肠道病原菌的分离与鉴定

微生物学检验肠道病原菌的分离与鉴定标本·培养·鉴定·判读年份2026年课程导览01标本采集与处理来源选择、合格标准与运送要求02分离培养技术培养基选择、接种方法与培养条件03鉴定方法与确证生化反应、血清学与分子鉴定04常见病原菌与判读典型菌种举例与结果报告要点01标本采集与处理标本质量决定检验成败从采集到运送，每一步都影响结果标本来源因症而异不同临床表现对应不同标本类型粪粪便适用情况腹泻、肠炎采集要点取新鲜脓血黏液部分肛肛拭子适用情况排便困难、婴幼儿采集要点插入肛门旋转采取呕呕吐物适用情况食物中毒采集要点采集可疑食物残渣血血液适用情况伤寒、菌血症采集要点抗生素使用前采集合格标本是检验前提合格标本合格标准含脓血黏液、无尿液及消毒剂污染运送方式使用专用运送培养基，保持湿润不合格标本不合格情形水样便、陈旧标本、混入尿液，应拒收或注明送检要求采集后尽快送检，避免久置与干燥增菌培养提高检出率增菌培养可提升低菌量标本的检出率直接接种1项直接划线分离急性期、脓血便标本可直接划线分离增菌培养4项先行增菌恢复期、慢性患者及携带者宜先增菌沙门菌、志贺菌增菌可用

GN增菌液

或亚硒酸盐增菌液弧菌增菌用碱性蛋白胨水增菌转种分离增菌后转种选择性平板分离02分离培养技术选对培养基，分离事半功倍增菌、分离、纯化三步走选对培养基是关键选择性培养基抑制杂菌，鉴别培养基区分目标菌选择培养基抑制杂菌生长，鉴别培养基区分目标菌，为病原菌分离提供准确前提常用分离培养基选择性SS琼脂，抑制革兰阳性菌，鉴别乳糖发酵鉴别性麦康凯琼脂，区分乳糖发酵与非发酵菌选择性鉴别XLD琼脂，分离沙门菌与志贺菌增增菌与弧菌分离增菌液碱性蛋白胨水，弧菌增菌选择性TCBS琼脂，分离霍乱弧菌、副溶血弧菌分区划线获得单菌落分区划线法通过逐区稀释获得单个菌落关键操作分区划线须做到逐区稀释，确保单菌落分离分离纯化操作要点3项灼烧接种环每区划线前灼烧接种环，冷却后再划下一区力度均匀划线力度均匀，避免划破琼脂挑取单个菌落挑取单个菌落进行纯化与后续鉴定培养条件与菌落观察培养温度一般35至37摄氏度气体环境多数需氧培养，弯曲菌需微需氧培养时间通常18至24小时观察结果菌落观察2项观察内容菌落大小、形态、颜色、溶血与边缘乳糖发酵颜色乳糖发酵菌落呈红色，非发酵菌落呈无色或黄色03鉴定方法与确证初筛定方向，确证定结论生化、血清学与分子鉴定层层递进生化反应初筛定方向试验方法要点结果判读三糖铁试验斜面与底层穿刺观察产酸、产气与硫化氢IMViC试验吲哚、甲基红、VP、枸橼酸盐区分大肠埃希菌与产气肠杆菌氧化酶试验滴加氧化酶试剂肠杆菌科阴性，弧菌多为阳性尿素酶试验接种尿素培养基变形杆菌阳性，将菌种缩小到属或种。血清学鉴定精准定型抗原与抗体特异性结合，产生可见凝集玻片凝集法待检菌与已知诊断血清混合观察多价筛查阳性后再用因子血清分型生理盐水对照排除自凝现象抗原分型沙门菌分O抗原与H抗原，志贺菌按菌群分型分子与自动化确证临床常将多方法联合使用以提高准确性分子生物学高灵敏度聚合酶链反应检测特异性核酸，灵敏度高🔬核酸探针与基因测序疑难确认用于疑难菌株确认全自动鉴定系统自动判读依据生化反应谱自动判读质谱技术快速鉴定通过蛋白质指纹实现快速菌种鉴定04常见病原菌与结果判读典型菌种心中有数判读有据，报告有方常见肠道致病菌一览病原菌主要鉴定特征沙门菌革兰阴性杆菌，产硫化氢志贺菌革兰阴性，不产硫化氢致病性大肠埃希菌乳糖发酵，需血清分型霍乱弧菌弧形，碱性胨水中生长副溶血性弧菌嗜盐，TCBS上绿色菌落弧菌与特殊病原菌霍乱弧菌TCBS琼脂上呈黄色菌落副溶血性弧菌嗜盐，TCBS上呈绿色菌落，多见于海产品弯曲菌需微需氧环境与专用培养基耶尔森菌可冷增菌，低温条件下生长结果判读与报告要点规范操作是结果可靠的前提综合判读结合标本来源、菌落特征、生化与血清学结果。确证报告报告菌种名称，必要时附药敏结