DB44／T 599-2009 赤眼蜂蜂种采集保存技术规程

DB44/T599—2009赤眼蜂蜂种采集保存技术规程2009-02-26发布2009-06-01实施I1赤眼蜂蜂种采集保存技术规程赤眼蜂是小蜂总科(Chalcidoidea),赤眼蜂科(Trichogrammatidae),赤眼蜂属(Trichogrammm)个体微小的卵寄生蜂，其体长一般不超过1.0mm,翅面微毛排列成行，复眼为红色。具有资源丰富、分布广泛和对害虫控制作用显著等特点。已成为世界性的重要天敌昆虫，并被广泛用于多种农林害虫的生物防治。3.1.1野外采集工具3.1.2记录工具防治对象卵盛期末。3.2.2.2寄主卵获得2将带有寄主卵的植物(不少于10株)随机放置于田间。对于人工饲养获取的寄主卵，用无色无味的胶水粘贴在植物上，粘贴部位与害虫卵自然分布部位相同，粘好后标记，供收集时确定位置。48h内将挂出的寄主卵取回。收集寄主卵时，用剪刀连同植物叶片一同取下，装入准备好的玻璃3.3.1.1记录的标准格式表1赤眼蜂采集记录本采集编号采集时间采集地地理特征海拔纬度经度采集地生态特征植物种类寄主昆虫种类赤眼蜂种类及学名采集寄主卵块数量采集寄主卵粒数量采集寄主卵部位寄主昆虫为害程度寄主昆虫防治方式农药使用记录将装有采集物的玻璃管插在采集袋中的固定夹上，单独固定，管口同一个方向，玻璃管不能相互接触碰撞，置于阴凉处。在回到驻地整理后及时置于带有冰袋的广口保温瓶或保温盒等低温装置内。塞、标签、保鲜盒、橡皮胶圈、双目解剖镜、显微镜。4.1.2混合种群分离4.1.2.1混合种群的发育将装有赤眼蜂混合种群寄生卵的玻璃管放置于25℃,相对湿度70%的人工气候箱内发育，待寄生卵羽化出蜂后，让其充分交配12h再进行单蜂分离。3赤眼蜂混合种群、交配12赤眼蜂混合种群、交配12h后单蜂分离提供在紫外灯下照射过的新鲜寄主卵，发育3d-4d后(寄主卵壳颜色变深)未交配雌蜂子代雄蜂子代雌蜂交配12h后蜂种鉴定蜂种鉴定蜂种保存雄蜂雌蜂蜂种鉴定蜂种保存雄蜂及未产卵雌蜂(寄主卵壳颜色未变)根据触角判断雌雄经交配雌蜂雄蜂双目解剖镜、显微镜、解剖针、载玻片、盖玻片、细毛笔、标签纸、玻璃管、乳酸、结晶酚、蒸馏水、冰醋酸、中性树胶、标签、阿拉伯树胶、水合氯醛、甘油、滤纸、吸泵。醋酸乳酸酚浸液的配制方法：先将乳酸(10份)、结晶酚(5份)溶于蒸馏水(5份)中即成乳酸酚溶液；然后再按5:7的比例，在乳酸酚溶液(5份)中，加入冰醋酸(7份)。4将已死亡的赤眼蜂放在双目解剖镜下观察，根据触角特征用解剖针将雄蜂挑出。赤眼蜂雌雄蜂的鉴别特征参见附录A。取雄性赤眼蜂标本，先经过醋酸乳酸酚浸液浸泡6-12h至虫体透明，取出用于外生殖器的挑取。先将极少量荷氏液或中性树胶滴在载玻片上，然后将透明好的赤眼蜂标本放到载玻片液体中，在双目解剖镜下用解剖针轻轻而又快速挑拨雄性外生殖器，待外生殖器被挑下后，再滴少量荷氏胶进行整姿，等液体处于半凝固状态时，再滴少量荷氏液或中性树胶，最后加盖玻片封片、贴上标签。