诊断学――骨髓细胞学检查

1、骨髓细胞学检查,目的和要求,掌握骨髓穿刺的适应证 血细胞的发育规律,了解骨髓检查的方法和内容 细胞免疫分型,熟悉骨髓检查的临床应用 常见细胞化学染色,血象分析,我们该做什么检查？,特殊的临床检验 -骨髓液制成涂片染色，观察细胞的数量、形态 -结合临床和血象等资料 -明确诊断、协助诊断、观察疗效、判断预后 或排除某些疾病 血液系统疾病诊断和鉴别诊断的重要手段之一,骨髓细胞学检查,骨髓检查,诊断、辅助 诊诊断血液 系统疾病,骨髓穿刺适应证,外周血象成分及形态异常 不明原因发热，肝、脾、淋巴结肿大 骨痛、骨质破坏、肾功能异常、黄疸、紫癜、血沉明显增加等 化疗后疗效观察 骨髓活检、免疫分型、染色体核型

2、分析、微生物及寄生虫学检查,骨髓？,骨髓：位于骨松质腔隙中的一种海绵样、胶状组织 骨髓分类：红骨髓（造血细胞）、黄骨髓（脂肪细胞） 骨髓组成：结缔组织、血管、神经及造血实质细胞 造血微环境：由血管系统、神经系统、基质细胞（血管外膜细胞、脂肪细胞、巨噬细胞、成纤维细胞、内皮细胞、网状细胞等）和细胞外基质构成，造血干细胞赖以生存的场所。,骨髓,胶状、海 绵样组织,红骨髓,各种造血细胞,微环境,骨髓组成及细胞生成,多能（向）造血干细胞,髓系干细胞,淋巴系干细胞,红系祖 细胞,粒-单系祖细胞,巨核系祖细胞,嗜酸粒系祖细胞,原红细胞,早幼红 细胞,中幼红 细胞,晚幼红细胞,网炽红细胞,嗜碱粒系祖细胞,原

3、粒 细胞,T-淋巴系祖细胞,B-淋巴系祖细胞,原浆细胞,原单细胞,原巨核细胞,原粒细胞,原粒细胞,原淋巴 细胞,幼淋巴 细胞,淋巴细胞,早幼粒 细胞,晚幼粒细胞,中幼粒细胞,杆状 细胞,幼单细胞,单核细胞,幼巨核细胞,颗粒巨 核细胞,产版巨核细胞,裸核巨核细胞,血小板,嗜酸早幼粒,嗜酸中幼粒,嗜酸晚幼粒,嗜酸杆状 细胞,嗜酸杆状 细胞,嗜酸分叶 细胞,嗜碱性早幼细胞,嗜碱中幼细胞,嗜碱晚幼细胞,嗜碱杆状细胞,嗜碱杆状细胞,嗜碱分叶细胞,淋巴细胞,淋巴细胞,浆细胞,单核细胞,单核细胞,杆状细胞,分叶 细胞,网炽红 细胞,红细胞,幼浆细胞,血细胞发育演变图,原 始 细 胞,幼 稚 细 胞,成 熟

4、细 胞,原始细胞、幼稚细胞及成熟细胞 基本特点,胞体:较大 核仁：清晰，易见； 胞核:大、圆形、类圆形或不规则形；胞浆：少、蓝色（嗜碱性） 核染色质：细致，呈颗粒状； 颗粒：无或少许 粒），核浆比增大。,原始细胞,幼稚细胞,胞体：中等大小； 核染色质：较粗； 胞核：圆形或类圆形； 核仁：多数无 胞质：增多，呈嗜碱性（蓝色）；颗粒：多数有颗粒 （有核红细胞例外）,成熟细胞,胞体：较小； 胞核：分叶、扭曲或有切迹（红细胞和血小板无核） 胞质：多，淡蓝色、淡红色，核质比小（小淋巴细胞除外） 核仁：无 ；染色质：粗；颗粒：有,血细胞发育成熟的一般规律,骨髓细胞学检测的临床应用,诊断造血系统疾病 白血病

