较低。19.答案：B20.答案：B二、多项选择题1.答案：ABCD解析：生物技术制药以生物工程技术为核心，包括基因工程、细胞工程、发酵工程、酶工程及抗体工程等；化学合成属于化学制药的技术范畴，因此E选项错误。2.答案：BCD解析：大肠杆菌和枯草芽孢杆菌属于原核生物，对应原核表达系统；酵母（酿酒酵母、毕赤酵母）为真核微生物，CHO细胞为哺乳动物细胞，均属于真核表达系统，可实现蛋白质的翻译后修饰。3.答案：ABC解析：细胞融合的常用方法包括化学法（PEG诱导）、生物法（灭活病毒介导）、物理法（电融合、电穿孔）；氯化钙法用于原核感受态细胞制备，磷酸钙共沉淀法用于动物细胞转染，均不属于细胞融合方法，因此D、E选项错误。4.答案：ABCDE解析：发酵过程的控制参数包括物理参数（温度、搅拌转速、通气量、泡沫）、化学参数（pH、溶氧、碳氮源浓度）和生物参数（菌体密度、比生长速率），以上均为需调控的核心参数。5.答案：ABCDE解析：对应方法分别为凝胶过滤层析、离子交换层析、盐析/等电点沉淀、亲和层析、疏水层析，均为生物药物分离纯化的常用技术。6.答案：ABDE解析：减毒活疫苗保留了一定的增殖能力，免疫原性强，可同时诱导体液免疫和细胞免疫，免疫力持久，通常仅需接种1~2次；但存在毒力回复突变的风险，安全性低于灭活疫苗，因此C选项错误。7.答案：ABCDE解析：动物细胞培养基需提供碳源（葡萄糖）、氮源（氨基酸）、无机盐、维生素、生长因子等，传统培养需添加血清提供生长因子和贴壁因子，无血清培养基则需人工添加相关成分。8.答案：ABCDE解析：以上为基因工程菌构建的标准流程，从目的基因获取到最终工程菌鉴定，环环相扣，缺一不可。9.答案：ABC解析：利妥昔单抗为抗CD20单抗，帕博利珠单抗为抗PD-1单抗，阿达木单抗为抗TNF-α单抗，均属于抗体类药物；重组人胰岛素为多肽类激素，重组人促红素为细胞因子类药物，因此D、E选项错误。10.答案：ABCDE解析：生物药物质量检验需同时考察理化性质、纯度、含量、生物学活性与安全性，其中生物学活性是生物药物区别于化学药物的关键检验项目。三、名词解释1.答案：指利用重组DNA技术，将编码目标药物蛋白的目的基因插入合适载体，导入宿主细胞（原核或真核），通过宿主细胞的增殖与表达获得蛋白质类药物的生物技术制药技术。解析：核心得分点：①技术基础为重组DNA技术；②操作过程为目的基因导入宿主细胞表达；③产物为蛋白质类药物，每点1分。2.答案：由单一B淋巴细胞克隆产生的、仅识别某一特定抗原表位的高度均一性抗体，可通过杂交瘤技术或基因工程技术制备。解析：核心得分点：①来源为单一B细胞克隆；②特点是特异性单一、均一性高；③制备技术为杂交瘤或基因工程技术，每点1分。3.答案：利用微生物的特定生理功能与代谢途径，在人工控制的培养条件下，通过微生物的生长代谢生产所需药物的技术，可生产初级代谢产物和次级代谢产物。解析：核心得分点：①生产主体为微生物；②条件为人工控制的发酵环境；③产物为微生物代谢产生的药物，每点1分。4.答案：将病原微生物通过人工诱变或自然筛选，使其毒力大幅减弱但仍保留免疫原性和一定增殖能力，接种后可诱导机体产生持久特异性免疫力的疫苗。解析：核心得分点：①制备方式为毒力减弱处理；②保留免疫原性和增殖能力；③免疫力持久，每点1分。5.答案：通过物理或化学方法将游离酶束缚在一定的空间范围内，使其仍保持催化活性，并可回收及重复使用的酶制剂形式。解析：核心得分点：①制备方式为物理/化学固定；②保留催化活性；③可回收重复使用，每点1分。四、简答题1.答案：(1)目的基因的获取：通过化学合成、PCR扩增、cDNA文库构建等方法获得编码目标蛋白的基因；(2)表达载体的构建：选择合适的载体（质粒、病毒等），用限制性内切酶分别酶切目的基因与载体，再通过DNA连接酶连接获得重组载体；(3)重组载体导入宿主细胞：通过转化、转染、电穿孔等方法将重组载体导入原核或真核宿主细胞；(4)重组工程菌/细胞的筛选与鉴定：通过抗性筛选、PCR鉴定、测序、表达验证等获得稳定表达目标产物的工程株；(5)产物的表达与制备：大规模培养工程株，诱导目标产物表达，经分离纯化、质量控制后获得成品药物。解析：共5个核心步骤，每答出1个步骤得1分，步骤顺序颠倒扣1分，表述合理即可得分。2.