干扰素的生产与行

1、干扰素的生产技术和市场分析，主要内容是干扰素的介绍2干扰素生产技术的发展3基因工程假单核杆菌的发酵生产技术4国内基因工程药物产业的发展状况5干扰素产品国内市场的现状和发展分析、干扰素的介绍，干扰素的定义是细胞因子， 在生物感染病毒的情况下，宿主细胞通过抗病毒响应，产生相似的结构、功能相近的低分子糖蛋白。 英语名字Interferon，IFN。 1b，1.2干扰素的发现，干扰素是1957年英国科学家Isaccs等人发现的。 他们把灭活的流感病毒作用于小鸡细胞，结果发现这些细胞抑制流感病毒，产生了阻碍其他病毒繁殖的可溶性物质，所以把这种物质称为“干扰素”。 今后科学家们发现，入侵的异种核酸(包括病

2、毒)会产生干扰素进行防御。 生物细胞受到病毒感染后，生物细胞产生干扰素，干扰病毒复制，它是生物抗病毒感染的防御系统。 1.3天然干扰素的分类，1 .来源，根据基因序列和氨基酸组成进行分类 I型干扰素： IFN、IFN、IFN 、IFN 来源：白细胞、成纤维细胞、受病毒感染的组织细胞等功能：抗病毒感染、抗肿瘤生长、免疫调节(弱)能力型干扰素：干扰素(IFN )来源：激活的t细胞和NK细胞的产生功能：免疫调节、单核巨噬细胞、树突状细胞的抗原呈递能力提高Tc细胞和NK细胞的杀伤活性，抑制TH2细胞的形成，降低体液免疫应答的趋化因子作用的抗病毒和抗肿瘤作用(二重组干扰素： 2a、2b、1b、1b、 1

3、992年中国第一种基因工程药物IFN-1b获得国家新药证书。 研发中的重组干扰素： IFN ，临床阶段，2a、2b、1.4干扰素的作用机制，干扰素不能直接失活，可以诱导细胞合成抗病毒蛋白(AVP )发挥作用。 干扰素首先作用于细胞的干扰素受体，经过信号转导等一系列生理过程，激活细胞基因表达，实现对病毒的抑制作用。 抗病毒蛋白质主要含有2- 5a合成酶和蛋白激酶等。 前者分解病毒mRNA，后者抑制病毒多肽链的合成，中止病毒复制。 间接性：通过向细胞诱导抗病毒蛋白质等效果分子来抑制病毒。 广谱性：抗病毒蛋白是一种酶类，作用没有特异性。 对很多病毒有一定的抑制作用。 种属特异性：一般在同种细胞中活性

4、高，异种细胞没有活性。 作用快：干扰素可以中断感染细胞病毒感染，限制病毒扩散。 在感染的初期阶段，干扰素在体液免疫和细胞免疫发挥作用之前发挥重要作用。 不同来源的干扰素、1.5重组干扰素的临床应用、广域抗病毒活性(rhuIFN)慢性b型、c型、丁型肝炎； 疱疹病毒性角膜炎。 直接抗肿瘤活性(rhuIFN)毛细胞和慢性骨髓性白血病、Kaposi肉瘤、非霍奇金淋巴瘤。 免疫调节活性治疗慢性肉芽肿(rhuIFN)多发性硬化症rhuIFN，1.6干扰素适应症，目前干扰素治疗的主要对象是慢性乙型和丙型肝炎患者，且乙肝患者最好应用干扰素治疗反应2 .治疗前的血清hbb 检查：进行显微镜和LB培养基划线检查

5、，控制杂菌。 (3)发酵槽培养、接种：通过300L培养基的发酵槽，接种量10%。 控制：级联调节通气量和搅拌转速。 前4h:30、pH7.0、DO为30%。4小时后： 20、pH6.0、DO为60%、56.5h。 终点控制：OD值达到9.01.0，5的冷却水迅速下降到15以下。 检查：发酵液杂菌检查，(4)菌体收集，连续流离心机：冷却的发酵液，16000 r/min离心收集。 菌体保存：-20冰箱，12个月以下。 检测：干扰素含量、菌体蛋白质含量、菌体干燥减量、质粒结构一致性、质粒稳定性。 3.3干扰素的分离纯化工艺，3.3.1，干扰素分离工艺3.3.2，干扰素的纯化工艺，3.3.1干扰素-2