5、、恶组、MM、AA、MA、戈谢病、尼曼病、海蓝组织细胞增生症、MDS等。 辅助诊断某些疾病 恶性肿瘤细胞骨髓转移、淋巴瘤骨髓浸润，骨髓增生异常综合征、骨髓增生性疾病、IDA、溶血性贫血、脾亢、ITP 提高某些疾病的诊断率 疟原虫、黑热病、噬血细胞综合征、SLE,常见血液系统疾病,各种贫血：IDA、MA、HA、AA、MDS 各种类型的白血病：AL(AML,ALL),慢性白血病（慢粒，慢淋等） 多发性骨髓瘤、淋巴瘤 类脂质疾病：戈谢病，尼曼-匹克病，海蓝组织细胞综合征 白血病：骨髓中原始细胞20%,M1,M3,M2,M4,L2,M5,L1,L3,戈谢病,MM,M6,尼曼-匹克病,CLL,CML,I

6、TP,M7,AA,IDA,MA,HA,骨髓细胞学检验的方法和内容,低倍镜观察 -取材、涂片、染色 -有核细胞增生程度 -计数巨核细胞 -有无异常细胞,油镜观察 -分类计数 -形态变化,结果计算 -各类细胞% -粒红比值,描述 -骨髓象 -血象,分析与报告 -增生程度 -粒红比值 -各系数量、形态 -综合分析 -出具报告,病例归档 -申请单 -涂片 -报告单,1、低倍镜观察 (1)判断骨髓涂片质量：观察涂片厚薄、骨髓小粒多少、油滴、色泽等，选择满意的区域进行有核细胞分类、计数,涂片和取材A-涂片比较：上下两张太短或太长，不符 合要求；中间的涂片长短厚薄适宜且片 膜居中，符合要求。B-下面的涂片取

7、材较好，有较多骨髓小粒,染色比较 A-偏酸，细胞核、颗粒结构不清楚，红细 胞染色偏红 B-较好，细胞核结构、颗粒、胞浆染色好 、红细胞染粉红色 C-偏碱，细胞核、胞浆染色太深，细胞不 易辨认，红细胞染成蓝色,观察部位的选择 A-涂片头部细胞密集、细胞染色差，结构不 清，不能识别 B-涂片体尾交界处细胞分布均匀、细胞染色 较好，是合适的细胞形态观察部位 C-涂片尾部细胞破损、变形，不合适观察,(2)判断骨髓增生程度 -骨髓中有核细胞的多少反映出骨髓增生程度 -采用五级分类法,骨髓增生程度分级及标准,A-增生极度减低；B-增生减低；C-增生活跃；D-增生明显活跃；E-增生极度活跃,（3）计数巨核细

8、胞 -1.5cm3.0cm骨髓片膜内，巨核细胞7-35个，主要为产板型,（a)颗粒型巨核细胞（b)产血小板型巨核细胞（c)巨核细胞裸核（d)血小板,（4）全片观察 -有无体积较大或成堆分布的异常细胞（尤其血膜边缘部位），如骨髓转移癌 、恶组细胞、淋巴瘤细胞、戈谢细胞、尼曼-匹克细胞、海蓝组织细胞等,戈谢细胞：大量葡萄糖脑苷脂在巨噬细胞中蓄积形成形态特 殊的戈谢细胞，其胞浆中见许多系蓝色波纹状纤维样物质,尼曼-匹克细胞：大量神经鞘磷脂在巨噬细胞中蓄积形 成的形态特殊的细胞，其胞体较大，胞浆呈泡沫样,2、油镜观察 （1）分类计数200500个有核细胞，分别计算各系各阶段细胞所占 百分率并注意观察各

