结核分枝杆菌与实验室生物安全.1ppt课件

1、结核分支杆菌和实验室生物安全，广东省结核病预防研究所的钟球钱明，2020/7/1，2，定义结核病的结核病病原学结核病实验室生物安全结核病实验室的废弃物处理结核病职业暴露，2020/7/1，3，结核病是结核分支杆菌(偶尔是牛型或非洲型分支杆菌)引起的细菌性疾病结核波及全身各器官，但肺结核最常见。 该病传染性强，传播面广，可以在任何地区发生。 结核通过呼吸道、消化道、皮肤等途径感染，其主要传播途径是以空气为传播因子的呼吸道感染，排菌的肺结核患者感染力更大，是传播感染的主要感染源。 2020/7/1、4、结核病疫情、感染者人数约20亿的新型活动性肺结核患者890万人(141/10万人)新型结核患者3

2、90万人的结核病发病率估计每年增加1%的患者数为1550万人(患病率246/10万人)， 估计HIV TB38万人死于结核病的结核死亡率为29/10万，其中HIV TB死亡的27万例，2020/7/1，5，结核病原学，结核分支杆菌是引起人类结核的主要病原体。 1882年德国医生Koch发现的。 在微生物分类中，结核分支杆菌属于厚壁门、分裂菌纲、放线菌目、分支杆菌科、分支杆菌属。 分枝杆菌复合群包括人型、牛型、非洲型和田鼠型，而人型结核分枝杆菌是人类主要的病原菌。 2020/7/1，6，结核分支杆菌形态，结核分支杆菌菌体有多种形态特征，除正常的典型形态外，均受不良生长条件的影响。 物理因素、化学

3、因素特别是药物因素出现异常变化，其各形态可分为杆菌型(基本形态)、过滤型、颗粒型和球菌型(l型) 4种。 2020/7/1、7、2020/7/1、8、1 .结核分枝杆菌型(基本形态)结核分枝杆菌的正常典型形态是直或稍弯曲的两端钝圆杆菌。 菌体长为14m，宽度为0.30.6m，没有芽胞、荚膜和鞭毛，在生长期间有分枝生长的倾向。 2020/7/1、9、2 .过滤型为1901年，Foutes在检测用细菌过滤器过滤的结核分支杆菌培养滤液时，用电子显微镜观察了球状微粒体。 1991年，Khomeko用豚鼠损伤性肺结核模型证明了过滤型的存在。 这个球状微粒体可以通过细菌过滤器，被称为过滤型。 2020/7

4、/1，10，3 .颗粒型1907年观察到莫哈在结核性冷脓肿、浆液性渗出液、奶酪性淋巴结等脓液中革兰氏染色阳性颗粒，称为莫哈颗粒。 莫希颗粒的重要意义是，这些颗粒型体还具有生命力和活力，能在适当的营养条件下增殖，发育典型的结核分支杆菌。 2020/7/1，11，4 .球菌型(l型)结核分支杆菌在体内外受到物理、化学、免疫等因素的影响，维持菌体固有形态的细胞壁缺失或丧失，产生细胞壁缺陷型。 细胞壁缺陷型细菌是1935年在英国Lister医学研究院研究白色念珠菌时最初发现的，所以用Lister医学研究院的第一个文字把细胞壁缺陷型细菌命名为l型细菌。 2020/7/1.12 .结核分枝杆菌的染色特性，

5、结核分枝杆菌本身没有颜色，观察结核分枝杆菌要染色。 结核分支杆菌革兰氏染色为阳性，但革兰氏染色不易着色。 用苯胺染料着色的话，就能抵抗酸和酸乙醇的脱色，这种特性叫做抗酸性。 Z-N染色法是最常用的抗酸染色法，用该方法染色后，分支杆菌包括结核分支杆菌在内呈红色，标本中其他细菌、细胞、杂质均呈蓝色，2020/7/1，13，结核分支杆菌的生长特性，结核分支杆菌的生长缓慢，繁殖代在人工培养基内约1520小时，静脉2020/7/1，14，结核分支杆菌的抵抗力，结核分支杆菌因细胞壁含有大量脂质，特别是蜡样物质，具有疏水性，对物理和化学因素的作用比一般病原菌的抵抗力强。 2020/7/1，15，1 .物理因

6、素影响了结核分支杆菌的生存能力，在温室和暗处干燥痰中可生存68个月，附着在飞舞的空气尘上，可维持传染性810天。 结核分枝杆菌一般耐低温，能在-68下生存45年。 2020/7/1.16 .干热对结核分支杆菌的杀伤力弱，痰内结核分支杆菌在100下能被杀45小时。 湿热对结核分支杆菌杀伤力强，可以在6030分钟、7010分钟、805分钟和901分钟内杀死，所以煮沸和高压蒸汽消毒是最有效的方法之一。 2020/7/1，17，结核分支杆菌对光线和放射线敏感，在阳光直射下死亡27小时。 患者使用的东西在强烈的阳光下晒黑半天，几乎可以达到消毒的目的。 用菌悬浊液101mg/ml、液层厚3mm、紫外线灯1