雄性外生殖器是鉴定赤眼蜂种类的准确依据，雄性外生殖器的结构参见附录A。这些构造形态和长短、大小比例，是鉴别种类的重要特征。赤眼蜂蜂种的鉴定应参考相关的赤眼蜂分类资料进行。5.1寄主卵的准备(以米蛾为例)5.1.1.2饲料的配制将80%面粉、10%玉米面和10%豆粉混合均匀，加水10%～15%后再混合均匀。用高压灭菌锅在米蛾饲养盒(见附录B)内装饲料5cm深，将米蛾卵约1ml均匀地撒在饲料的表面。接种后用手持喷雾器在饲料表面上喷水保湿，以不见结团为宜。其后可根据需要补充投放1次～2次饲料。接种后，将饲养盒放在饲养架上生长发育。养过米蛾的饲料要及时搬出饲养室，米蛾饲养盒要常清洗。将产卵笼轻放于搪瓷盘内产卵，并在产卵笼上方放置吸有30%蜂蜜水的棉条供米蛾取食补充营养，每天用毛刷将产卵笼上的米蛾卵和杂质清扫落在下边的搪瓷盘内。将收集到的米蛾卵装入2cm×5cm玻璃管中，塞紧管口，贴上标签，放入4℃冰箱中。经常检查，如发现卵有返潮结块现象则应倒出用毛笔打散，晾去多余的水分，再重新装管贮存。米蛾卵的保存时间一般不应超过15d。5.2.1寄主卵卡的制作参见4.1.2.2。55.2.3接蜂在人工气候箱内培养的赤眼蜂寄生卵，需要定期在显微镜下检查并记录赤眼蜂的发育阶段。赤眼蜂各发育阶段的主要特征见附录C。5.2.5.1变温锻炼5.2.5.2定期用原寄主卵繁殖按照5.2.3的方法接蜂后，将玻璃管置于25℃,相对湿度70%的人工气候箱内培养2d后，移至15℃~16℃下2h,然后在10℃~12℃下3h,最后用保鲜膜将管口包好，放入4℃冰箱中保存，保存时6A.1赤眼蜂雌/雄蜂触角的特征1—柄节；2—梗节；图A.1赤眼蜂的触角(左右9)7赤眼蜂雄性外生殖器(图A.2)分为阳基及阳茎两部分；阳基是一个中空的鞘，阳茎位于鞘的中央；阳基的端部两侧有阳基侧瓣，背面有阳基背突，某些种类在阳基背突的两侧有明显突出的侧叶；大多数种腹面有腹中突，自腹中突的基部开始，常有骨化较明显而向后延伸的中脊，腹中突的两侧有一对可活动的钩爪。这些构造形态和长短、大小比例，是鉴别种类的重要特征。1-阳基侧瓣；2一腹中突；4—钩爪；8米蛾饲养盒(图B.1)为长50cm、宽30cm、高10cm的木盒，木盒顶盖装有40目铁丝筛网，以保持透气。米蛾产卵笼的构造示意如图B.2。产卵笼为圆桶形，长40cm、直径20cm,桶壁由40目铁丝筛网围成，两端为圆形木板，在一端设置孔门，通过此孔门将成虫从收集瓶倒入产卵笼。9预蛹期：寄主卵壳色泽变黑，卵内营养物质被吃尽，但蜂的个体复眼仍未显露，身体腹背显现排列整齐的梅花状斑点。蛹期：圆形的复眼和单眼十分明显，复眼呈现朱红色；头、胸、腹三部分明显；足的节间明显。蛹后期时，生殖器显现。表C.1不同种类赤眼蜂低温储存适宜温度、龄期及保存时间赤眼蜂种类拉丁学名温度(℃)储存时间(d)松毛虫赤眼蜂Trichogrammadendrolimi幼虫初期广赤眼蜂T.evanescens9～12卵期或幼虫期玉米螟赤眼