6、b分离工艺，菌体分解前处理一次分离，(1)菌体分解，分解缓冲液：纯化水调制，2 1 破碎-20菌体：2cm以下的粉碎块搅拌：加入分裂缓冲液，210，2hr冻结融解：细胞完全破裂，释放干扰素。 (2)预处理沉淀、添加凝集剂聚乙烯亚胺： 210，搅拌45min，使菌体碎片凝集. 在加入了凝集剂的醋酸钙溶液： 210下搅拌15分钟，使菌体碎片、DNA等沉淀。 (3)离心、连续流离心分离机： 210、16000 r/min上清：含有重组干扰素的蛋白质杂质沉淀： 121、30min蒸气灭菌、焚烧处理。 (4)一次分离，盐析： 4M硫酸铵，210，搅拌，静置一晚。 离心：连续流离心机，16000 r/mi

7、n保存：沉淀、粗干扰素、4保存。 3.3.2、干扰素的精制工艺，粗干扰素沉淀和疏水色谱阴离子交换色谱和浓缩阳离子交换色谱和浓缩凝胶过滤色谱溶解的无菌过滤分注，(1)溶解粗干扰素，精制缓冲液：超纯水冷却到210。 检查：缓冲液的pH值和电导率。 溶解： 210，均质，完全溶解。 (2)沉淀和疏水色谱、等电点沉淀(1) :将磷酸调节为ph值5.0，沉淀杂质蛋白，离心收集上清液。 疏水色谱：除非干扰素吸附在疏水色谱柱上，否则疏水性蛋白的溶出和捕集：0.01M磷酸缓冲液(pH8.0)、等电点沉淀(2) :磷酸调节pH4.5，电导率调节40 ms/cm，210 透析脱盐：调制溶液pH 8.0、电导值、1

8、0 ku超滤膜、0.005 M缓冲液。 (3)阴离子交换色谱和浓缩，0.01M磷酸缓冲液(pH8.0 )平衡树脂。 盐浓度的线性梯度在550 ms/cm下溶出，配合SDS-PAGE收集干扰素峰。 浓缩：调整溶液和电导率，超滤膜10 ku，乙酸缓冲液0.05m(ph5.0 )中透析。 (4)阳离子交换色谱和浓缩，用0.1M醋酸缓冲液(pH 5.0)使树脂平衡。 如上所述，用相同的缓冲液冲洗。 以盐浓度直线梯度550 ms/cm溶出配合SDS-PAGE收集了干扰素峰。 浓缩：用10 ku超滤膜进行。 (5)凝胶过滤色谱、清洗液： 0.15 M NaCl的0.01M磷酸缓冲液(pH7.0 )清洗系统

9、和树脂上一样，相同的缓冲液溶出。 合并干扰素部分，保存在(6)无菌过滤分注、0.22 m过滤干扰素溶液分注-20以下的冰箱中。 (7)检测项目、干扰素鉴别试验干扰素有效值测定蛋白质含量、纯度测定、分子量宿主残蛋白、残DNA干扰素结构鉴定：紫外光谱、肽光谱、n端序列其他：热原、内毒素、残馀抗生素、4国内基因工程药物我国生物技术药物缺乏自主创新的产品，大部分市场上销售的药物都是仿制药，创新药物的开发还没有打开局面。 某新药从开发到上市，投入了约30亿60亿美元。 问题： (1)同类产品制造商过多，引起市场恶性竞争，严重影响产业健康发展。 (2)融资渠道单一，产业发展资金不足。 (3)医药市场竞争无

10、序，行业不正当风气严重。 (4)企业管理相对落后，缺乏技术和经营型人才。5干扰素产品国内市场现状和发展分析，2006-2009年中国干扰素需求量统计单位： kg，需求量和增加分析1957年发现干扰素以来，40年来的研究根本改变了对干扰素的认识， 干扰素不仅是病毒间干扰现象的媒体，而且是调节细胞功能的重要系统目前已发展成与病毒学、细胞学、免疫学、临床医学、分子生物学及肿瘤学有关的新研究领域，随着生物工程技术的兴起，现在已进入广泛的临床应用时代。中国干扰素地区市场需求分析、中国干扰素产品结构分析、干扰素根据制造方法分为利用基因工程生产的重组干扰素和人自然干扰素两种。 从中国市场的研发情况来看，目前干扰素所占市场比重较大，约为67.4%。 产量及其增长分析，2006年至2009年，中国干扰素产量的统计单位：公斤，近几年，中国干扰素市场一直处于不需要的状况。 前景和展望对干扰素的研究不断深入，特别是随着现代分子生物学的快速发展，干扰素的分子结构、理化特性、生物学特性、发生和作用机