实验三、小鼠骨髓染色体制备与观察

1、实验3，制作和观察小鼠骨髓染色体标本，李孝利基础医学楼A412盛科学院办公室电话1，实验目的，操作技术巩固小鼠骨髓细胞染色体标本制备原理和方法显微镜，2，实验原理，染色体染色体异常也称为染色体发育异常。目前已确认100多种染色体综合征，弱智和生长迟缓是染色体疾病的共同特征。21三体综合征；18三体综合征，猫呼叫综合征，18三体综合征，2，实验原理，染色体标本的观察广泛应用于某些疾病的临床诊断。白血病、恶性血液病等的诊断。染色体是细胞分裂过程中染色质的存在形态。细胞分裂中期，染色体排列在赤道上，是观察染色体的最佳时期。骨髓细胞数量多，分裂旺盛，可以直接制造染色体标本。采

2、访简便，操作简单，不需要无菌培养，是研究小型哺乳动物等染色体的一般方法。提取人类骨髓染色体，如何制作好的染色体标本？得到有丝分裂中期的很多细胞。细胞膜破裂，染色体完整，更分散地释放。秋水仙素处理：秋水仙素溶液抑制纺锤形形成，使分裂中的骨髓细胞停止在细胞分裂中期，积累了很多中期分单相细胞。低渗透率：充分扩大细胞，减少染色体之间的相互缠绕和重叠。预先固定：停止低渗透，在离心时固定以保持细胞形态结构。高距离水滴：使细胞膜容易破裂，获得中期染色体标本，用显微镜观察染色体的结构和数量。3，实验设备和试剂，1 .设备蜡碟、手术剪刀、镊子、碟子、注射器、10ml离心管、吸管、量筒、预冷幻灯片、试管架、离心机

3、、恒温输液器、显微镜、醚醇、镜纸2、试剂100ug秋水仙碱秋水仙素处理：选择体重20g左右的老鼠，按24ug/g(鼠标)秋水仙素，处死前4，实验阶段，注意：切掉少量骨头，避免骨髓细胞损失；擦血和肌肉细胞，以免影响观察。用0.075 mol/L KCl收集痊愈细胞，反复冲洗，直到股骨变白为止。2 .提取：颈椎脱位方法切除两个后腿股骨，取出两个股骨，暴露髓内低渗压(5ml)，用离心管冲洗，收集骨髓细胞，用颈椎脱位法处死鼠标，3。低渗透：用吸管吹散骨髓细胞，在室温37 到8毫升的情况下添加低渗透液，在37 的水中加入离心管，保温至少30分钟，然后取出，使细胞充分吸收和膨胀。低渗透不足，细胞不够膨胀，

4、精炼下降时细胞不会破裂。低渗透细胞早期破裂，染色体观察不全。吹气法：用吸管橡胶头的空气混合液体。4 .预固定：1ml新型制造固定溶液混合1500r/min，5min报废上等液。需要固定液(甲醇：冰乙酸=33336901)。离心力要扁平。角色：终止低投资率；保持细胞的膨胀状态。防止离心破裂，5 .固定，细胞悬浮：固定液5ml吹混合固定15分钟离心1500r/min，15min报废和固定液0.20.4ml吹细胞悬浮，准备生产。在制造细胞悬浮液的时候，有时放入固定液，将乳白色标记为悬浮液比较好。6 .滴片：冰片30，细胞悬浮液从幻灯片30厘米的高度脱落，1 2滴不重叠，用嘴吹细胞，通过火焰干燥。注：

5、幻灯片不能引起预冷、高度、博客、热潮。7.染色：在幻灯片上滴几滴Giemsa染料，均匀展开8 10分钟，倒入染料溶液晾干。8.小鼠染色体观察：低比例镜，寻找高比例镜染色体分散的中期分裂相，小鼠骨髓染色体10，小鼠骨髓染色体10 40，数观察：小鼠双倍体细胞染色体，数2n=40。其中19对分为常染色体，1对分为性染色体，染色体的核型分为4组。男性XY，女性XX，Y染色体最小。形态特征观察：末端着丝粒染色体“u”、“v”。五、注意事项、1 .掌握秋水仙素的浓度和处理时间；离心前需要平准化。3.小鼠骨髓要洗净，以收集足够的骨髓细胞。低渗透率处理是实验成功或失败的关键。请注意低渗透时间。固定流体当前处于活动状态，固定必须足够。5.幻灯片要干净预冷，铃铛要有一定的高度。细胞悬浮不能太薄，必须是乳白色。7.雕刻的时候温度不能太高。8.冲