细胞化学染色.ppt

1、a，1，细胞化学染色检查，神家辉，1，a，2，1，概述2，细胞化学染色的基本方法3，临床应用，2，a，3，1，概念：细胞化学染色由细胞学和化学结合而成、3、1、2。细胞化学染色的目的(1)急性白血病的类型(2)辅助血液系统及其他疾病的诊断和鉴别诊断，a，5，3。细胞化学染色的基本阶段：固定，着色反应，包括复水。(1)固定：用于维持细胞结构和化学成分稳定性的方法。根据染色的目的，最常用的固定剂是甲醛、甲醇、乙醇等。5，a，6，(2)发色：通过其他化学反应，最终形成稳定的着色沉淀，使受监测的化学物质出现。包括NAP、ACP和多种脂肪酶染色普鲁蓝反应：铁染色主厨(shiff)反应：PAS染色联苯胺法

2、：POX染色(3)等再染色：使多种目的细胞更容易看到，6，a，7，peroxidasidasas试剂(1)联苯胺醇溶液：服用0.3g苯胺和亚硝基氰化钠饱和溶液(36%)1毫升后，将95%乙醇添加到100毫升，储存在棕色瓶子里，储存一年。(2)稀过氧化氢(新鲜制造):在50毫升蒸馏水中加入30%H2O21滴。(3)雷吉复合染料，9，a，10，3，染色方法1，新鲜干燥涂层联苯胺醇溶液10滴，复盖整个水膜，1-2分钟固定。2、加入等量稀释H2O2，混合4-5min后，倒入染料溶液，不要在直接流动的水中冲洗。3、瑞石染料再染色。10，a，11，4，注意事项(1)新鲜准备H2O2，注意有效性(2)标本新

3、鲜，最长一周以上，酶活性减弱。(3)pops染色后，必须洗净。(。否则，染料会堆积或漂浮在表面，影响红的染色结果。11，a，12，5，结果：中性球杆形状及叶核阳性是染色成功的标记(照片设置)。细胞的细胞质中呈蓝绿色或蓝棕色颗粒呈阳性。12，a，13，1。中性粒细胞，强阳性；晚红细胞呈阴性。单核，良性弱；4.浆细胞，阴性，a，14，14，a，15，急性髓系白血病(M2a)的POX染色性原始粒细胞全部为阳性，a，16，急性淋巴细胞白血病的POX染色1。中性粒细胞，强阳性；其他原始淋巴细胞阴性，a，17，急性前骨髓性白血病的POX染色1。原始红细胞，声音；其他前粒细胞都是强阳性。a，18，急性单核细

4、胞白血病的POX染色1。中性粒细胞，呈强阳性；原始单核，阳性；原始单核，良性弱；不同的前微核细胞阴性，a，19，6，临床意义，(1)正常分布粒细胞：早期原核细胞阴性，后期原核细胞及下一阶段分别以不同程度呈阳性。单核细胞为：早期单音，其他阶段为弱阳性。淋巴，红细胞，浆细胞，巨核均为阴性。，19，a，20，(2)婴儿细胞POX阳性率3%的急性白血病鉴别诊断：急性非淋洗(AML)天真细胞POX阳性率3%:急性淋洗(ALL)，20，a原理萘酚钠磷酸盐萘酚和萘酚中氮盐不溶性有色沉淀物为细胞质(坚固的蓝色RR盐)，21，nap，PH 9.2 9.8，a，22，2。试剂(1)固定剂：10%甲醛甲醇溶液(2)

5、三-HCl缓冲液的制备：三色粉三胺甲烷 4.85克溶于200毫升蒸馏水，添加浓缩HCL1-2滴，ph为9.2，4(3)作用(基质液体):萘酚钠5mg N-N二甲基酰胺1ml tris-HCl液体4ml坚固蓝RR盐5mg (4)复合染料：1%中性红，a，23，3。工作阶段1，新鲜干燥的外周血或骨髓涂片(样品和照片)加固定剂30秒(染料圆筒)，洗涤后干燥；2、液滴、室温染色15分钟，洗涤干燥；3，1%中性红色颜料1分1分，23，a，24，4。注意事项(1)重氮盐最好是坚固的蓝色RR盐。(2)坚固的蓝色RR盐要适中。过多容易染色失败，太少会反应减弱。(3)每次都要做阳性对照。(4)将作用液新鲜准备好

