实验四总氮量的测定――凯氏定氮法(精)

1、实验4总氮含量的测定凯氏定氮法，目的和要求，1。学习凯氏法的原理。2.掌握微量凯氏定氮法的操作技术，包括标准铵梳酸中氮含量的测定、未知样品的消解和蒸馏、氮含量的滴定和计算等。实验原理，天然有机物(如蛋白质、核酸和氨酸等)的氮含量。)用凯氏定氮法测定。当用浓硫酸加热天然含氮有机化合物时，氮、二氧化碳和水会分解。由氮转化而来的氨与硫酸结合形成硫酸铵。分解反应非常缓慢，可以通过加入硫酸铜和硫酸钾或硫酸钠来促进，其中硫酸铜用作催化剂，硫酸钾或硫酸钠可以提高消化液的沸点。氧化剂过氧化氢也能加速反应。消化后，向凯氏氮测定仪中加入强碱，分解硫酸铵并释放氨。通过水蒸气蒸馏，将氨蒸馏成过量的标准无机酸溶液，然后

2、用标准碱溶液滴定，精确测定氨含量，从而计算氮含量。以甘氨酸为例，该过程中的化学反应如下：硼酸溶液常被用来收集氨，氨与溶液中的氢离子结合生成铵离子，从而降低溶液中氢离子的浓度。然后用强酸滴定，直到溶液中原始氢离子浓度恢复。所用强酸的当量数等于测试样品中氨的当量数。本法适用范围为0.2-1.0毫克氮。相对误差应小于2%。试剂：浓硫酸，硫酸铜，硫酸钾，氢氧化钠溶液：400克/升，硼酸吸收液：40克/升，称取20克硼酸溶于500毫升热水中，摇匀备用。盐酸标准溶液：0.1000毫升/升.甲基红-溴甲酚绿混合指示剂：将5份2g/L溴甲酚绿95%乙醇溶液和1份2g/L甲基红乙醇溶液混合均匀。主要仪器：如图所

3、示，凯氏氮蒸馏装置。50mL消解管50mL容量瓶中分析天平电炉小玻璃珠3mL微量滴定管烘箱1000mL蒸馏瓶远红外沸腾炉，实验过程，样品消解，蒸馏吸收，滴定、实验过程，样品消解准确称取约0.1g干面粉作为本实验的样品。准备四个50毫升的凯氏烧瓶并贴上标签。分别向1号和2号烧瓶中加入0.1g样品、200 mg催化剂(K2SO 4-硫酸铜5H2O)和5mL消化液。注意将样品直接送到烧瓶底部，不要粘在瓶口和瓶颈上。向3号和4号烧瓶中加入0.1毫升蒸馏水、与1号和2号烧瓶相同的催化剂和浓硫酸作为空白对照，并测量试剂中可能含有的痕量含氮物质以校正样品。仔细摇动后，按图安装消解装置，放在电炉上，放在通风柜

4、中加热消解。消化时，用小火慢慢加热。当内容物完全碳化且泡沫消失后，增加火力以保持瓶内液体轻微沸腾。消化至溶液蓝绿色透明后，继续微沸加热0.5小时，取出冷却，小心加入20毫升水，移入100毫升容量瓶中，用少量水清洗氮气瓶，合并至容量瓶中，加水至刻度，充分混合后备用。同时做试剂空白试验。蒸馏，吸收，取2 3个50ml瓶，加入约5ml 2%硼酸-指示剂混合物，盖上表镜备用。准确吸收10毫升样品处理溶液，从一个小漏斗流入反应室，用10毫升水冲洗小烧杯，使其流入反应室，并塞住玻璃塞。从安全漏斗中慢慢加入10毫升400克/升氢氧化钠，溶液应为蓝棕色。不要摇晃，把固氮球接好。直接加热蒸馏30分钟，使蒸馏装置

5、的出口离开液面1分钟，用蒸馏水冲洗尖端，然后停止结果计算，如果被测样品的含氮部分是蛋白质，则有，其中：a是滴定样品除去的盐酸的平均毫升数；b是滴定空白除去的盐酸的平均毫升数；c是称重样品的克数；0.0100是盐酸的当量浓度(实际上，该项应根据实验中使用的盐酸的实际浓度填写)；14是氮的原子量；6.25是系数(1毫升0.01n盐酸相当于0.14毫克氮气)。如果样品中除蛋白质外还有其他含氮物质，那么样品中蛋白质含量的测定就更加复杂。首先，应向样品中加入氯乙酸，使其最终浓度为5%。然后，测量不含三氯乙酸的样品和加入三氯乙酸后的样品的上清液中的氮含量，得到非蛋白氮和总氮，从而计算蛋白氮并进一步换算蛋白

6、含量。蛋白质氮=总氮-非蛋白质氮蛋白质含量(g/%)=蛋白质氮6.25。注意：在蒸馏过程中，实验室内不应有碱雾(如氨)，否则会严重影响实验结果的准确性。如果反应室中液体过多，超过1/2且难以排出，只能拆卸仪器并倒出储存的液体。但通常要尽量避免这种情况。拆卸时应特别小心，以防损坏仪器。拆卸仪器时，先松开固定冷凝管的通用夹具，然后小心地将冷凝管向下错开，待反应室外壳与冷凝管分离后，再移动反应室。“空白”滴定值包括水和氢氧化钠溶液中的微量氨。因此，水质对“空白”滴定值有很大影响。最后，“消化空白”用于校准计算，“未消化样品”最终用于校准计算。此外，在实验中，稀释的样品水和“空白”水应取自同一个瓶子。蛋白质是一种复杂的含氮化合物，其中每种蛋白质具有恒定的氮含量，通常约为14-18%，平均为16%。用凯氏定氮法测得