芦丁的提取分离及鉴定

1、芦丁的提取分离及鉴定,作者姓名：张娜娜 指导老师：胡浩斌 学 院：化学化工学院 班 级：07化教（2）班 日 期：2011年4月,2011届本科毕业论文,综 述,本实验以芦丁为例学习黄酮类化合物的提取方法，掌握黄酮类成分的主要性质及黄酮甙，甙元和糖的部分鉴定方法。采用了水提法、碱水(石灰水) 提取法、有机溶剂(乙醇) 回流法对芦丁进行了提取分离，并对其进行定性分析及色谱鉴定。水提法、碱水(石灰水) 提取法、有机溶剂(乙醇) 回流法，三种方法均可制的芦丁，且质量合格。从提高芦丁产率和纯度的角度出发，乙醇回流是较理想的提取方法。制得芦丁产率高，且测定方法简单、迅速、灵敏度高。,芦丁，又名芸香甙、维

2、生、紫槲成甙，广泛存在于植物界，如芸香、苦荞麦、槐树蕾、楸树叶、蒲公英、番茄茎、赤豆等均含有丰富的芦丁，尤以槐花米（Sophora japoina L.的花蕾）和荞麦叶中含量最高。芦丁能凉血止血，清肝泻火，具有抗炎作用。还具有抑制醛糖还原酶的作用，用于预防脑溢血，高血压，视网膜出血，急性出血肾炎，治疗慢性气管炎，对糖尿病型白内障也有较好的治疗，而且芦丁对紫外线具有较强的吸收作用，在化妆品中添加10%的芦丁，紫外线的吸收率可达98%以上9。 本实验主要以槐花米为原料提取芦丁，并以芦丁为例学习黄酮类化合物的性质及部分鉴定方法。,二、论文设计全过程,一、实验部分,1.实验原理 芦丁（Rutin）C2

3、7H30O163H2O，浅黄色针状结晶，mp 174178 （含三分子水）；188 （无水物）。难溶于冷水（1:800010000），可溶于热水（1:180200），热甲醇（1:10），冷甲醇（1:100），热乙醇（1:60），冷乙醇（1:650）；难溶于乙醚、三氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、丙酮，易溶于碱液。,槲皮素（Quercetin）：C15H10O72H2O，黄色结晶，mp313314 （2分子结晶水），316 （无水物）。能溶于冷乙醇（1:290），易溶于沸乙醇（1:23），可溶于甲醇、乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶、丙酮等；难溶于水、苯、石油醚等溶剂。,还含有皂甙，其粗制品为白色粉末，经酸水解

4、后得二种皂甙元及糖部分，这两种皂甙元是白桦酯醇和槐花米双醇，另外还含槐花米甲素、槐花米乙素、槐花米丙素等。本实验是利用芦丁为黄酮苷，分子中具有酚羟基，显酸性，可溶于稀碱液，在酸液中沉淀析出的性质进行提取分离。利用芦丁易溶于热水、热乙醇，较难溶于冷水、冷乙醇的性质选择重结晶方法进行精制。芦丁可被稀酸水解生成槲皮素及葡萄糖、鼠李糖，依此可进行槲皮素的制备。通过纸色谱及紫外光谱进行黄酮及糖的鉴定。,2. 实验仪器及药品,SHZ-D循环水式真空泵（河南省巩义市英峪仪器一厂），电热恒温水浴锅（上海医疗器械五厂），烧杯（1000ml），圆底烧瓶，球形冷凝管，漏斗，托盘天平，抽滤瓶，布氏漏斗滤纸，试管，滴管

5、，新华1号滤纸，铅笔，铁架台，电炉，石棉网，橡皮管。 槐花米（2011年购于同仁堂大药房），95%乙醇，浓硫酸，浓盐酸，镁粉，醋酸铅试剂，1-萘酚，正丁醇，醋酸，1%三氯化铝乙醇溶液，无水乙醇，硼砂水，饱和石灰水。,3. 芦丁的提取,A. 水提法 B.碱水(石灰水) 提取法 C.有机溶剂(乙醇) 回流法,4 . 芦丁的精制,重结晶 将粗制芦丁研细，加95%乙醇回流溶解（每2 g芦丁需加70 ml左右乙醇）趁热过滤，取1/2滤液浓缩至原体积的1/3-1/4，放置，析出结晶，抽滤，干燥称重，得精制芦丁，计算得率。 芦丁的水解 取另1/2量芦丁滤液，加入1 mol硫酸（80 ml）水浴回流一小时（用