6、，配合好，立即使用24，a，25，5。结果：(照片成熟的中性粒细胞中黄褐色颗粒者显示为阳性细胞，因此染色成功)，正常人除成熟的中性粒细胞NAP可见阳性外，其他血细胞均呈阴性。正常阳性率低于40%，积分值为30 130分。25，a，26，6.NAP阳性结果和积分判断标准，“-”0分，细胞素没有阳性粒子”，1分，细胞素有少量粒子“2”2分，细胞素有中等剂量粒子“3”3分，细胞素有丰富的粒子a，27，中性粒细胞碱性磷酸酶染色1。中性淑中区；中性粒细胞；中性粒细胞；4.中性粒细胞；5.淋巴细胞(-)，a，28，28，a，29，29，29，NAP等级，a，30，7。临床意义的增加：细菌感染，班级白色，A

7、A，急性淋洗，缓慢谷物突变，骨髓增生病，恶性淋巴瘤。减少：慢粒子、急性粒子、PNH、MDS、坏组、30、a、31、8。慢粒子和类白色的鉴别诊断：前，后。PNH和AA:前，后。紧急粒子和紧急淋浴：前，后。MDS和慢性再生障碍：前，后。病毒感染和细菌感染：前者没有太大的变化，后者有恶势力和反应性组织细胞的增加：前，后。31，a，32，(3)酯酶染色，概述特定酯酶染色非特异性酯酶染色，a，33，一般按各种细胞内酯酶特异性高低分为特定酯酶(SE)和非特异性酯酶(NSE)某些酯酶是指氯乙酸AS-D萘酚酯酶(nas-DCE)。非特异性酯酶根据水解基质液的PH分为中性NSE(-萘酚酯酶)、酸性NSE(酸性-

8、萘酚酯酶)、碱性NSE(-丁酸萘酚酯酶)。目前常用氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色NAS-DCE和-乙酸萘酚酯酶(-NAE) NaF抑制试验。a，34，1。原理(偶氮结合法)氯乙酸as-d萘酚重氮盐，34，NAS-DCE，不溶性着色沉淀物在细胞质中的酶所在位置，特定酯酶(CE)染色，基质液体试剂：(1)固定液：10%甲醛甲醇溶液(2)作用液(基质液体)氯乙酸as-d萘酚5mg丙酮5-8ml磷酸盐缓冲液19ml坚固蓝色b盐10mg (3)感染液：1%染色法(1)固定：10%甲醛甲醇溶液固定30秒，洗干(2)液滴作用液37 孵化30分钟，洗(3)1%中性红1分钟清洗和干显微镜检查。36，a，37，4。注

9、意：1 .氯乙酸AS-D萘酚溶液应避免光，保存4 的冰箱，黄色或浑浊后无效。2.染色温度在37 时效果最好。37，a，38，5。结果表明，在中性分叶核果颗粒细胞素中，看起来微乎其微，扩散分布的蓝色粒子染色成功。6.临床医生的颗粒除了早期原颗粒外，其余阶段细胞呈阳性，其他各系统均为阴性。CE染色对骨髓性白血病有特异性诊断价值。38，a，39，39，CE，a，40，非特异性酯酶染色(-NAE)，1。原理：-乙酸萘酚-萘酚重氮盐，40，-NAE，形成不溶性有色沉淀，位于细胞质中酶的所在位置，7.4-7.6，(固体盐B)，a，41，试剂(1)固定液：甲醛(2)作用液： -萘酚5mg丙酮5-8ml磷化缓

10、冲液10ml固体蓝色b盐10mg (3)复盐液：10g/L甲基绿水溶液，41，a，a染色阶段(1)甲醛蒸汽固定5-10分钟，水洗5-10min干(2)作用液371h小时，水洗。(3)用10g/L的甲基绿溶液对5min进行染色和水洗的赠品检查(4)NaF抑制试验：在40ml作用液中添加NaF15mg进行相同染色后，计数100个被检细胞，分别计算抑制前和抑制后阳性率和积分，按公式计算抑制率，正常低于50%，A，43，A度：急性单核细胞白血病-NAE染色原，幼稚单核细胞大部分呈阳性。B图：急性单核细胞白血病-NAE氟化钠抑制染色，原始、天真的单核细胞阳性反应被氟化钠抑制(A图中的样本)，A，B，A，

