病原微生物菌毒种保藏管理细则

病原微生物菌毒种保藏管理细则一、总则病原微生物的保藏不仅是物理存储，更是贯穿生物安全红线与国家监管要求的法律责任。本细则旨在规范保藏行为，防止菌毒种泄漏、变异、丢失或被盗。第一条为加强病原微生物菌毒种保藏管理，保障实验室生物安全，依据《中华人民共和国生物安全法》《病原微生物实验室生物安全管理条例》及《人间传染的病原微生物名录》（以下简称《名录》），制定本细则。第二条本细则适用于本机构内所有从事病原微生物菌毒种保藏、分发、使用及销毁活动的部门与人员。第三条保藏工作实行“分类管理、分级负责、双人双锁、全程追溯”原则。第一类、第二类病原微生物菌毒种为核心管控对象，必须实行最高级别物理安保与生物隔离。二、组织机构与职责划分权责清晰是避免管理盲区的核心，每一株菌毒种必须有唯一的安全责任人。第四条设立病原微生物保藏管理委员会（以下简称“委员会”），由分管科研的副所长任主任，生物安全负责人任副主任，成员包括保藏中心负责人、实验室负责人及安保部门负责人。委员会每季度召开1次例会，审议入库/出库清单，并形成会议纪要存档。第五条保藏中心负责人职责：•审核菌株分类等级与保藏条件匹配度；•指定专人作为“双锁保管员”；•每月5日前完成上月度保藏台账的盘点复核，签字确认。第六条生物安全员职责：•监督保藏设施运行状态，每周至少1次现场巡查；•审核灭菌销毁方案的可行性；•有权叫停任何违反生物安全操作规程的存取行为。三、设施设备与环境要求硬件屏障是抵御病原泄漏的第一道物理防线，其参数标准直接决定保藏成败。第七条物理安保设施

保藏库必须设置独立机房，安装防盗门及双人双锁生物安全柜（或超低温冰箱）。门禁系统应当采用人脸识别加指纹双重认证，数据保存期限不少于180天。严禁仅使用普通机械钥匙（容易复制且无操作记录）。第八条温控设备分级标准•优先使用液氮气相罐保藏需长期休眠的高致病性菌毒种（温度需维持在−150•若无液氮设备，可使用超低温冰箱（−80±5•严禁将不同风险等级（如第二类与第三类）的菌毒种存放于同一物理空间（防止交叉污染与低级别区域管理疏漏导致高风险菌株失控）。第九条环境监测与报警系统

保藏库必须配备7x24小时温湿度监控及氧气浓度报警器。液氮罐区域氧气浓度报警下限设定为19.5%（液氮挥发会导致氧气被挤占，低于此阈值人员易发生无症状窒息）。系统异常时必须能在15分钟内通过短信推送至保藏中心负责人及安保值班手机。备用电源（UPS）续航能力必须不少于4小时。四、菌毒种的入库与验收入库验收是阻断不合格或未经审批菌株进入保藏库的关键闸门。第十条入库前置审批

拟保藏菌毒种必须具备完整背景资料（包括但不限于：株名、来源、分离日期、生物学特性、致病性评估）。申请部门需提前3个工作日提交《菌毒种入库申请审批表》，经保藏中心负责人初审、生物安全员复核、委员会授权代表终审签字后方可入库。严禁“先存后批”或“口头同意入库”。第十一条实物验收与编码规则

实物交接必须在BSL-2及以上级别生物安全柜内进行。验收员需穿戴个体防护装备（PPE），检查运输包装完整性及温度记录（运输全程温度脱档超过30分钟拒收）。验收合格后，赋予唯一性编码，规则为：“风险等级-年份-流水号”（例：BSL-2-2024-001）。第十二条信息录入与双人复核

编码信息录入保藏管理系统时，必须由录入员与复核员分别登录操作。系统应当具备字段防呆功能，关键数据（株名、批号）不可全角空格或特殊字符。录入完成即刻生成《菌毒种保藏登记表》（见附件1），由双人签字后归档。五、保藏方法与日常管理维持微生物存活与遗传稳定性的本质，是阻断其代谢降解与外界物理破坏。第十三条冷冻干燥保藏法（首选方案）

将菌液与脱脂牛奶保护剂按1:1混合，分装至安瓿瓶（每瓶0.2∼0.3ml）。预冻温度−40第十四条日常温控与盘点

保藏中心值班员每日9:00及16:00记录液氮罐或冰箱温度。超低温冰箱除霜期间必须将菌种转移至备用冰箱，严禁在除霜周期内将菌种留存在箱体内（化冻-复冻循环会致使冰晶重结晶刺破细胞壁，致死率超90%）。每月组织1次实物盘点，账物相符率必须达到100%，差异必须在2小时内启动追溯调查。第十五条传代与复苏管理

冷冻干燥菌种原则上不进行传代。确需复苏时，应当按“最小用量”原则取用。复苏操作必须在生物安全柜内进行，使用20∼25∘六、菌毒种的出库与分发出库流转是菌毒种脱离物理管控的高风险窗口，必须遵循“双锁、双审、双人”原则。第十六条出库申请与资质审核