7、0W以距离0.5m持续照射3分钟，距离1m持续照射10分钟，培养后细菌不生长。 但是，紫外线的渗透力弱，难以渗透到固体物质的内部和液体的深层，所以紫外线多用于空气和物体表面的消毒。 2020/7/1、18、2 .化学因素影响化学消毒剂的种类很多，其杀菌机制因化学药品的种类不同而不同。 乙醇使菌细胞蛋白质变性、凝固，起杀菌作用。 结核分枝杆菌直接接触70%75%乙醇，530分钟就能被杀死，因此可以用于皮肤消毒。 但是，乙醇使蛋白质凝固，在痰的表面形成包裹菌体的膜，不能在短时间内杀死细菌，因此乙醇不能用于痰的消毒。 2020/7/1，19，苯酚主要通过破坏菌细胞膜，使细胞质内容物泄漏，使菌体蛋白质

8、变性凝固，抑制菌体脱氢酶或氧化酶等酶系杀死结核分支杆菌。 2%酚5分钟，5%酚1分钟就可以杀死结核分支杆菌的培养物。 5%酚与痰液等量混合，24就可杀死结核分枝杆菌。 煤酚皂溶液的作用机理与酚类似，0.5%煤酚皂60分钟，1%煤酚皂45分钟，2%煤酚皂10分钟，5%煤酚皂5分钟就能杀死结核分枝杆菌培养物。 5%10%的煤酚皂等量混入痰标本中，12小时就能杀死结核分枝杆菌。 2020/7/1，20，甲醛会使菌细胞蛋白质变性凝固，失去代谢功能导致细菌死亡。 1%甲醛能处理结核分支杆菌5分钟，使细菌死亡。 5%甲醛与痰液等量混合后处理12小时以上才能达到杀菌作用。 2020/7/1、21、“84”消

9、毒液是以氯为主要成分的消毒剂。 氯是一种氧化剂，能使菌体的酶失活，与蛋白质的氨基结合，使菌体蛋白质氯化，代谢功能障碍，死亡细菌。 0.5%“84”消毒液15分钟就能杀死结核分支杆菌培养物，但蛋白质混合液中的结核分支杆菌几乎没有消毒效果。 2020/7/1，22，结核分支杆菌对酸、碱的抵抗力强，在4%NaOH、3%HCL和6%H2SO4中能生存30分钟。 临床上用酸和碱加入患者标本，消化蛋白质，杀灭杂菌，分离出结核分支杆菌。 结核分枝杆菌对染料，如113000孔雀绿和175000甲紫有抵抗力，通常在培养基上加入一定量的孔雀绿和甲紫来抑制其他杂菌的生长。 对普通细菌有较强杀菌作用的新卸妆对结核分支

10、杆菌几乎没有消毒作用。 2020/7/1，23，结核分支杆菌致病性，结核分支杆菌不产生内外毒素，无侵袭性酶类。 其致病作用被认为可能与菌体表面结构和某些菌体成分，如脂质、某些菌体蛋白质、多糖类等多种物质有关，主要是有毒结核菌株在敏感生物体内顽强增殖和与机体相互作用的结果。 2020/7/1、24、结核病流行、结核病在人群中流行的三个生物学环节是： 1、传染源、2、感染传播途径3 .敏感性高的人们。2020/7/1，25，影响结核分支杆菌传播的因素1，排菌量痰中结核分支杆菌越多，传播的危险性越大。 患者出现痰涂片阳性时，痰液1ml中菌量为1万10万，其痰涂片阳性率为40%-50%，痰液中菌量低时

11、，痰涂片阳性率也低(表l )。 2020/7/1，26，表1痰涂片和痰标本中结核分支杆菌数，2020/7/1，27，痰涂片阳性(涂阳)患者的排菌量多，其密切接触者的结核感染率明显高于痰涂片阴性(涂阴)患者的密切接触者，英国为涂阴培阴患者家庭儿童的密切接触涂阴培阳患者接触者结核感染率为26.8%； 涂阳培阳患者接触者结核感染率达65.0% (表2 )。 2020/7/1、28、表2不同传染源对15岁以下的密切接触者的感染率(% )，2020/7/1、29、2 .排出飞沫大小的传染源排出的飞沫受到压力和黏度的影响而大小不同，飞泪核直径1-10m的人在空气中浮游2020/7/1，30，3 .患者病变