11、44，4。结果：细胞质量判定为棕色或棕色棕色棕色沉淀物为阳性：正常部分原始、纯真、成熟的单核细胞为阳性；有些粒细胞是弱阳性反应。部分成熟淋巴或个体中，晚熟红色呈阳性。44、a、45，45、a、46，5。临床意义：急性白血病的鉴定(1)急性单核大部分为-NAE阳性，容易被NaF抑制，抑制率在50%以上。(2)在急性骨髓中，白血病细胞大部分是阴性或弱阳性，M3是阳性，但没有被NaF抑制。酯酶双染色：同一血液涂片中的细胞在两种不同的基质液体中作用一定的时间，进行重染色显微镜检查。主要用于AML-M4亚型的鉴别诊断。46，a，47，骨髓涂片特异性酯酶(CE)和非特异性酯酶(NAE)的双酯酶染色，原始粒

12、细胞胞质呈蓝色CE阳性反应；原始单核细胞细胞质呈棕色NAE阳性反应。a，48，(4)糖原染料(PAS)，细胞中糖原的乙二醇，48，氧化，过碘酸，二醛基，1。原理(过碘酸-主厨反应)，醛固酮通过添加和缩合，制成无色的亚硫酸品红，还原洋红，位于包含亚硫酸盐的细胞中，a，49，2。包含试剂(1)10g/L的高碘酸氧化剂(2)主厨试剂(schiff):偏于红色洋红和亚硫酸钠，成为无色洋红。 20/L甲基绿通量，49，a，50，3。操作(1)将新鲜骨髓精制放入95%乙醇中，固定10分钟。蒸馏水清洗大气；(2)10g/L和碘酸氧化15分钟；蒸馏水清洗；(3)将主厨试剂浸泡45分钟，洗净后冷却。(4)甲基绿

13、丽皮15分钟，洗涤以进行干镜检查。50，a，51，4。注意事项(1)中使用的染色缸和器具必须非常干净和干燥。(2)主厨染料溶液必须暴露在光线下保存，变红后无效。(3)在加入主厨溶液之前，必须用蒸馏进行洗涤涂层，完全干燥，有水的话，试剂的变色就会失效。51，a，52，(4)染色时间和温度必须相对恒定，一般最好为37 。(5)染色的标本不能放太久，8天后褪色，要及时观察。52，a，53，5。结果观察到阳性：细胞浆的红色阳性为弥散、粒状或块状，细胞核为绿色。声音：细胞质无色或无红色颗粒。53、a、54、6。临床意义正常血细胞的染色反应(1)粒子：原始细胞大部分是阴性，随着细胞成熟，阳性率逐渐增加。(

14、2)浸出：正常人阳性率在10%到50%之间，最多不到20%。(3)红色系：PAS呈阴性反应(4)，巨核：PAS呈阳性(5)，单核：呈阴性，或微粒子上呈弱阳性。，54，a，55，正常血细胞PAS染色1。原始粒细胞(-) 2。上一个粒细胞()3。中性粒细胞()4。中性粒细胞5。中性粒细胞6。中性分科区()7。嗜碱细胞8。湖山区()9。单核细胞10。淋巴细胞()a，56，确认疾病(1)红细胞病：M6，MDS阳性(均匀或块状红色)；大幼崽可怜，再生不良是阴性。(2)白血病：急性淋浴和缓慢淋浴：粗颗粒或巨阳性急性颗粒：阴性或弱阳性(分散细颗粒)紧急单：阳性，大部分细颗粒有时粗颗粒急性巨核细胞白血病：阳性

15、(肿块)，56，a，57，PAS，原理(普鲁蓝反应)4fe 3k 4Fe(cn)6fe4Fe(cn)63 12k(铁氰化钾)，61，(6)骨髓铁试剂(1)固定液：甲醇(2)酸性铁氰化钾溶液：200g/L铁氰化钾5份，浓盐酸1份。将200g/L第一铁氰化钾溶液放进试管，慢慢添加浓盐酸，搅拌成开始的白色沉淀，就消失了。(3)利盐剂：0.5%夏黄，62，a，63，3。标记工艺步骤(1)，甲醇固定10分钟(2) 37 ，酸性铁氰化钾溶液染色30分钟(3)蒸馏水清洗2分钟后，硫化1分钟，进行干燥检查。63、a、64、4。注意事项(1)中使用的幻灯片和仪器必须清洁，受到生铁污染。(2)有骨髓素的水草要进行铁染色，以便观察细胞外铁。(3)作用液必须新鲜配制。(4)铁氰化钾暴露在空气中，容易氧化变质，保存在褐色瓶子里，保管在光封里。64，a，65，(5)利盐之前要充分洗净。否则铁的结晶太多，影响观察。6)细胞内的铁粒彼此高低不一致，每次看的时候，都要旋转，直到看