4-PCR技术ppt课件

1、1,PCR技术(1)概念：在_快速扩增_的实验技术称为PCR技术。(2)物质条件体外进行DNA复制的各种组成成分有：_、_、_、_。(3)PCR的反应过程PCR一般经历三十多次循环，每次循环可以分为_和_(72左右)。,体外,特定基因或DNA序列(目的DNA,片段),DNA模板,四种,脱氧核苷酸,Taq聚合酶,引物,变性,(94)、退火(4060),延伸,2,3,细胞内DNA复制与体外DNA扩增(PCR技术)的比较,1,4,5,引物设计原则,1、引物决定着扩增的特异性和扩增的效率2、引物设计影响到后续载体构建的效率3、引物设计影响到实验的成本引物设计软件Primerpremier4.11Oli

2、go6.0,6,数量：2个（一对）长度一般在1630个核苷酸，至少为16个核苷酸，不超过38个指与模板链完全配对的碱基数太短：特异性差太长：自身折叠形成二级结构；Tm过高，不利于与模板稳固配对，难以形成扩增起始二级结构。,引物设计原则,7,顺序应是所要扩增基因特异的顺序若要进行个体间的比较，应选择保守同一的顺序来设计引物碱基组成GC为4060ATGC最好随机分布,引物设计原则,8,防止引物自身形成二级结构一对引物的顺序不应自身互补特别要避免3-端的重叠，以免形成二聚体等特异的扩增条带防止发卡结构、茎环结构！,引物设计原则,9,下图为某一次循环的产物，请据图回答问题。,【巩固1】,(1)PCR一

3、般要经历三十多次循环，每次循环可分为_、_、_三个步骤。(2)DNA的羟基(OH)末端称为_，图中所示的羟基端为_(填字母)。(3)PCR技术与细胞内DNA复制在解旋时原理不同：细胞内复制利用_使双链间氢键断裂，而PCR技术利用_原理，使双链氢键断裂。以引物为标识，可判断出此产物最早为第_次循环的产物。,10,聚合酶链式反应(PCR技术)是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法，由高温变性、低温退火及适温延伸等几步反应组成一个周期，循环进行，使目的DNA得以迅速扩增，其简要过程如下图所示。下列关于PCR技术的叙述，不正确的是()。,【巩固2】,APCR技术是在实验室中以少量DNA制备大量DNA的

4、技术B反应中新合成的DNA又可以作为下一轮反应的模板CPCR技术中以核糖核苷酸为原料，以指数方式扩增D应用PCR技术与探针杂交技术可以检测基因突变,11,聚合酶链式反应(PCR)是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。PCR过程一般经历30多次下述循环：94条件下使模板DNA变性、解链56条件下退火(引物与DNA模板链结合)72条件下引物链延伸(形成新的脱氧核苷酸链)。下列有关PCR过程的叙述，不正确的是()。,【例1】,示例一PCR技术及应用,12,A变性过程中破坏的是DNA分子内碱基对之间的氢键，也可利用解旋酶实现B退火过程中引物与DNA模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成的C延伸过程中需要

5、DNA聚合酶、ATP、4种核糖核苷酸DPCR与细胞内DNA复制相比，其所需要酶的最适温度较高思维导图：,13,下列有关PCR技术的叙述，不正确的是()。A又称聚合酶链式反应，是一种体外迅速扩增DNA片段的技术B在用PCR技术扩增DNA时，DNA的复制过程与细胞内DNA的复制类似CPCR反应只需在一定的缓冲溶液中提供DNA模板以及四种脱氧核苷酸DPCR一般经历三十多次循环，每次循环分为变性、退火、延伸,【变式拓展1】,14,进行目的DNA片段的体外扩增，下列选项不需要的是()。ADNA聚合酶B解旋酶CMg2D引物解析DNA体外扩增是利用的DNA热变性原理，不需解旋酶。答案B,【变式拓展2】,15

6、,下列关于DNA复制叙述中，正确的是()。ADNA聚合酶不能从头开始合成DNA，只能从5端延伸DNA链BDNA复制不需要引物C引物与DNA母链通过碱基互补配对进行结合DDNA的合成方向总是从子链的3端向5端延伸解析本题主要考查了DNA聚合酶的作用特点。由于DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，只能从引物的3端延伸DNA链。由于模板链首先复制的是3端，即复制方向35，而DNA分子是反向平行的，子链是依据碱基互补配对原则，在DNA聚合酶作用下合成的，其合成方向从子链53。答案C,1.,16,PCR利用了DNA热变性的原理，PCR仪实际上是一种能自动调节温度的仪器。下列对PCR过程中温度的控制的说法错

7、误的是()。A酶促反应需要高温，是为了保证模板是单链B延伸的温度必须高于退火的温度，而低于变性的温度C要用耐高温的DNA聚合酶D需要耐高温的解旋酶解析PCR是体外DNA扩增技术，DNA双链的解开不需要解旋酶，靠高温使其变性。答案D,2,17,A向右的过程为加热(80100)变性的过程B向左的过程是DNA双链迅速制冷退火C变性与在生物体内解旋过程的条件、实质都相同D图中DNA片段共有4个游离的磷酸基、4个3端解析变性后的DNA在缓慢降温后才会退火；变性与在生物体内解旋过程的条件不同，实质相同；任一DNA片段都有2个游离的磷酸基(5端)和2个3端。答案A,下图为DNA变性和退火示意图，下列相关说法

8、正确的是()。,3,18,PCR一般要经过三十多次循环，从第二轮循环开始，上一次循环的产物也作为模板参与反应，由引物延伸而成的DNA单链做模板时将()。A仍与引物结合进行DNA子链的延伸B与引物结合进行DNA子链的延伸C同时与引物和引物结合进行子链延伸D无需与引物结合，在酶的作用下从头合成子链解析此题考查同学们对PCR反应中的变性、退火、延伸的实质能否真正理解。当由引物延伸而成的DNA单链做模板时，此单链引物端为5端，因此与它互补的子链应从另一端开始合成，即由引物结合延伸DNA子链。答案B,4,19,在遗传病及刑侦破案中常需要对样品DNA进行分析，PCR技术能快速扩增DNA片段，在几个小时内复制出上百万份的DNA拷贝，有效地解决了因为样品中DNA含量太低而难以对样品进行分析研究的问题。据图回答相关问题。,5,20,(1)在相应的横线上写出引物，并在复性这一步骤中将引物置于合适的位置。(2)在相应的横线上写出循环一次后生成的DNA分子。(3)若将作为原料的四种脱氧核苷酸用32P标记，请分析循环一次后生成的D