申请部门需提交《菌毒种出库使用申请表》，写明用途、用量（精确到支/管）、使用期限及实验项目编号。接收人必须具备与该菌种风险等级相适应的实验室操作资质（BSL-2实验活动需持上岗证满1年）。委员会在2个工作日内完成审批。第十七条取出与移交

出库时，双锁保管员必须同时在场开锁。取出后立即核对标签编码，并在出库登记表上双签。移交流程必须在视频监控下完成，视频应当清晰记录交接双方面貌及物品标签。第十八条严禁个人私自带出或邮寄菌毒种（无论何种等级，邮寄均可能因包裹破损导致公共暴露，构成非法运输危险物质罪）。跨机构转移第一类、第二类菌毒种，必须向省级卫生健康行政部门申请准运证书，并由2名以上专业人员专车押运。七、销毁与灭活处理销毁是菌毒种生命周期的终结点，必须做到彻底灭活且全过程证据可追溯。第十九条销毁审批与方案确认

因失去活性、污染杂菌或项目结束需销毁菌毒种时，申请部门需提交《菌毒种销毁申请单》，附销毁方案。方案必须明确灭活方式、参数及效果验证方法。销毁第二类以上菌毒种必须经委员会逐株审批。第二十条高压蒸汽灭菌操作规程

将废弃菌种放入专用医疗废物灭菌袋，置于高压蒸汽灭菌器内。对于细菌繁殖体及病毒，参数设定为121∘C、0.1M第二十一条灭活效果验证与记录归档

灭菌结束后，必须用留点温度计或生物指示剂（如嗜热脂肪芽孢杆菌孢子条）验证灭菌效果。生物指示剂需在56∘八、应急处置预案泄漏事故的演化往往以秒计，预案的核心在于预设阻断路径与固化肌肉记忆。第二十二条风险演化与阻断点

液氮罐破裂或菌种管碎裂→病原体附着于液氮气溶胶或玻璃渣飞溅→随气流扩散至操作区或走廊→人员吸入或黏膜接触导致实验室感染。阻断点在于：立即封锁局部通风系统，人员撤离前进行表面化学消毒。第二十三条分级应急响应•一级（局部小量泄漏，未溢出生物安全柜）：操作人员立即用浸透5000mg/L有效氯的次氯酸钠消毒液（覆盖30分钟）覆盖污染区。保持安全柜运行30分钟以上，期间严禁拉出柜门。启动权限：实验室操作人员。•二级（大量泄漏，污染实验室地面或设备）：立即按下房间紧急停止键阻断回风，人员从缓冲间撤离并脱卸PPE，房门张贴生物危险警告标识。用消毒液对溢洒区域进行“包围-吸收-覆盖”三步处理。启动权限：生物安全员。•三级（泄漏导致人员暴露或扩散至公共区域）：立即启动全楼疏散，封锁现场，暴露人员就地隔离观察。1小时内上报属地卫健委及公安部门。启动权限：保藏管理委员会主任。第二十四条液氮窒息应急处理

保藏库氧气报警器报警时，严禁未佩戴正压自给式呼吸器（SCBA）人员进入（低氧环境下人可在10秒内丧失意识）。必须先开启强排风系统15分钟，待氧浓度恢复至20%以上方可进入施救。伤员转移至通风处，若呼吸停止立即施行心肺复苏并呼叫120。九、监督检查与违规处罚制度的生命力在于执行，定期的穿透式检查是发现隐患的唯一手段。第二十五条PDCA闭环监督机制•计划：每季度首月5日前，生物安全员制定本季度《保藏安全检查表》。•执行：每月15日进行现场检查，重点核查账物相符率、温度曲线连续性及门禁记录。•检查：委员会主任每季度抽查不少于10%的高风险菌株档案。•改进：发现不符合项需在24小时内下发整改单，责任部门需在3个工作日内提交根因分析报告，生物安全员跟踪复查闭环。第二十六条处罚措施•违规未登记入库：暂停该部门实验权限1个月，扣发实验室负责人当月绩效。•篡改温控记录或伪造签名：定性为严重生物安全违规，对当事人予以解除劳动合同处理，并报备上级主管部门。•发生菌株丢失或泄漏且瞒报：移交司法机关依据《中华人民共和国生物安全法》追究刑事责任。十、附则第二十七条本细则自发布之日起施行。原《病原微生物保藏管理规定》同时废止。第二十八条本细则由病原微生物保藏管理委员会负责解释。附件1：菌毒种入库申请审批表样表字段名称填写示例审核重点申请部门呼吸道病毒室必须为独立建制部门菌毒种名称新型冠状病毒Delta变异株拉丁学名/标准命名来源机构省疾控中心送检需附带交接凭证编号风险等级第二类依据《名录》核对拟保藏量20管(每管0.5ml)明确支数与体积保藏条件液氮气相(−150匹配设备现状申请人签字张某某必须手签日期保藏中心意见同意入库，编码BSL-2-2024-001负责人签字生效附件2：应急联络通讯录岗位姓名手机号码职责委员会主任王某某138******三级响应总指挥生物安全员李某某139******现