芽孢杆菌常用培养基配方

1、芽孢杆菌常用培养基配方（按理说，该实验的所有培养基都在这了，后红字更为清楚些。摘自百度）一、 肉汤琼脂培养基： 蛋白胨10g ，牛肉膏15g ，NACL15g ，蒸馏水1000ml ，琼脂18g 。 调节PH7.2,0.1MPA20min 灭菌。如果用液体做培养基，则去掉琼脂即可。100 mL/组，其中20 mL液体培养基/250 mL中（内装玻璃珠10颗）；50 mL固体斜面培养基分装在试管中：5mL/支，10支。2、 或是 （J-琼脂培养基： 胰蛋白胨5g,酵母膏15g, 磷酸氢二钾3g,葡萄糖2g, 琼脂20g, 蒸馏水1000ml。调节PH7.37.5Mpa 30min灭菌。）二、 过

2、氧化氢酶测定1、 试剂：3-10%过氧化氢2、 接种与培养：一般将测试菌种接种于肉汤琼脂斜面上，30度下培养1-2天。3、 试验方法：取一干净载玻片，在上面加一滴3-10%的双氧水，挑取1环1-2天的的菌苔，在双氧水溶液中涂抹，如有气泡出现（O2），作为过氧化氢酶阳性，无泡为阴性。也可以将过氧化氢液直接加入斜面上，观察气泡的产生。三、 需氧性测定1、 培养基：酪素水解物20g,葡萄糖10g, ,NACL5g,HOCH2SO3Na1g,HSCH2COONa2g,琼脂15g,蒸馏水1L。调节PH7.2，分装试管，0.06Mpa，30min灭菌，培养基不摆斜面。2、 接种与观察：用一小环的肉汤菌液，

3、穿刺接种到上述培养基中（穿刺管底），一般与30 度 培养3-7天观察结果。若芽孢杆菌在琼脂柱表面生长为好氧菌，沿穿刺线生长则为厌氧菌。四、 酪素水解（用于检测不同种类的芽孢杆菌是否具有分解酪素的特点）1、 培养基（1） 脱脂牛奶制备 取新鲜牛奶，煮沸后去掉上层油脂，再经离心脱脂（3000r/min,10min）,除去上层油脂，即为脱脂牛奶。（2） 牛奶平板的制备 取50ml的脱脂牛奶放入一只三角瓶中，另外称1.5g琼脂置于含有50ml蒸馏水的另外3只三角瓶中，然后将两液分开灭菌，0.06Mpa-20min，带冷至45-50摄氏度时，速将两液混匀倒平板，即为牛奶平板。将平板倒置过夜，使表面水分干

4、燥。2、 接种与观察将测试菌种以三点法点接在牛奶平板上，一般于30度培养1,3,5,7和14天，如菌落周围和下面呈透明，表明酪素已被分解。培养基1.1可溶性淀粉3g/L 蛋白胨10g/L 酵母膏3g/L KH2PO41.5g/L K2HPO42g/LMgSO4 0.1g/L PH 7.47.6 （富集用）1.2 肉汤（NA）培养基（营养琼脂）：蛋白胨10g/L 牛肉膏3-5g/L NaCl5g/L PH7.27.4（保存计数或分离纯化用）营养琼脂：麦芽汁培养基=1：1混合使用，菌落不易扩散，形态特征典型1.3蛋白胨 10g/L 酵母膏 5g/L 葡萄糖3.5g/L NaCl5g/L K2HPO

5、4 0.5g/L MgSO4 3g/L MnSO4 25mg/L PH 7.27.4（分离纯化用）1.4产淀粉酶菌株筛选培养基：可溶性淀粉3-5g/L 蛋白胨10g/L 牛肉膏3-5g/L NaCl 5g/L PH7.27.4（用于淀粉酶产生菌分离筛选）1.5产蛋白酶菌株筛选培养基1.5.1酪素培养基：2.1.5.1.1葡萄糖1g/L，酵母膏1g/L，酪素4-5g/L，K2HPO4 1g/L，KH2PO4 0.5g/L，MgSO4 0.1g/L 蒸馏水1000ml， pH7.0-7.2。另：葡萄糖0.5g/L，酪素10g/L，NaCl 5g/L K2HPO4 0.5g/L，KH2PO4 0.5

6、g/L，琼脂20g/L pH7.2-7.42.1.5.1.2牛肉膏3g/L或酵母浸粉5g/L 酪素10g/L NaCl 4-5g/L PH7.27.4先将酪素用少量2%氢氧化钠润湿，玻棒搅动，再加适量的蒸馏水，在沸水浴中加热搅拌至完全溶解（10-15min），补足1000mL蒸馏水，加入其他成分，调PH分装灭菌。2.1.5.1.3酵母膏0.05g/L 酪素4g/L KH2PO4 0.36g/L Na2HPO4 1.1g/L MgSO4 0.5g/L NaCl 0.16g/L FeSO4 0.002g/L CaCl2 0.002g/L ZnCl2 0.014g/L pH6.5-7.04酪素母液制

