实验一还原性糖、脂肪、蛋白质的鉴定

1、实验一 可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定,一、实验原理,可溶性还原糖 ,蛋白质 ,脂肪 ,砖红色沉淀,橘黄色,红色,紫色,颜色反应,二、几种重要的试剂,斐林试剂,双缩脲 试剂,苏丹（ ）染液：用来鉴定脂肪的存在,四、实验方法与步骤,1、可溶性还原糖的鉴定,(1)制备组织样液：苹果洗净、去皮、切块取5g加少许石英砂研磨加5mL水再研磨漏斗垫纱布后过滤，得到样液,(2)鉴定样液：取2mL样液于试管中注入 2mL刚配制的斐林试剂，振荡混合（淡蓝色） 水浴煮沸2min左右，观察溶液颜色变化（先变为棕色，再变为砖红色）,制备生物组织样液,取材、研磨、过滤,取样,取2ml组织样液注入试管注入试管中,注入试

2、剂,向试管中注入2 ml刚配制的斐林试剂,加热和观察,(将45滴乙液滴入2ml甲液中),2、脂肪的鉴定,(1)切片制作,(2)染色：在花生子叶切片上滴23滴苏丹染液23min中后，吸去染液 滴体积分数为50的酒精洗去浮色吸去多余的酒精，再滴12滴蒸馏水，盖上盖玻片,(3)镜检鉴定：在低倍物镜下观察，找到花生子叶切片的最薄处，移至视野中央转动转换器，换用高倍物镜观察（脂肪滴:橘黄色的圆形小颗粒）,制备实验材料,去种皮、削平面、切片,染色,滴23滴苏丹染液染色23分钟,去浮色,在玻片上滴12滴体积分数为50%酒精溶液，洗去浮色,制作临时装片,放在显微镜下观察（先低倍后高倍）,2、蛋白质的鉴定,(1

3、)制备组织样液：浸泡黄豆12d去皮、切成薄片，加少许石英砂及5mL水研磨漏斗垫纱布后过滤，得到样液（用蛋清要稀释10倍以上，否则实验后黏住试管壁不易洗净）,(2)鉴定样液：取2mL样液于试管中加入 2mL双缩脲试剂A液摇匀（造成一个碱性环境） 加入双缩脲试剂B液34滴，摇匀，注意颜色变化（溶液变为紫色）。另取 清水于试管中加入 摇匀 颜色变化，作为 。,2mL,（A液、B液）,无,对照,制备生物组织样液,取材研磨过滤或制备蛋清液,注入组织样液,取一支试管注入黄豆组织液（或蛋清液）2ml,注入试剂A,加入2ml双缩尿试剂A,加入双缩尿试剂B,观察颜色变化,五、注意事项,1斐林试剂很不稳定，故应将

4、组成斐林试剂甲液（0.1g/ml的NaOH溶液）和乙液（0.05 g/ml 的硫酸铜溶液 ）分别配制、储存，使用时再临时配制，将45滴乙液滴入2 ml 甲液中，配完后立即使用。,2 双缩尿试剂的使用，应先加A（0.1g/ml的NaOH溶液），造成碱性的反应环境，再加B液（ 0.01g/ml 的硫酸铜溶液 ）。,5在鉴定脂肪的实验中，若用花生作实验材料，必须提前浸泡34个小时，浸泡时间短，不易切片，浸泡时间过长，则组织太软，切下的薄片不易成型，染色时间不易过长。,4在蛋白质的鉴定试验中，若用蛋白质作实验材料，必须稀释，以免实验后粘住试管，不易洗刷。,3在鉴定可溶性还原糖的实验中，对试管中的溶液进

5、行加热时，试管底部不要触及烧杯底部，另外，试管口不要朝向实验者，以免沸腾的熔液冲出试管，造成烫伤。,课堂练习,1、用斐林试剂鉴定可溶性还原糖时， 溶液颜色的变化过程是（ ） A、无色砖红色（沉淀） B、浅蓝色砖红色（沉淀） C、浅蓝色蓝色砖红色（沉淀） D、浅蓝色棕色砖红色（沉淀）,D,2、在用双缩尿试剂鉴定蛋白质实验时，正确的操作是（ ） A、2ml蛋白质稀释液先加0.1g/ml的NaOH，再加34滴0.01 g/ml CuSO4溶液。 B、 2ml蛋白质稀释液先加34滴0.01 g/ml CuSO4溶液，再加0.1g/ml的NaOH C、2ml蛋白质稀释液，同时加34滴0.01 g/ml

6、CuSO4和0.1g/ml的NaOH 混合液。 D、在NaOH和 CuSO4混合液中加入蛋白质稀释液。,A,3、用苏丹染液对脂肪组织进行染色时，可用来冲洗浮色的药品是（ ） A、HCI； B、H2 O； C、50%的酒精； D、无水酒精。,4、下列哪个实验用到显微镜（ ） A、可溶性还原糖的鉴定；B、蛋白质的鉴定；C、脂肪的鉴定；D、淀粉的鉴定。,C,C,5、下列哪种试剂在使用过程中，必须经过加热（ ） A、斐林试剂鉴定可溶性还原糖的过程中； B、苏丹 在鉴定动物组织中的脂肪时； C、双缩尿试剂鉴定蛋白质时； D、碘化钾溶液鉴定淀粉时。,6、下列糖中能与斐林试剂反应产生砖红色沉淀的是（ ） A、淀粉；B、果糖；C、蔗糖；D、纤维素。,A,B,在蛋白质鉴定实验中，必须先加A液再加B液的原因是:,为什么加入34滴B液而不能过量？,在碱性溶液中，蛋白质容易