朊病毒及其检测PPT课件

1、朊病毒及其检查，团队成员：石勇军费鹏阎凯王培培是辛儒岬关亚飞崔金红，CONTENTS，五，朊病毒检查，1，引言，传染性海绵状脑病哺乳动物常见的疯牛病、羊搔痒症、猫海绵状脑病及传染性貂脑软化症等人身上发现了克鲁病、致死性家族失眠症、克鲁亚斯病、日耳曼综合症等。 病人和动物，大脑皮质的神经元细胞进行性空胞化，星形胶质细胞增殖，灰质变薄，白质相对明显，最后变成海绵状态。 (左)病羊神经组织的海绵状损伤。 (右)患者的脑组织切片、海绵状病变及周围的沉淀斑、3、朊病毒导致的人类疾病、5、病源、6、病原特征、PrPc PrPSc、螺旋、折叠、两者为异构体，由同一染色体基因PRNP编码， 氨基酸序列完全一致

2、的根本区别在于它们的构象差异，PrPC分子中含有42%的螺旋，折叠仅3 %，而PrPC的折叠高达43 %，螺旋为30 %。 因此，prsc被认为是PrPC引起了蛋白质的错误折叠，螺旋结构为折叠，三维结构发生了变化，同时引起了一系列的理化性质的变化。4、PrPC向PrPC的转化、(PrPC的累积)、(PrP与PrPC的反应)、(PrPC内生)、模型1 :假设单个PrPC分子与单个PrPC分子结合以催化向PrPC的转化。 这两个PrPC分子可以继续转换为PrPC。 (伸长)、(构象的变化)、(破碎成多个部分)、(感染)、模型2:PrPSC只是纤维，将PrPC fibril捆扎在一起，将其转换为PR

3、PSC，形成更长的纤维的现象是由于病毒感染的原因观察到的。 PrPC的功能，1 )保持神经系统的功能，在所有细胞类型中，在神经元中表达PrPC水平最高，并且PrPC在突触中高度浓缩(也浓缩在最终板上)，表明PrPC对神经系统有特殊的重要性。 PrPC切除实验表明，PrPC缺失不会引起肉眼可见的行为和发育障碍，但在动物水平上可能会引起与昼夜节律相关的行为异常。 在神经系统水平上，PrPC的缺失会导致电生理参数的变化。 有证据显示，出现进行性运动失调症状的PRCC缺损小鼠，大脑严重萎缩，蒲肯野细胞异常，PRCC缺损可能引起蒲肯野细胞的过度兴奋而导致小鼠死亡。 PrPC缺陷小鼠也显示了外来性铜和过氧

4、化氢等压力诱导剂的响应的变化。 在细胞水平上，PrPC缺陷小鼠的神经元在培养时生存能力下降，铜和阿拉伯苷(AraC )等对氧化损伤和毒性的敏感性增加的星形胶质细胞对谷氨酸摄入异常的胶质细胞对兴奋物质的反应性下降的突触形成有结构性变化。 由此，PrPC可能在一定程度上参与了神经系统功能的维持。 2、参与神经组织的Cu2代谢，PrPC作为脑组织中膜，铜结合蛋参与神经组织中Cu2的稳态平衡调节，转移到PrPSC后失去结合Cu2的能力，神经组织中Cu2的含量异常，导致神经细胞损伤。 Cu2对神经细胞PrPC的影响也不同。 3、抗氧化、PrPC通过与铜原子形成复合物而发挥抗氧化活性。 PrPC通过八肽的

5、重复区域最多可以结合4个铜原子。 结合的复合体具有抗氧化活性，保护细胞不受氧化损伤。 与4、淋巴细胞信号转导相关，PrPC能在人t、b淋巴细胞、单核细胞及树突状细胞中高水平表达，不同细胞表达PrPC的糖基组成、糖链形状及卵自身酶分解敏感性存在差异。 t细胞的激活随着其表，PrPC的表达上升，PrPC的记忆t细胞的表达水平比初期t细胞高。在5、凋亡、PrP基因敲除小鼠中，多种凋亡相关卵显着增加，线粒体Ca2含量变化，释放细胞色素c，表明PrP参与了凋亡控制过程。 体外试验也显示，PrPC能保护人的神经元不受Bax诱导的细胞凋亡的影响，八肽序列和c末端具有突变的PrP不具有这种活性。 6、核酸代谢

6、、Gabus等建议小鼠中发痒病的感染过程通过小鼠自身血症病毒(MuLV )的复制而加速，人PrP在功能上与NCp7类似，辅助逆转录酶合成前病毒DNA等现象，PrP可能参与体内的核酸代谢过程、病原机制、1、阮病毒说，PrPC是一种膜蛋白，其c末端含有23个氨基酸群的糖基磷酸肌醇(GPI )锚定受体结合部位，因此，含有缩水甘油酯磷脂(glycoirmitol phosp 位于细胞膜的穴位内陷系结构域(CLDs )，在神经细胞中，膜浆膜上的PrPC变成PrPCsc后，PrPC脱落聚集在神经细胞的溶酶体中。 达到数量后，能使神经元细胞破裂，形成神经组织的空泡化，使星形胶质细胞增殖。、蛋白的氧化反应说，

7、杨池明提出了疯牛病蛋白的长寿命自由基是疯牛病中的亚病毒的理论构想，他认为真正的疯牛病蛋白亚病毒可能是通过蛋白的氧化反应形成的疯牛病蛋白自由基。 应用这个理论可以说明疯牛病的病理现象。 朊病毒的检测，组织标本的采集，10个稀释浓度，直到死亡或盲传世代，饲养24h，互补，1，动物的接种传递实验，标本采集，1 .预处理，2 .检测，NC :硝酸纤维素膜，预处理品，免疫学检测，NC膜的取出，5-7m切片，NC上2、组织刻印法，匀浆，离心处理，显色，最后一种酶标记板，把脑组织放在8%的Zwittergent 3-12和0.5%十二烷基硫酸钠上，加入特异性一次抗体和酶标记，最后加入基质，胶原酶，DNA 用蛋白酶k处理，收集富含PrPsc的沉淀物，将所得沉淀物溶解于3-4mol/L硫氰酸胍中，包复酶标记物，3酶免疫吸附法，人工合成的prsc特异性多肽链标记荧光，一定量的特异性抗体，羊脑提取物，和如果脑提取物中不存在微量的prsc，如果脑提取物中不存在微量的prsc，则电泳、4、毛细管凝胶电泳免疫测定法，朊病毒的原因是PrPc的过度增殖，还是缺乏PrPc的正常功能。 体外试