细菌的常用生化试验ppt课件

1、精选，细菌常用生物化学试验，细菌室，精选，23种细菌检定常用生物化学试验1 .碳水化合物的代谢试验(1)糖(酒精，糖苷)系发酵试验(2)氧化一发酵试验(OF试验) (3)-半乳糖苷酶试验(ONPG试验) (4)七叶糖苷水解试验(5)梅V-P试验2 .蛋白质和氨基酸的代谢试验(1)明胶液化试验(2)吲哚(靛蓝基质)试验(3)硫化氢试验)尿素分解试验(5)苯丙氨酸脱氨酶试验(6)氨基酸脱碳酸酶试验3 .碳源各种酶类试验(1)氧硝酸盐还原试验(4)脂肪酶试验(5)卵磷脂酶试验(6)DNA酶试验(8)CAMP试验、精选、碳水化合物代谢试验原理细菌各有不同的酶系统，因此糖的分解能力不同。 分解某糖产生酸

2、和气体。 分解某糖产生酸，但不产生气体。 不分解某种糖。 这样就可以检测分解产物来鉴定细菌。 具体的试验是糖类发酵试验即葡萄糖代谢类型鉴别试验七叶苷的水解试验淀粉水解试验甲基红试验V-P试验-半乳糖苷酶试验(ONPG试验)。 精选，1 .糖(酒精、糖苷)类的发酵试验，原理：各种细菌含有发酵不同糖(酒精、糖苷)类的酶，因此分解糖类的能力各不相同，细菌分解糖类后的最终产物也不一致，只产生酸、产气、酸方法：将分离的纯细菌无菌操作接种到糖(酒精、糖苷)系发酵培养基上，放入培养罐培养数小时至2周后，观察结果。 结果培养基中的糖(酒精、糖苷)类酸能分解后，培养基中的指示剂呈酸性反应。 如果产气剂在液体培养

3、基中在反管内或半固体培养基内产生气泡，就会在固体培养基内产生裂纹等现象。 如果不分解，培养基上除了细菌生长以外没有任何变化。 应用：是鉴定细菌的最主要和基本的试验，对鉴定肠杆菌科细菌尤为重要。 精选，2 .氧化-发酵试验(0/F试验)，原理：细菌对糖的分解能力和代谢产物的差异，该能力因有无氧而异，在氧条件下称为氧化，在无氧条件下称为发酵。 方法：将待检菌同时穿刺接种2株PS培养基，其中一种培养基上滴加无菌液体石蜡(或其他矿物油)，高度大于lcm。 培养根据35培养48h以上。 结果应用：主要用于肠杆菌科细菌和非发酵菌的鉴别，前者为发酵型，后者通常为氧化型或碱产型。 也用于葡萄球菌和微球菌的鉴别

4、，前者为发酵型，后者为氧化型。 发酵型(酸产)，氧化型，碱产，精选，3.-半乳糖苷酶试验(ONPG试验)，原理细菌分解乳糖通过两种酶的作用，一种是半乳糖苷酶，位于细胞膜上，能使乳糖分子渗透到细胞中。 另一种是半乳糖苷酶，乳糖也被称为半乳糖苷酶，在细胞内，将乳糖水解成半乳糖苷酶和葡萄糖。 上述具有两种酶的细菌可以在2448h发酵乳糖，而缺少这两种酶的细菌不能分解乳糖。 方法：从克二糖铁培养基中提取菌，用0.25ml无菌生理盐水制备菌悬浊液，加入一滴甲苯充分摇动，释放酶。 将试管放在37水浴5min中，加入0.25 ml onpg试剂，用水浴20min3h观察结果。 结果：菌悬浊液黄色呈阳性反应，

5、一般在2030min内发色。 应用：快速慢降解乳糖的细菌ONPG试验阳性，不发酵乳糖的细菌阴性。 本实验主要用于快速鉴定慢发酵乳糖菌株。 精选，4.7叶糖苷水解试验，原理方法：将检验对象菌接种到7叶糖苷培养基上，培养后观察结果。 结果培养基黑色阳性，不变色者阴性。应用：主要用于d组链球菌和其他链球菌的鉴别，前者为阳性，后者为阴性。 精选，5 .甲基红试验，原理：肠杆菌科各菌属使葡萄糖发酵，分解葡萄糖过程中产生丙酮酸，并在分解中，糖代谢途径不同，产生乳酸、琥珀酸、醋酸、甲酸等大量酸性产物，使培养基的PH降低到pH4.5以下方法：将受试菌接种到葡聚糖水培养基上，培养24d，在培养基上加入甲红试剂，