答案：(1)B淋巴细胞可分泌特异性抗体，但在体外无法无限增殖；(2)骨髓瘤细胞可在体外无限增殖，但不能分泌特异性抗体；(3)两种细胞融合后形成的杂交瘤细胞兼具两个亲本的遗传特性，既能无限增殖，又能分泌特异性抗体；(4)通过HAT选择培养基筛选，只有融合成功的杂交瘤细胞可存活，未融合的亲本细胞会死亡；(5)对杂交瘤细胞进行克隆化培养与抗体特异性鉴定，获得可稳定分泌单一抗体的细胞株，经体内或体外扩增后制备大量单克隆抗体。解析：共5个核心要点，每答出1个要点得1分，需清晰体现两种亲本细胞的特性、融合后的优势、筛选逻辑。3.答案：(1)投料方式：分批发酵为一次性投料、一次性放罐；连续发酵为连续补加新鲜培养基，同时连续排出等量发酵液；(2)微生物生长特性：分批发酵有明显的延滞期、对数期、稳定期、衰亡期四个生长阶段；连续发酵可维持微生物在稳定的生长状态（如对数期）；(3)生产效率：分批发酵辅助时间长、设备利用率低；连续发酵可连续运行、生产效率高、设备利用率高；(4)产物特性：分批发酵产物浓度较高，但批次间差异大；连续发酵产物浓度相对较低，但质量稳定、均一性好；(5)风险与成本：分批发酵染菌风险低、菌种退化概率小；连续发酵长期运行易发生染菌和菌种退化，对过程控制要求高。解析：共5个对比维度，每答出1个维度得1分，表述合理即可得分。4.答案：(1)目标导向原则：根据目标产物的理化性质、生物学特性及质量要求选择合适的纯化方法；(2)活性优先原则：全程控制温度、pH、剪切力等条件，避免蛋白质变性失活，尽量缩短纯化流程；(3)高效经济原则：减少纯化步骤，提高产物回收率，降低能耗与原材料成本；(4)纯度达标原则：有效去除杂蛋白、核酸、热原、内毒素等杂质，符合药品质量标准；(5)可放大原则：选择的纯化方法需适合工业化大规模生产，工艺稳定、重复性好。解析：共5个核心原则，每答出1个原则得1分，表述合理即可得分。5.答案：优点：(1)安全性高：病原体已完全灭活，无回复突变或致病风险，适合免疫功能低下人群；(2)稳定性好：易于储存和运输，对冷链要求相对较低；(3)制备简单：无需进行毒力减弱筛选，适合难以减毒的病原体。缺点：(4)免疫原性较弱：通常需要多次加强接种，且需添加佐剂增强免疫效果；(5)免疫应答局限：主要诱导体液免疫，细胞免疫应答弱，免疫力维持时间相对较短。解析：共5个要点，优点3点、缺点2点，每答出1个要点得1分，表述合理即可得分。五、论述题1.答案：###一、动物细胞工程制药的特点（5分）(1)产物活性高：动物细胞可对重组蛋白进行正确的折叠、糖基化、磷酸化等翻译后修饰，产物结构与天然蛋白高度一致，生物学活性远高于原核表达产物；(2)培养要求高：动物细胞对培养温度、pH、溶氧、渗透压、剪切力等条件敏感，培养环境控制精度要求高；(3)培养成本高：细胞生长速度慢、培养周期长，培养基成本高，大规模培养设备投资大；(4)产物易纯化：多数重组蛋白为分泌型表达，培养基中杂蛋白含量低，分离纯化步骤相对简单；(5)安全要求严：动物细胞培养易受支原体、病毒等污染，需严格的无菌控制与质量检测。###二、常用宿主细胞的优缺点（5分）(1)CHO细胞（中国仓鼠卵巢细胞）：是目前应用最广泛的宿主细胞。优点：遗传背景清楚、表达量高、可进行复杂的人源型糖基化修饰、适合悬浮培养、已通过大量临床验证安全性；缺点：培养周期长、成本高、基因编辑难度相对较大。（2分）(2)骨髓瘤细胞（如SP2/0、NS0）：主要用于单克隆抗体制备。优点：融合效率高、抗体表达量高、适合无血清悬浮培养；缺点：仅适用于抗体类药物生产，通用性较弱。（1分）(3)HEK293细胞（人胚肾细胞）：优点：转染效率高、适合瞬时表达，可快速获得少量重组蛋白，常用于早期研发阶段；缺点：稳定表达的产量低于CHO细胞，临床应用的安全性验证数据少于CHO细胞。（1分）(4)昆虫细胞（杆状病毒表达系统）：优点：表达量高、可进行多数翻译后修饰、安全性高（杆状病毒不感染人）；缺点：糖基化类型与哺乳动物细胞存在差异，需进行人源化改造。（1分）解析：特点部分共5点，每点1分；宿主细胞部分需至少答出3种常用细胞，其中CHO细胞为必答内容（占2分），其余每种细胞1分，总分5分；表述逻辑清晰、结合工业实际即可得分。2.答案：###一、技术原理（2分）mRNA疫苗是将编码病原体抗原（或肿瘤抗原）的mRNA经脂质纳米颗粒（LNP）等递送系统导入人体细胞，利用人体细胞的翻译系统合成抗原蛋白，抗原蛋白经加工提呈后诱导机体产生特异性体液免疫和细胞免疫应答，从而达到预防或治疗疾病的目的。###二、技术优势（4分）(1)研发速度快：仅需获得抗原的基因序列即可快速设计合成mRNA，无需培养病原体或构建工