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文档简介
1、生物组织中糖类、脂肪和蛋白质的检测,1。实验原理,费林试剂,苏丹,橙,红,砖红色沉淀,紫色,苏丹,缩二脲试剂,鉴定物质,试剂,实验现象,还原糖,脂肪,蛋白质,生物组织中可溶性还原糖,脂肪和蛋白质的鉴定,实验原理(2)脂肪的检测和观察;(3)蛋白质的检测和观察;材料选择:白色或接近白色、含糖量高的植物组织(不包括色素对颜色发育的干扰),苹果和梨最好。实验过程(步骤),1。可溶性还原糖,组织样品溶液的制备:制浆:去皮,切段,研磨,过滤:(单层纱布),取溶液:(毫升),显色反应,毫升组组织样品溶液,新制备的林飞试剂毫升,现象,还原糖的检测结果,2。脂肪鉴定:花生种子(浸泡h),去皮,子叶切片,切片,
2、将最薄的切片移至载玻片中心,滴苏丹(或苏丹)染料溶液2-3滴于切片上,染色1分钟,滴加50%酒精溶液12滴,洗掉浮色(过量苏丹)做临时包装,显微镜观察:首先在低倍镜下找到有色片,然后用高倍镜观察,现象:有脂肪颗粒染成橙色(或红色),脂肪检测结果,3。蛋白质鉴定、材料选择和组织样品溶液的制备:大豆组织样品溶液(或蛋清稀释液)、大豆浸泡、去皮、切片、研磨和过滤滤液、显色反应现象:无色、无色、缩二脲试剂滴剂、紫色或紫红色(创造碱性条件)、提供Cu2)、蛋白质检测结果、蛋白质鉴定-缩二脲试剂、蛋清溶液、氢氧化钠溶液、滴加CuO2溶液、摇动每一滴,结果表明:紫色、是实验1成功的关键。实验成功的关键在于实
3、验材料的选择:在可溶性还原糖的鉴定实验中,最理想的实验材料是含糖量高的生物组织(或器官),组织的颜色较浅,最好是白色或接近白色的植物组织,以避免材料本身的颜色掩盖实验中不断变化的颜色。颜色反应的明显程度为苹果、梨、白菜叶和白萝卜。在脂肪鉴定实验中,最好使用富含脂肪的种子作为实验材料,徒手切片的成功需要很高的实验技能。刮取花生子叶泥作临时装料可能更好,操作简单,效果好。在糖和蛋白质实验中,最好选择富含蛋白质的生物组织,大豆通常用作植物材料,鸡蛋通常用作动物材料。在鉴定之前,需要留出一部分样品溶液与鉴定的样品溶液的颜色进行比较,这可以增强说服力。问题讨论: 1。在做还原糖和蛋白质的鉴定实验时,为什
4、么要留出一部分样品溶液?作为对照,2。为什么使用缩二脲试剂时只能加入34滴B溶液,但不能过量?过量的缩二脲试剂b将与试剂a反应,使溶液呈蓝色并掩盖紫色。3。为什么费林试剂应该准备好使用并且不要放置太久?如果时间太长,铜(羟基)2悬浮液将在试管底部沉淀,不能参与反应。注意事项:1 .可溶性还原糖,(1)费林试剂非常不稳定,因此组成费林试剂的溶液A(0.1克/毫升氢氧化钠溶液)和溶液B(0.05克/毫升硫酸铜溶液)应分开配制和储存,使用时暂时配制,45滴溶液B应滴入2mL溶液A中,切勿将溶液A和溶液B分别加入组织样品溶液中。(2)为鉴别可溶性还原糖,在加热试管时,应使用试管夹夹住试管的上部,并在装
5、有沸水的大烧杯中加热;注意试管底部不要接触烧杯底部,试管口不要面对实验者,以免试管中的溶液沸腾时烫伤。如果试管中的溶液太沸腾,提起试管夹,减少试管与沸水的接触面,以免溶液溢出。脂肪的鉴别(1)在鉴别脂肪的实验中,如果用花生种子作为实验材料,必须事先浸泡34小时。浸泡时间短,难以切片。如果浸泡时间太长,组织会太软,切片不容易形成。切片应该尽可能薄。(2)染色后,必须用50%的酒精溶液洗掉浮色,染色和洗涤浮色的时间不能太长(否则酒精会溶解脂肪,影响实验效果)。在观察过程中,最好找到只有12层细胞的最薄的地方。(1)在蛋白质鉴定实验中,如果用蛋白质作为实验材料,必须将其稀释。如果稀释度不够,与缩二脲试剂反应后会粘在试管内壁,使反应不完全,试管不易清洗干净。(2)使用缩二脲试剂时,应在缩二脲中加入试剂A(0.1克/毫升氢氧化钠溶液)以创造碱性反应环境,然后加入试剂B(0.01克/毫升硫酸铜溶液)。4.费林试剂和缩二脲试剂有什么区别?新制备的氢氧化铜溶液中Cu2、氢氧化钠浓度为0.1克/毫升,硫酸铜浓度为0.05克/毫升,氢氧化钠浓度为0.1克/毫升,硫酸铜浓度为0.01克/毫升。首先将氢氧化钠溶液和硫酸铜溶液混合,然后立即使用。先加入Na0H 1毫升,然后加入CuS04 4滴,摇匀。(不要过度),水浴加热,不需要,5。实验材料的选择和处理有什么要求?材料的选择,材料的处理,还原
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