7、备：4g酪素溶解于0.1N的30-35mL的氢氧化钠溶液中，水浴溶解20min，溶解完毕后加入60-70热水定溶到100mL.200mL培养基加20mL.2.1.5.2脱脂奶培养基：牛肉膏3g/L（酵母浸粉5g/L） 蛋白胨10g/L NaCl5g/L 脱脂奶粉10-12g/L，PH7.2（用于蛋白酶产生菌的筛选）将脱脂奶（粉）加水溶解制成10溶液，于115加热灭菌20-30min，与牛膏蛋白胨固体培养基1：9混合均匀倒平板。2.1.6纤维素产生菌培养基：CMC-Na2g/L 蛋白胨 10g/L 酵母膏5g/L NaCl5g/L PH7.2-7.4 （用于纤维素产生菌的筛选）2.1.7促芽胞形

8、成培养基：土壤浸出液1000mL 蛋白胨5g/L 牛肉膏6g/L PH7.27.4蛋白胨 1g/L 酵母膏0.7g/L 葡萄糖1g/L (NH4)2SO40.2g/L MgSO40.2g/L K2HPO4 1g/L PH7.27.4 （分离纯化用）产芽孢培养基：蛋白胨10g/L 牛肉膏3-5g/L NaCl5g/L .玉米粉0.5g/L 酵母膏0.1g/L PH7.27.4 2.1.8产蛋白酶发酵培养基： 玉米粉30g/L 豆饼粉20g/L 麸皮10g/L 磷酸二氢钠4g 磷酸二氢钾0.3g/L 碳酸钠1.0g/L PH7.47.6 八层纱布塞，牛皮纸扎好。2.1.9产淀粉酶发酵培养基：玉米粉

9、40g/L 豆饼粉20g/L 蛋白胨5g/L 硫酸铵4g/L 磷酸二氢钠8g/L 磷酸二氢钾3g/L PH7.47.6 八层纱布塞，牛皮纸扎好。产酶培养基（蛋白淀粉酶）：蛋白胨10g/L 酵母膏5g/L 葡萄糖1g/L 可溶性淀粉5g/L 磷酸二氢钾2g/L MgSO4 0.5g/L CaCl2 0.2g/L PH7.0-7.4 2.2分离纯化（或复壮）2.2.1冻干管的活化及菌种复壮 ：活化：用无菌吸管吸取0.5mL无菌水滴入安管中，轻荡使干菌体溶解成菌悬液，做梯度稀释后取0.1-0.2mL涂布或直接划线于肉汤（麦芽汁）培养基平皿，或转接于斜面（活化）37 24-36h。复壮：挑取选择生长快

10、，菌落大的菌落于4.5mL无菌水试管中，振荡摇匀后置于80水浴加热15-20min，梯度稀释后涂布于促芽胞形成培养基平皿或蘸取菌悬液直接划线，37 24h。反复二至三次，选取平皿上菌落大而且生长快的菌落转接于斜面37 18-20h，4冰箱保存。2.2.2商品微生物制剂中菌种选育1g（1mL）商品制剂加入99mL无菌（生理盐）水/250mL三角瓶（带玻璃珠），置于摇床振荡20-30min，80-85水浴加热15-20min，进行梯度稀释成10-3、10-4、10-5、10-6、10-7，根据活菌含量选取两至三个梯度进行混菌或涂布35-37 24 h，挑取一环生长快，菌落大的不同典型菌落分别转接5

11、mL无菌水试管中，混合器混合5-10min，做成菌悬液梯度稀释后混菌或涂布，或直接蘸取菌悬液直接划线，37 18-20h。结合镜检直到菌落大小基本一致，转接于斜面37 18-20h，于4冰箱保存。或将梯度菌液1mL加入平板，然后分别注入淀粉和酪素培养基中，30-37 24-48h，挑取D/d大的（淀粉培养基加碘液，观察透明圈）转接于斜面备用或用划线法进行纯化。并通过染色镜检观察，从菌落形态和细胞形态进行鉴别。 2.2.3自然筛选2.2.3.1富集培养：取5g底泥或肠道内溶物0.5g，加入45（50）mL无菌水/250mL三角瓶（带玻珠）中，振荡15-20min，取5mL菌悬液或5mL水样加入45mL促芽培养基/250mL三角瓶中，75-80水浴15-20min，降至35-37 150-200r/min振荡24h，染色镜检，连续两至三次培养备用。或取1g底泥（土）置于20mL肉汤培养基/250mL三角瓶，八层纱布封口，75-80水浴处理15-20min，然后150-200r/min振荡24h。镜检形成芽孢情况，挑取具有芽孢的菌落进行划线纯化培养，获得单菌落。2.2.3.2分离纯化取富集菌液置于75-80水浴15-20min，梯度稀释10-3、10-4、10-5、10-6、10-7，选择三