6、聚酰胺薄层检查水解是否完全）待全部水解后，蒸去乙醇，冷却、析出槲皮素、抽滤、滤液内含糖。槲皮素沉淀经水洗、抽干、干燥称重，计算得。再用乙醇重结晶一次，得黄色针晶，为槲皮素精品。,二、鉴定,1 性质实验 盐酸-镁粉反应：取芦丁少量，加乙醇数滴溶解，再加浓盐酸5滴，最后加少量镁粉，观察颜色变化。 醋酸铅沉淀反应：取芦丁少许溶于热水，加醋酸铅试剂数滴，观察结果。 Molish反应：分别取芦丁和槲皮素少量，分别置于两支试管中各加乙醇数滴，加1-萘酚几滴摇匀，倾斜试管，沿管壁滴加浓硫酸5滴，静置，观察二层溶液界面处的颜色变化,2 .色谱鉴定,点样：取新华一号滤纸，距下端3厘米处用铅笔划线，为起始线，隔1

7、.5厘米处点样品。将点好样品的滤纸挂在层析缸中饱和半小时，在上行展开。 芦丁乙醇溶液 b. 精制槲皮素乙醇溶液 展开剂：正丁醇-醋酸-水（4:1:5，上层） 2.2.2 显色：a. 可见光下观察色斑，紫外灯下观察荧光斑。 1%三氯化铝-乙醇溶液，在观察荧光斑点。,3、 结果与分析,从表3可以看出，在可见光下，芦丁和槲皮素的色斑均呈现黄色，在253.7 nm紫外灯下，芦丁呈亮绿色，槲皮素呈亮黄色。再加入1%三氯化铝-乙醇溶液，荧光斑点的亮度更加明显。 主要原因是因为芦丁和槲皮素的区别在于芦丁水解后失去了糖苷，其本身的结构发生了变化，故在紫外灯光的照射下呈现出不同的颜色。 水提法取20 g 槐花米

8、按水提法的流程操作，可提取出粗产品，收率仅为5.32 %。 碱液提取法在加入石灰水中煮沸时, 调节不同酸度，得酸度对产品质量的影响（见表4 ）,由表4可知，最佳提取酸度为pH= 89。pH9，煮沸时间稍长，可使芦丁水解；pH8，芦丁溶解不完全。 有机溶剂回流法适宜的回流时间为5 h6 h，结果见表5 三种方法的收率结果见表6。,三种方法产品纯度结果见表7,三、结果分析与讨论,1.水提法装置简单，操作方便，也是平常中药的煎服方法该法不足之处在于产率太低, 原料浪费严重。 2.用碱水提取可得粗产品，提取效率较水提法有明显提高，但该提取液通常因含有大量粘稠的杂质而难以过滤，而且整个过程对酸度控制要求

9、较高。 3.从提高芦丁产率和纯度的角度出发，乙醇回流法要优于以上两种方法，且乙醇可以回收再利用，其回收率达到92.3%。通过实验可得该方法最佳操作条件为：槐花米尽可能研细，加0.8%碳酸氢钠，20倍乙醇，回流4 h5 h，浓缩回收溶剂。浓缩液加等量蒸馏水和2%的活性炭，调节使pH=7，冷却、结晶、过滤、烘干，产品收率可达10.1%。,此实验中，水提取法制取芦丁的得率为15%，纯度高达80%，所得产物量与张来新等2的研究结果基本符合，实际产量相当。实验结果表明。芦丁是重要的黄酮类生物活性物质，槐米中含有丰富的芦丁，通过性质试验及色谱鉴定，能够清楚的表现处黄酮类化合物的一些性质。但与舒晓宏等12采用频率20 kHz的超声法从槐米中提取芦丁成分及黄汉昌13，胡杰15等采用冷碱（Na2SO3与石灰水混合渗漉提取）酸沉淀法相比较则产率太低，原料浪费比较严重。,因此，本研究认为在探索芦丁的提取方法的过程中，特别是在医疗