9、细胞形态有无异常。 （2）计算粒红比值（M：E）-以粒系细胞总百分率除以幼红细胞总百 分率，正常成人约为24：1 （3）观察有无特殊细胞及寄生虫 （4）描述成熟红细胞形态:大小、形态、血红蛋白含量、红细胞中 异常结构，红细胞排列等,粒红比值变化的临床意义,M:E正常 -正常骨髓象 -粒红两系以外的造血系统疾病 如ITP、MM -粒红两系平行增多或减少 如红白血病、AA,M:E增高 -粒系明显增多时 粒细胞性白血病 急性化脓菌感染 -红系严重减少时 如纯红再障,M:E减少 -粒细胞减少时 如粒缺； -红系增多时， 如各种增生性贫血,大致正常骨髓象,有核细胞增生活跃,各系、各阶段有核细胞所占百分比

10、在正常参考范围内,各种血细胞形态无明显异常,无寄生虫和明显异常细胞,常用骨髓细胞化学染色,POX染色 -用于急性白血病的鉴别 急粒：强阳性 急单：弱阳性/阴性 急淋： 阴性,NAP染色 -化脓菌感染，病毒性感染 -慢粒甚至为0，类白血病 -急粒，急淋，急单N或 -AA，PNH -淋巴瘤、CLL、PV、ET、MF，恶组,ACP染色 -HCL：阳性 -TALL阳性，BALL阴性 -戈谢病阳性，尼曼病阴性 -单核细胞、组织细胞、网状细胞、巨核细胞均阴性,常用骨髓细胞化学染色,SE染色 -急粒：强阳性 -急单：阴性 -急粒单：粒细胞阳 性，单核细胞阴性,AE染色 -用于急单和急粒鉴别 急单：强阳性，被

11、NaF抑制 急粒：弱阳性/阴性，不被 NaF抑制,PAS染色 -M6幼红细胞阳性 -急粒：阴性或弱阳性，阳 性呈弥漫细颗粒状淡红色 -急单：阳性，呈弥漫均匀红色或细颗粒状 -急淋：阳性，呈粗颗粒或块状 -巨核细胞：阳性,Fe染色 -IDA 内、外铁阴性 -非缺铁性贫血 外铁常3+ 4+ -RAS:环形铁粒幼细胞15%,M1-POX,M2-POX,ALL-POX,M5-POX,ALL-POX,M4-POX,M5-POX,M3-POX,M5-POX,M5-POX,M5-POX,M5-POX,M5-POX,M5-POX,ALL-CE,M3-CE,M1-CE,M3-CE,M1-AE+NaF,M1-AE

12、,M5-AE+NaF,M5-AE,NAP,化脓菌感染-NAP,CML-NAP,ALL-NAP,L2-ACP,c单核细胞-PAS,b巨核细胞-PAS,a成熟粒细胞-PAS,ALL-PAS,T急淋-ACP,CLL-PAS红色粗颗粒状阳性,M6-PAS,MA-PAS,d幼红细胞-PAS,IDA铁染色:细胞内铁阴性，幼红细胞内未见铁颗粒,铁粒幼红细胞,环形铁粒幼红细胞,铁粒幼红细胞,IDA铁染色:细胞外铁阴性，,急性白血病细胞化学染色特点,细胞免疫分型,用单克隆抗体及免疫学技术 对细胞膜表面和（或）细胞 质存在的特异性抗原进行检 测，借以分析细胞所属系列 ，分化程度和功能状态的一 种方法。,检测方法

13、1、免疫荧光法 用荧光素标记的单克隆抗体，在一定条件下与细胞表面的分化抗原结合，经激发光照射产生荧光。借助流式细胞仪观察荧光抗原。有荧光者为阳性，无荧光者为阴性 2、免疫酶染色法,细胞免疫分型的临床应用,T淋巴细胞亚群检测 全T细胞-CD3、CD4和CD8 T细胞 -TH(CD4+、CD8-） -TS(CD4-、CD8+) CD4+/CD8+：机体免疫状态、 疾病诊断、病情分析、监测 治疗和判断预后,白血病免疫分型 1、明确诊断ALL和AML ALL-CD2CD5CD7CD10CD19CD20 AML-CD13CD33MPOCD15CD14HLA-DR 2、确定ALL的细胞类型（B细胞或T细胞）和ALL的分化阶段 3、鉴定AML的特征