拓展视野　多利羊猜想.ppt

1、主要用于制备,单克隆抗体,获得杂种植株,主要用途,物理、化学方法,（同左）,灭活的病毒,物理（离心、振动、电刺激）,化学（聚乙二醇）,诱导方法,使细胞分散后诱,导细胞融合,去除细胞壁后诱导原生质体融合形成杂种细胞，再经组织培养形成杂种植株，,步骤,细胞膜的流动性,细胞膜的流动性、,植物细胞全能性,原理,动物细胞融合,植物体细胞杂交,比较项目,植物体细胞杂交与动物细胞融合的比较,强调：效应B细胞是能够产生抗体的B淋巴细胞，下文将其简称为B淋巴细胞,抗体：能够与抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。,温故知新,1.抗体是什么？2.抗体如何产生？3.抗体主要分布在哪里？,能产生抗体的细胞是浆细胞（即效应B

2、细胞）。,4.如果一个农夫被毒蛇咬了，如何获得相应的抗体来治疗？,抗体的传统生产方法,抗原,反复注射,从动物的血清中分离抗体,该法制备抗体的缺点：产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。,如何解决这个问题呢？,单克隆抗体！,2.1单克隆抗体的定义：克隆单个B淋巴细胞其所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。,单：单个B淋巴细胞克隆：该细胞大量增殖为相同的细胞群抗体：该细胞群产生的特异性抗体。,二、单克隆抗体,一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体骨髓瘤细胞能无限增殖,杂交瘤细胞,动物细胞培养技术,设计方案：,动物细胞融合技术,单克隆抗体,既能迅速大量增殖，又能的产生专一抗体,197

3、5年英国科学家米尔斯坦和柯勒的实验,活动二：阅读课本P53-54,思考与讨论:1.为什么要对小鼠进行注射特定的抗原？2.选择了哪两种细胞进行细胞融合？3.为什么选这两种细胞？4.细胞融合后获得几种类型的融合细胞？5.有几种杂交瘤细胞？6.两次筛选的目的？7.如何大量生产单克隆抗体？,2.2单克隆抗体的制备过程,用抗原免疫小鼠,骨髓瘤细胞的培养,B淋巴细胞,骨髓瘤细胞,融合,多种细胞,获得产生相应抗体的B细胞,产生专一抗体,无限增殖,BB、B瘤、瘤瘤（B、瘤）,由于培养基中缺乏相应的营养物，骨髓瘤细胞死亡,B淋巴细胞培养几天后死亡,杂交瘤细胞,置于选择性培养基上培养,（一选）选择性培养基：只有杂

4、交瘤细胞才能存活,杂交瘤细胞特点：既能产生特异性抗体，又能大量增殖。,多孔细胞培养板,阳性克隆的筛选和克隆化培养,用培养液稀释,（二选）：选能产生所需专一抗体的杂交瘤细胞,注射到小鼠体内,体外培养,由单个杂交瘤细胞通过克隆，所产生的化学性质单一、特异性强的抗体。,单克隆抗体,活动三、用以下文字和箭头来构建单克隆抗体的制备过程,小鼠、注射特定抗原、已免疫的B淋巴细胞、骨髓瘤细胞、BB细胞，B瘤细胞，瘤瘤细胞、杂交瘤细胞、产生专一抗体的杂交瘤细胞、体外培养、体内培养、单克隆抗体、融合、筛选,你学会了吗？,过程：,B淋巴细胞骨髓瘤细胞,融合,B-B细胞,B-瘤细胞,瘤-瘤细胞,选择性培养基筛选,杂交

5、瘤细胞（B-瘤细胞）,克隆化培养,专一抗体检验阳性,产生专一抗体的杂交瘤细胞（群）,体外培养,单克隆抗体,瘤细胞,B细胞,小鼠,注射特定抗原,3）、为何要进行两次筛选？,4）、如何进行第2次筛选？,培养在多孔培养板上，每孔只有一个杂交瘤细胞，进行专一抗体检验阳性。,第1次筛选得到杂交瘤细胞（多种）。第2次筛选得到能产生特异性抗体的杂交瘤细胞群。,问题强化：,1）、本过程利用了哪些原理？,免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养原理,2）、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合？,这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质，不仅具有B细胞分泌抗体的能力，而且还有无限增殖的本领，因而可以获得大量单

6、克隆抗体,2.3单克隆抗体的应用,诊断试剂最广泛应用准确、高效、简易、快速,单克隆抗体最主要的优点：特异性强，灵敏度高，并能大量制备。,用抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体做成的“早早孕诊断试剂盒”，灵敏度很高，在妊娠第8天就可以做出诊断，比原来的诊断方法提前了10天左右，可以避免孕妇在不知道妊娠的情况下因服用药物而对胎儿造成不利影响。该方法检测的准确率在90以上。,“生物导弹”单克隆抗体药物单抗导向，药物为弹头,治疗疾病和运载药物,主要用于治疗癌症治疗，单克隆抗体作为载体，运载抗癌药物，形成“生物导弹”，准确杀伤癌变细胞。,1.动物细胞融合最常用的诱导方法是（）A.离心B.灭活的病毒C.电刺激D

7、.振动2.动物细胞融合的作用中最重要的是（）A.克服远源杂交不亲和B.制备单克隆抗体C.培育新物种D.生产杂种细胞,B,B,课堂评价,评价方向：学习目标1动物细胞融合的方法、意义,3.单克隆抗体是由下列哪种细胞产生的（）B淋巴细胞BT淋巴细胞C骨髓瘤细胞D杂交瘤细胞,课堂评价,D,评价方向：学习目标2单克隆抗体的概念,4.科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（）A.经过免疫的B淋巴细胞C.经过免疫的T淋巴细胞B.不经过免疫的T淋巴细胞D.不经过免疫的B淋巴细胞,A,课堂评价,评价方向：学习目标3单克隆抗体制备的过程,课堂评价,5下列关于单克隆抗体的叙述，错误的是A.特异性强、灵敏度高B.单克隆抗体就是“生物导弹”C.单克隆抗体可用于疾病诊断和治疗D.生产单克隆抗体需要利用动物细胞培养技术,B,评价方向：学习目标4单克隆抗体的优点与应用,如图是制备分泌抗X抗体的过程，根据图解回答问题：,（1）给小鼠注射抗原的目的是_（2）在单克隆抗体制备过程中之所以选用B淋巴细胞和骨髓瘤细胞，是因为它们融合后的杂交瘤细胞具有_和_的特性（3）由图中可看出，单克隆抗体制备过程运用了_和_的动物细胞工程技术手段，前者常用的诱导剂与植物原生质体融合不同的是_（4）动物细胞培养液的配方通常含有葡萄糖