结直肠癌检测专家共识解读2020版.ppt

1、,结直肠癌分子标志物检测 专家共识解读,内容简介,2,1,结直肠癌分子标志物的临床意义,精准检测要点,RAS (KRAS+NRAS),BRAF V600E,MMR MSI,推荐级别，样本选择，检测技术，结果评估,结直肠癌分子生物标志物 检测专家共识 发表于中华病理学杂志 2018年第4期,结直肠癌分子检测指南的发展,进一步规范中国结直肠癌患者的分子标志物检测，为临床治疗提供可靠依据,中国结直肠癌KRAS基因 突变检测专家共识发布,Molecular Biomarkers for the Evaluation of Colorectal Cancer: Guideline From the AS

2、CP, CAP, AMP, and ASCO,2016,2012,欧洲肿瘤内科学会mCRC 共识指南在线发表于 肿瘤学年鉴,2017,针对亚洲mCRC患者对指南进行了更新和修订以适应治疗和管理,2018,日本肿瘤内科学会(JSMO)第3版CRC治疗的分子检测指南,RAS基因在结直肠癌中的检测意义抗EGFR治疗疗效预测因子,临床意义,检测先行要点,RAS (KRAS+NRAS),抗EGFR治疗是转移性结直肠癌患者非常重要的治疗方式 其作用位点是EGRF的胞外区域，通过对与EGFR结合的酪氨酸激酶（TK）的抑制作用，阻断细胞内信号转导途径，从而抑制癌细胞的增殖，诱导癌细胞的凋亡。,RAS野生型复发

3、或转移性结直肠癌患者能够从抗EGFR治疗中获益。,Karapetis CS, et al. N Engl J Med 2008;359:1757-65,Sorich MJ, et al. Ann Oncol. 2015 Jan;26(1):13-21.,5,RAS基因在结直肠癌中的检测意义独立预后因子,RAS基因激活可以预示III期和IV期肠癌患者的预后更差,AJCC 8th Edition K. W. Brudvik, et al. Br J Surg. 2015 Sep;102(10):1175-83,RFS,OS,KRAS状态与肝转移切除预后关系,临床意义,检测先行要点,RAS (KRA

4、S+NRAS),RAS 突变与更差的RFS和OS相关,RAS基因在结直肠癌中的检测意义独立预后因子,临床意义,检测先行要点,RAS (KRAS+NRAS),Christensen T D, Acta Oncologica, 2018:1-6.,RAS突变与肺癌和卵巢转移的风险增加有关。,RAS 突变型mCRC(32% 266/838) 中位OS为25.0个月(95% CI, 22.6至28.1个月) RAS野生型mCRC中位OS为32.1个月(95% CI, 28.9至35.5个月;HR, 1.52 95% CI, 1.26 to 1.84; P0.001),Federico Innocent

5、i, MD, 2019 ASCO,RAS基因在结直肠癌中的检测意义独立预后因子,临床意义,检测先行要点,RAS (KRAS+NRAS),各个RAS及BRAF突变对mCRC患者的疾病的复发及总生存期的影响,J. Taieb, Annals of Oncology 28: 824830, 2017,ESMO,中国专家共识2018 推荐对临床确诊为复发或转移性结直肠癌患者进行RAS和BRAF基因突变检测。 RAS基因突变分析应包括KRAS和NRAS中第2号外显子的第12、13位密码子，第3号外显子的第59、61位密码子，以及第4号外显子的第117和146位密码子。,RAS基因在结直肠癌中的检测策略,

6、临床意义,检测先行要点,RAS (KRAS+NRAS),BRAF基因检测 BRAF V600E突变在结直肠癌中的具有重要地位,BRAF基因作为RAF-MEK-ERK信号转导通路 中的重要成员，在肿瘤细胞增殖、分化和凋亡等方面发挥重要作用，参与着结直肠癌的发生与发展 BRAF V600E在mCRC患者中的突变率大约在8%-12% ，并且几乎与RAS突变不重叠；BRAF突变率比高加索人群略低5.4-6.7% vs. 5-12% (2016亚洲ESMO) 起源: 近端结肠齿状腺 微卫星不稳定, 超甲基化 RAS WT 女性, 高度腹膜，淋巴结和脑转移风险,Maria RG, et al. Cance

