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文档简介

1、细胞培养的基本技术，细胞培养的基本概念，继代培养：细胞在培养容器中生长一定时间后，分别接种到新的培养容器中。原代培养细胞取自活体内的新鲜组织并在体外生长，称为传代前原代培养。细胞培养：使用单细胞悬液进行组织培养：使用组织块(0.51立方毫米)或薄片(0.2毫米厚)进行器官培养：使用器官原基或部分或全部器官宫、原代培养细胞的生命终点、原代培养期间传代次数的减少、有限的细胞系、无限的细胞系细胞株、培养细胞的特征、培养细胞的生长方式、附着生长：必需在各种实体肿瘤细胞的悬液生长中可以看到：它们可以在悬液状态下生长，不需要附着在支持面上。在各种造血系统中发现的肿瘤细胞，每一代附着生长细胞的生长过程，自由

2、期附着期的潜伏期停止对数生长期(平台期)，自由期：细胞接种后悬浮在培养基中，也称为悬浮期。此时，细胞质收缩，细胞体呈球形。10分钟到4小时，附着期：细胞附着在基质上，自由期结束。细胞系平均在10分钟至4小时内粘附。基质：胶原蛋白、玻璃、塑料和其他细胞的血清含有冷球蛋白和糖蛋白(生长基质)，如纤连蛋白和胶原蛋白，它们促进细胞粘附。这些带正电的糖蛋白的粘附促进因子首先被吸附在基质上，然后悬浮细胞附着在吸附的粘附促进因子上。进口塑料培养瓶涂有生长基质(化学合成的官能团)。在潜伏期，细胞有长时间的语言运动，但没有细胞分裂。细胞系的潜伏期通常为624小时。对数生长期：细胞数量随时间呈指数增长，活力最好，

3、最适合实验研究。停滞期(plateau period):细胞在瓶壁上生长后，细胞活跃但不再分裂的机制：接触抑制、密度依赖性、培养细胞的生长条件、1细胞营养需要2细胞生存环境温度： 37o 2 co 23360 5% co2 H2O 2 CO2 O3-ph 3360 7.2-7.4渗透压3无污染4无毒、实验制剂、实验用品：洁净工作台、压力蒸汽灭菌器、电烤箱、过滤器、酸罐CO2培养箱倒置显微镜微孔板阅读器微孔板摇床液氮罐自动双纯水蒸馏器，纯水仪器耗材：培养瓶、吸管、电动吸引器、培养板、冷冻管、压力蒸汽灭菌器：湿热灭菌、多功能电干燥箱：干热灭菌(160，2小时)。 主要用干燥的玻璃器皿对过滤器进行消

4、毒：过滤器消毒：大多数培养液，如合成培养基、血清和酶溶液，都是通过过滤进行消毒的。洁净工作台：为细胞操作提供无菌环境。紫外线灯：紫外线消毒。主要用于培养室、手术台、塑料培养皿、培养板等空气的表面消毒。洁净工作台的工作原理是利用鼓风机带动空气通过高效过滤器排出，去除空气中的尘粒，从而净化空气。净化后的空气缓慢通过工作台表面，从而在工作台中形成无菌环境。过滤器CO2培养箱CO2培养箱设定条件为37，5co2。使用CO2培养箱培养细胞时应注意的问题：使用螺旋瓶培养细胞时，应稍微松开瓶盖，以保证通风。保持保育箱内的空气清洁。定期消毒(90，14小时)。将箱内的火菌蒸馏水放入3000毫升蒸馏水罐中，以保持箱内湿度，避免兔子培养液蒸发。自动双纯水蒸馏器、纯水仪器、微

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