12、和症状病变广泛，受害严重的患者，特别是病变迅速发展，奶酪融化空洞的患者痰中含有很多结核分支杆菌，是主要的感染源。 据报道，患者在咳嗽、打喷嚏、大声说话时会产生飞沫，人咳嗽时一次排出的飞沫数约为3500个，打喷嚏后能达到100万个，平时说话5分钟的飞沫数相当于咳嗽，咳嗽是肺结核患者产生飞沫的主要方式。 2020/7/1，31，表3记录了患者每天晚上咳嗽的次数，观察到其0-14岁家庭接触者的结核感染率在每天晚上48次以上患者的家庭接触者感染率为43.9%，咳嗽12次以下患者的接触者感染率为27.5 %。 2020/7/1.32，表3传染源咳嗽的次数和接触者感染率，2020/7/1.33，4 .接触

13、的密切程度周围的人和传染源越接触，感染的机会越多，涂膜阳性患者的密切接触者感染率明显比接触的人高(表4 )。 2020/7/1，34，表4不同接触程度的儿童感染率，2020/7/1，35，5 .环境因素和感染源患者在空气不流通的室内的密切接触者，结核感染的可能性增大。 据报道，二战时期潜水艇内的官兵大量感染发病，但民航客机有结核感染源，同乘者被感染。 2020/7/1.36，传播路径，呼吸道感染是肺结核的主要感染路径，飞溅感染是最常见的方式。 感染源主要是排菌肺结核患者(尤其是痰涂片阳性未治疗者)。 飞泪核(droplet nuclei)10m时被吸入呼吸器，健康的人在吸入患者咳嗽或打喷嚏时会

14、被喷出的细菌飞沫感染。 2020/7/1、37、敏感性者、结核分支杆菌进入人体，引起敏感性者(susceptible )的复杂反应。 2020/7/1，38，1 .人体防御反应人体防御反应(defense reaction )有物理、化学和生物学反应。 进入人呼吸道的结核分支杆菌的游泳核被鼻、咽、喉、气管和支气管的黏液吸附，被酶杀死，随着纤毛运动，通过咳嗽、喷嚏和咳痰等动作排出体外，或被吞噬细胞吞噬而被杀死。 防御功能下降时，结核分支杆菌会进入人的下呼吸道，引起生物反应。 2020/7/1，39，2 .人体敏感性未感染结核的人感染结核，有普遍敏感性(susceptibility )，进入人体的

15、结核菌能在人体内繁殖，结核分枝杆菌的繁殖周期约为10-20小时的一只结核分枝杆菌在体内一周繁殖128只菌， 20天内繁殖了超过100万只细菌(表5 )，体内大量的结核分支杆菌使人体生病，引起机体免疫和过敏反应。2020/7/1、40、表5显示结核分支杆菌在体内的繁殖情况，2020/7/1、41、3 .免疫和过敏反应人体对结核分支杆菌的自然免疫力(先天免疫力)非特异性。 接种芽孢杆菌、卡介苗，对感染结核分枝杆菌后发生的免疫力(acquired immunity ) (后天免疫力)具有特异性，可以杀死或严密包围侵入的结核分枝杆菌，阻止扩散，使病灶愈合结核免疫主要是细胞免疫，表现为淋巴细胞的过敏和吞

16、噬细胞功能的增强。 2020/7/1.42，化疗时代的结核病流行，化疗流行病学效果传染性肺结核患者接受抗结核药物化疗(chemotherapy )后，肺病灶的结核分支杆菌被杀，传染性减少消失，传染源的流行病学作用消失。 实验报告显示，敏感菌未治疗时为100%，治疗中为25%，耐药性患者未治疗时为100%。 治疗中只有27.3%。 2020/7/1，43，结核分支杆菌检查的意义结核病是结核分支杆菌引起的全身脏器和组织病变，是肺部病变的常见传染性疾病。 因此，痰结核菌的检查是评价结核病流行病学、结核病的诊断、化疗方案的确定、疗效的重要手段，在控制现代结核病中起着不可或缺的重要作用。 2020/7/

17、1、44、结核分支杆菌检查：直接涂膜； 结核分支杆菌的分离培养和结核分支杆菌的药物敏感性测定，2020/7/1，45，结核实验室生物安全，一、生物安全概念实验室生物安全，是指在以微生物为对象的实验工作中，预防生物危害，保障操作对象、操作者和环境的安全。 合理的实验室建筑结构和配置，正确使用生物安全盘，可以有效地保护操作对象和工作人员，用有效的过滤器过滤排出的空气也可以保护附近人员和环境的安全。 在不保证安全的实验室条件下，处理传染性强的实验材料时，防护服、预防免疫和药物预防需要保证实验室的生物安全。 2020/7/1、46、二、术语和定义(一)生物因子(biological agents )所有微生物和生物活性物质。 (二)病原体(pathogens )使人、动物、植物病原的