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文档简介

1、 甲醛滴定法测定氨基酸含量一、目的 掌握甲醛滴定法测定氨基酸含量的原理和操作要点二、原理水溶液中的氨基酸为兼性离子，因而不能直接用碱滴定氨基酸的羧基。甲醛可与氨基酸上的N+H3结合，形成NHCH2OH、N(CH2OH)2 等羟甲基衍生物，使N+H3上的H+游离出来，这样就可以用碱滴定N+H3放出H+，测出氨基氮，从而计算氨基酸的含量。若样品中只含有单一的已知氨基酸，则可由此法滴定的结果算出氨基酸的含量。若样品中含有多种氨基酸（如蛋白质水解液），测不能由此法算出氨基酸的含量。脯氨酸与甲醛作用后，生成的化合物不稳定，导致滴定后结果偏低；酪氨酸含酚基结构，导致滴定结果偏高。三、材料、试剂与器具（一）

2、试剂1、1%酚酞酒精溶液称1g酚酞溶于100ml 95%酒精中。2、0.5%溴麝香草酚蓝溶液取0.5溴麝香草酚蓝溶于100ml 20%乙醇溶液中。3、氨基酸溶液4、标准0.100mol/L 氢氧化钠溶液5、中性甲醛溶液取甲醛溶液50ml，加1%酚酞指示剂2滴，滴加0.1mol/L NaOH溶液，使溶液呈微粉红色，临用前中和。（二）实验器具 1、锥形瓶 2、碱式滴定管3、移液管洗耳球 4、天平5、容量瓶 6、试剂瓶7、量筒 8、玻棒与烧杯四、操作步骤1、取3只50ml锥形瓶，按下表加入试剂。 锥形瓶编号试剂样品1样品2空白氨基酸溶液或样品（ml）1.01.0蒸馏水（ml）5.05.06.0中性甲

3、醛溶液（ml）5.05.05.00.05%溴麝香草酚蓝溶液（滴）2221%酚酞乙醇溶液（滴）2222、混匀后用标准0.100mol/L氢氧化钠溶液滴定至紫色（pH8.79.0）3、结果计算氨基酸溶液中含氨基酸的百分比浓度为 C=（V1-V2）C0氨基酸分子量/（10V样）式中： C：总酸含量（g/100ml） V1为滴定样品消耗标准氢氧化钠的体积（ml）； V2为滴空白消耗氢氧化钠的体积（ml）； C0：标准氢氧化钠准确浓度(mol/L) V样：样品体积(ml)4 、氢氧化钠标准溶液的标定五、注意事项（1）利用甲醛滴淀法可以用来测定蛋白质的水解程度。随着蛋白质水解度的增加，滴定值也增加，当蛋白质水解完成后，滴定值不再增加。（2）氨与甲醛反应方程铵根与甲醛反应生成六次甲基四胺盐及强酸：（氨的部分电离产生少量铵根，但由第二个反应大量消耗铵根后，氨电离方程就强烈地偏向右边了）反应生成的六次甲基四胺盐及3个氢离子都可以跟碱反应，而溶液中正好有还未反应的氨水，因而第二个反应，中和反应发生(CH2)6N4H+ + NH3 = (CH2)6N4 + NH4+ H+NH3= NH4+这第二组反应就是一个释放出中和热的过程，所以溶液就热起来。这里生成的铵盐又重复第

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