7、r Discov. 2013 May; 3(5): 487490. Cutsem EV, et al. Annals of Oncology 27: 13861422, 2016. Phipps AI, et al. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev 2012; 21:1792-1798.,临床意义,检测先行要点,BRAF V600E,BRAF突变患者的中位OS为13.5 个月(95% CI, 11.2至18.5个月), BRAF野生型患者中位OS为30.6个 (95% CI, 29.0至33.5个月，危险比HR, 2.01 95% CI, 1.49 to 2.

8、71; P90%,转移或复发灶的标本是 首选 。 基于临床研究的数据，在无法获取转移或复发灶标本时，原发灶标本是可选的标本来源。,30,检测流程,临床意义,检测先行要点,测序法 Sanger 焦磷酸测序 二代测序,PCR法 荧光定量PCR-rtPCR 数字PCR法-dPCR 高压液相色谱-HPLC 高分辨率熔解曲线-HRM,IHC法 MMR检测时与PCR法有高度一致性，PCR法敏感性更高。,选择CFDA获批的DNA提取试剂盒。,组织质量、数量，肿瘤细胞比例,推荐以作为组织学的基因检测的突变丰度截断值（Cut Off 值）,血液检测应重新进行方法学验证与cut off的建立。,血液样本的提取推荐

9、血液专用ctDNA提取试剂盒。,先行常规病理诊断,病理质控（HE染色）合格,最佳的突变截断值（Cutoff值）应以临床研究疗效的实践结论为依据,Jessup JM., et al. AJCC cancer staging manual. 8th ed. New York: Springer, 2017:251-274.,基于国际指南的推荐，结合目前已有的大型临床研究的证据， 推荐以5%作为组织学的RAS基因检测的突变丰度截断值（Cut off值）,突变丰度截断值,国际指南的推荐,临床研究中Cutoff值的应用,临床意义,检测先行要点,其中，第18条提到了RAS检测中Cutoff值的建立 18.

10、 实验室采用的结直肠癌分子生物标志物检测方法应能够检出标本中的突变，考虑到检测方法的分析灵敏度（检测限制 或LOD限值）和肿瘤富集程度（如显微切割），至少能检出5%频次的突变等位基因。 注意：推荐操作时检测的最低肿瘤细胞含量至少应为检测方法LOD的2倍。 （类型：专家共识意见；证据强度：不充分，获益与风险均等；证据质量：低）。 在方法学越来越追求高灵敏度的同时，结直肠癌中低频次基因突变的肿瘤是否对靶向治疗完全无效？,ASCO/CAP指南首次提出关于突变频次检出的问题,J Clin Oncol. 2017 Feb 6:JCO2016719807,临床意义,检测先行要点,突变丰度截断值,33,当使

11、用NGS方法将检测灵敏度提高到1%后，并未提高接受抗EGFR治疗的mCRC患者生存期,THERASCREEN PYRO （5% sensitivity）,低频基因突变与临床疗效的相关性,NGS 454 GS JUNIOR （1% sensitivity）,Vidal J., et al. ESMO GI 2018. Vidal J., et al. Annals of Oncology 0: 18, 2019. Epub,最优Cut-off值的探索 ULTRA Trial,当以5% RAS突变丰度作为抗EGFR治疗患者筛选的Cut-off值时可得到最优的ORR, PFS, 和OS。 低突变丰度的患者仍可从抗EGFR治疗中获益,C. Santos, Annals of Oncology, 2019-03-06,RAS（包括KRAS及NRAS）、BRAF V600E、MMR/MSI检测 对指导治疗、预后判断以及lynch综合征筛查具有重要意义,推荐以5%作为组织RAS基因