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文档简介

氨基酸和蛋白质的提取分离技术一、氨基酸氨基酸是一类分子中既含有氨基又含有羧基的化合物。必需氨基酸：组成人体蛋白质的基本单位，人体必不可少又不能自身合成天然游离氨基酸：以游离状态存在必需氨基酸：组成人体蛋白质的基本单位，人体必不可少又不能自身合成精氨酸谷氨酸组氨酸天然游离氨基酸：以游离状态存在使君子使君子氨酸天然游离氨基酸：以游离状态存在天然游离氨基酸：以游离状态存在天门冬酰胺天然游离氨基酸：以游离状态存在三七三七素结构与分类按氨基羧基数目（按性质）中性氨基酸酸性氨基酸碱性氨基酸按氨基羧基相对位置（按结构）α-氨基酸β-氨基酸γ-氨基酸1.性状无色结晶，熔点较高。2.溶解性易溶于水，难溶于有机溶剂。3.等电点利用这一特性进行氨基酸的分离和精制。4.茚三酮反应α-氨基酸与水合茚三酮加热反应，显紫色或蓝紫色。(二)理化性质提取蛋白质氨基酸先水解为氨基酸后再提取分离水解方式：酸水解、碱水解、酶水解提取：水提法、醇提法游离氨基酸水提法、醇提法（根据氨基酸极性强、易溶于水及稀醇的性质）(三)提取与分离分离氨基酸溶解度不同改变溶剂、温度、pH（等电点）等使不同氨基酸沉淀析出氨基酸成盐氨基酸可与一些无机或有机化合物形成难溶性盐而析出电泳法一定pH时，不同氨基酸所带电荷不同，在电场中移动速率不同，通过调节溶液pH实现分离各种氨基酸离子交换法不同氨基酸在同一pH环境中，所带净电荷不同，与离子交换树脂交换的能力不同，吸附能力不同，从而分离化学检识（1）Ninhydrin反应供试液中加入茚三酮试剂，α-氨基酸与水合茚三酮加热反应，显紫色或蓝紫色。（应避免实验室中氨气的干扰。）（2）Isatin反应供试液中加入吲哚醌试剂，不同的氨基酸与吲哚醌试剂产生不同颜色，（不受氨气的影响，但其灵敏度不及茚三酮试剂。）(四)检识2.色谱检识纸色谱或薄层色谱是鉴别和分析氨基酸的常用方法。（1）薄层色谱常用的展开剂为正丁醇-醋酸-水（4:1:5上层，BAW）；三氯甲烷-甲醇-17％氨水（2:2:1），显色剂可用茚三酮试剂。（2）纸色谱常用的展开剂为正丁醇-醋酸-乙醇-水（4:1:1:2）、甲醇-水-吡啶（20:20:4），显色剂可用茚三酮试剂。二、蛋白质

蛋白质是一种由氨基酸通过肽键聚合而成的高分子化合物，分子量可达数百万甚至上千万。酶是一类具有催化能力的重要活性蛋白质，它的催化作用具有专一性，通常一种酶只能催化某一种特定的反应。天花粉（天花粉蛋白）水蛭麦芽苦杏仁理化性质等电点变性盐析溶解性水解性（二）提取与分离

冷水浸提透析法色谱法电泳法双缩脲反应：显紫色或深紫红色，是检识蛋白质的常用方法。

沉淀反应：加入重金属盐、乙醇、酸性沉淀试剂可使蛋白质产生沉淀。

色谱检识：可采用吸附薄层色谱，常用的吸附剂为硅胶G，展开剂为三氯甲烷-甲醇（或丙酮）（9:1），显色剂为2％

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