钙成像实验操作及数据处理参考幻灯片.ppt

1、，柳丝2017年8月25日，钙成像实验操作和数据处理，1，钙成像实验操作，2，1。钙成像原理，基本原则：使用钙离子指示剂监测组织或细胞内的钙浓度，反映组织或细胞内的特定活动或反应，钙离子指示剂：可表示钙离子的可视化物质，3，2。实验操作，操作步骤：(1)Fluo-4工质准备：每管Fluo-4am:8LD MSO 2lF-127(2)Fluo-4工质使用：使用液体稀释1000倍(双稀释为实验操作，(3)培养Fluo-4指示剂：扔掉培养皿中央培养基，加入500-1000lFluo-4溶液，在37 孵化20min。(4)清洗：处理Fluo-4溶液，用不含钙和镁离子的HBSS溶液分别清洗2-3min，

2、然后添加相应的沐浴液开始拍摄。(5)钙离子成像：用普通荧光显微镜或激光共聚焦显微镜拍摄。以LeicaSP5的CLSM为例。此处光线：采用488nm xyt时间轴拍摄模式：time interval:3s；Frames:200(取决于实验)。，5，钙图像数据处理，6，必需的软件，imagej，MATLAB，origin，Photoshop，adobe illustrator，7，照片处理，数据收集，soft，stiff，stiff，soft，soft，1.1。新剪辑x，要分析的组图表(第200章)剪辑x的1.2。贴图：打开ImageJ后，弹出一个新框SequenceOptions，点OK)1.3

3、。颜色转换：image - lookuptables - 16 _ colors(注意：如果颜色首先为灰色)1.4。调整角度：image-adjust-brightness/contrast(新框BC出现，图片经过优化调整)- Apply(新框Apply attoall 200图像编号sllChoosyes)、8、1。照片处理，数据收集，soft，stiff，stiff，soft，soft，1.5。选择单元：Analyze - Tools - ROIManager(在新框ROIManager中显示)- ShowallandLabels之前交叉-选择主菜单栏选择其他图形圆圈单元(ps)。先选择背

4、景，然后选择单元格-所有单元格后add帮助所有细胞后保存屏幕(PS)。标记单元的数目和顺序已保存)在新剪辑x上1.6 .数据导出器：roimanager - more - multi measure(弹出新框multime asure)-measure all 200image nu MbersSlices挂钩-OK-OK图片处理、数据收集、soft、stiff、stiff、soft、Soft、1.7。在剪辑x中创建新的excel条目，在新的Excel中命名为Results1.xls，删除Area列(仅保留编号、Mean、Slice三列)为1.8.ClosetheprogramImageJ，A

5、nalyze中的SetMeasurements将Mean值、10，2 .Matlab数据处理、soft、stiff、stiff、soft、soft、2.0。starttheprogramammatlab 2.1。复制程序：CalciumFlow20101105.m复制新剪辑x，文件夹x包含原始文件夹、屏幕快照、Results.xls、Results1.xls、calcium flow 20105 . m 2 . 2 . 2。打开指南文件夹x: Matlab后，单击右上角按钮.出现新的框浏览文件夹，选择要引导的文件夹x，然后进行验证。列出文件夹x中所有项目2.3的CurrentFolder出现在

6、Matlab程序的左侧。双击打开的文件夹x中新创建的excel项目Results1.xls(不打开原始excel项目)，将弹出结果1.xls中的数据。点按钮Import - ImportData，11，2。Matlab数据处理、soft、stiff、stiff、soft、soft、2.4。修改程序：双击左侧打开剪辑x中的calcium flow 20101105 . m 05 . m 05 . m，弹出程序语言，然后根据每个图片修改程序，包括修改三个路径(fout=fopen，fin=fopen，fout=fopen)。Nreg=、总图形(np=)、基线基线基线(nnp=20，15，10，5)、拍摄间隔(tstep=)2.5。单击配送按钮如果配送成功，左侧剪辑x上将显示in.txt和out.txt，表示配送成功。否侧发送错误通知2.6。closetheprogrammatlab，12，3。origin数据映射、soft、stiff、stiff、soft、soft、3.0 starttheprogramorigins 3.1。打开OriginPro8.5后，单击以选择File - import - single ascii -弹出的新框指南文件夹x中的out.txt、弹出的Book3.2. Book的左上角，然后单击鼠标右键，再单击“plot”。plot-li