6、立即观察结果。 结果红色阳性，橙色弱阳性，黄色阴性。 应用：主要用于大肠杆菌和产气肠杆菌的鉴别，前者阳性，后者阴性。 在肠杆菌科，沙门氏菌属、志贺菌属、柠檬酸杆菌属、变形杆菌属等为阳性，肠杆菌属、霍夫曼菌属为阴性。 精选，6.V-P试验，原理方法：将检测对象菌接种到葡萄糖胨水培养基中，培养35小时后，加入甲液(6%-萘酚溶液)和乙液(40%KOH溶液)，进行振荡。 结果：若数分钟内没有出现红色呈阳性的红色，354h后也像原来一样呈阴性。 应用：本试验经常与甲红试验联用，前者为阳性细菌，后者通常为阴性。 精选，二、蛋白质和氨基酸代谢试验，原理：不同种类的细菌分解蛋白质的能力不同。 细菌对蛋白质的

7、分解，首先细胞外酶将复杂的蛋白质分解成多肽(或氨基酸)，渗透到菌体内，细胞内酶将多肽类分解成氨基酸。 具体试验为明胶液化试验吲哚试验(靛蓝基质试验)硫化氢试验尿素酶试验苯丙氨酸脱氨酶试验； 氨基酸脱羧酶试验。 精选，1 .明胶液化试验，原理方法：将被检菌穿刺接种到明胶培养基上，用22d培养，每天观察结果。 结果培养基在液化状态下呈阳性。 应用：肠杆菌科细菌的鉴别，如沙雷菌、普通变形杆菌、特异变形杆菌、阴沟杆菌等液化明胶，其他细菌液化明胶少。 产气荚膜纺锤、脆弱性杆菌等厌氧菌也能液化明胶。 另外，很多假单胞菌也能液化明胶。 精选，2 .吲哚(靛蓝基质)试验，原理方法：将待检测菌接种到胨水培养基中

8、，35培养2448h，沿试管壁慢慢加入吲哚试剂。 结果两者液面接触处红色阳性，无色阴性。 应用：主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。 精选，3 .硫化氢试验，原理方法：将检查对象菌穿刺接种于醋酸铅培养基，35培养2448h观察结果。 结果：培养基黑色阳性，没有阴性。 应用：主要用于鉴别肠杆菌科的属和种。 沙门氏菌属、爱德华菌属、亚利桑那菌属、柠檬酸杆菌属、变形杆菌属细菌等，大部分硫化氢阳性，其他菌阴性。 沙门氏菌属也有硫化氢阴性菌种。 精选，4 .尿素分解试验，原理方法：将检测对象菌接种到尿素培养基中，35培养l824h的观察结果。 结果培养基为碱性，酚红指示剂呈阳性，未呈阴性。 应用：主要用于肠杆菌

9、科变形杆菌属细菌的鉴定。 特异变形杆菌和一般变形杆菌的脲酶阳性。 雷氏普罗维登斯菌和摩根菌阳性，松鼠氏和产碱普罗维登斯菌阴性，精选，5 .苯丙氨酸脱氨酶试验，原理方法：将被检菌浓厚地接种到苯丙氨酸琼脂培养基斜面上，滴加35培养l824h、10%氯化铁试剂34滴结果绿色阳性。 马上观察结果，延长反应可能会褪色。 应用：主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。 变形杆菌属、循证属和摩根属细菌都为阳性，肠杆菌种中其他细菌都为阴性。精选，6 .氨基酸脱羧酶试验，原理方法：将被检菌分别接种到赖氨酸(或鸟氨酸或精氨酸)培养基和氨基酸对照培养基上，加入无菌流动石蜡或矿物油，培养l4d，每天观察结果。 结果：对照管为黄色

10、，测定管为紫色(指示剂为溴甲酚紫)阳性，测定管为黄色阴性。 对照管变成紫色的话对试验没有意义，无法判断。 应用：主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。 例如沙门氏菌属除伤寒和鸡沙门氏菌外，沙门氏菌赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶均为阳性。 志贺菌除宋内和鲍氏志贺菌外，其他志贺菌为阴性。 精选，精选，三，碳源和氮源利用试验，1 .柠檬酸盐利用试验原理：某些细菌以铵盐为唯一的氮源，以柠檬酸盐为唯一的碳源，在柠檬酸盐培养基上生长，分解柠檬酸盐，使培养基成为碱性。 方法：在柠檬酸盐培养基上接种被检菌，35天培养l4d，每天观察结果。 结果培养基中溴麝香指示剂由浅绿色呈深蓝色阳性的应用：用于肠杆菌科菌属间的鉴定。 在肠杆菌科

11、，埃希菌属、志贺菌属、爱德华菌属和埃尔森菌属均为阴性，沙门氏菌属、克雷伯菌属通常为阳性。 精选，2 .丙二酸盐利用试验，原理：某些细菌把丙二酸盐作为唯一的碳源，分解丙二酸盐生成碳酸钠，培养基变成碱。 方法：将被检菌接种到丙二酸盐培养基中，35培养2448h后观察结果。 结果培养基由淡绿色变为深蓝色呈阳性，没有颜色变化。 应用：肠杆菌科属间及种的鉴别。 克雷伯菌属阳性，柠檬酸杆菌属、肠杆菌属和哈法尼亚属中也有一种阳性，其他菌属阴性。 精选，四，酶类试验，1 .氧化酶试验原理：氧化酶(细胞色素氧化酶)是细胞色素呼吸酶系统的最终呼吸酶。 方法：常用方法有3种菌落法：直接向被检菌菌落中滴下试剂。 滤纸

12、法：取一点干净的滤纸，沾一点菌，然后加入试剂。 试剂纸片法：将滤纸片浸在试剂中制作试剂纸片，采集菌并涂在试剂纸上。 结果细菌在接触试剂10秒内呈深紫色，阳性。 为了保证结果的正确性，将绿脓菌和大肠菌分别作为阳性和阴性对照。 应用：主要用于肠杆菌科细菌和假单胞菌的鉴别，前者为阴性，后者为阳性。 奈瑟菌属、莫拉菌属细菌也呈阳性反应。 精选，2 .过氧化氢酶试验(过氧化氢酶试验)，原理方法：将槽放在干净的试管内或玻璃板上，然后加入数滴3%过氧化氢，或者直接向不含血液的细菌培养物中滴3%过氧化氢，立即观察结果。 结果大量气泡发生者呈阳性。 产生气泡者为阴性。 应用：在革兰氏阳性球菌中，葡萄球菌和微球菌

13、产生过氧化氢酶，链球菌为阴性，所以试验常用于革兰氏阳性球菌的初步组。 注意事项3%H2O2溶液必须新鲜调制。 生长在血琼脂平板上的菌落，因为红血球中含有过氧化氢酶，所以会引起假阳性反应。 对数提取长细菌。 精选，3 .硝酸盐还原试验，原理：在合成过程中硝酸盐被还原为亚硝酸盐和氨，从氨转化为氨基酸和细胞内其他含氮化合物的分解代谢过程中，硝酸盐或亚硝酸盐代替氧成为呼吸酶系统的终氢受体。 还原硝酸盐的细菌从硝酸盐中得到氧，形成亚硝酸盐和其他还原性生成物。 方法：将被检菌接种到硝酸盐培养基中，培养l4d 35。 将甲基(对氨基苯磺酸0.8g 5molL乙酸loopml )、乙基(-亚胺0.5g 5mo

14、l/L乙酸loopml )等量混合后(约0.1ml )加入培养基中，立即观察结果。 结果红色呈阳性。 应用：本试验广泛应用于细菌鉴定。肠杆菌科细菌能把硝酸盐还原成亚硝酸盐的绿脓菌、麦芽窄食单细胞菌等脓菌会产生氮气。 精选，4 .脂肪酶试验，原理：某些细菌产生脂肪酶，将脂肪分解成游离脂肪酸。 因此，在培养基中释放出与脂肪结合形成无色化合物的维多利亚蓝，呈深蓝色。 方法：在脂肪酶培养基(含维多利亚蓝)上接种被检菌，37培养24小时，结果：培养基为蓝阳性，阴性为粉红色或无色。 应用：主要用于鉴别厌氧菌。 农杆菌属中间型杆菌产生脂肪酶，其他农杆菌为阴性的芽胞梭属中产芽胞梭菌、肉毒梭菌、挪威梭菌也含有该

15、酶，而其他梭菌为阴性。 精选，5 .卵磷脂酶试验，原理：某些细菌产生卵磷脂酶(-毒素)，如果有钙离子，该酶就迅速分解卵磷脂，产生浑浊沉淀状的甘油酯和水溶性磷酸胆碱。 方法将被检菌接种到蛋黄琼脂平板上，培养35小时。 结果： 3h后菌落周围形成乳白色混浊环呈阳性，6h后混浊环扩展至56mm。 应用：主要用于厌氧菌的鉴定。 产气荚膜纺锤、挪威纺锤产生该酶，其他纺锤菌为阴性。 精选，6.DNA酶试验，原理：某些细菌产生DNA酶，将长链DNA水解为寡核苷酸链。 长链DNA用酸沉淀，低核苷酸链溶解于酸中，所以向菌落平板中添加酸，就能在菌落周围形成透明环。 方法：将被检菌接种到0.2%DNA琼脂平板上，用

16、35培养l824h，用lmol/L盐酸霸复盖平板，观察结果。 结果：菌落周围透明环阳性，无透明环阴性。 应用：革兰氏阳性球菌中只有金黄色葡萄球菌产生DNA酶，肠杆菌科产生了沙雷氏菌和变形杆菌，本试验可用于细菌的鉴别。 精选，7 .凝固酶试验，原理方法：1)玻璃板法：一滴一滴地取出兔子血浆和盐水，分别放在干净的玻璃板上，选择被检菌与血浆和盐水混合。 2 )试管法：取2根试管，分别加入0.5ml人或兔血浆，选择被检菌和阳性对照菌，分别加入血浆中混合，制成37水浴34h。 结果玻璃板法以血浆中出现明显颗粒，盐水中无自凝现象为阳性的试管法以血浆凝固为阳性。 应用：作为鉴定葡萄球菌致病性的重要指标，也是鉴别葡