不明原因肺炎病例的实验室诊断

1、1、原因不明的肺炎病例实验室诊断，广州市第八人民医院检查和老业性，2、州内容量、原因不明的肺炎原因实验室生物安全标本收集、包装、携带和保存的检查室检查注意事项，3、1、原因不明的肺炎原因，肺炎、细菌性肺炎：斯特里病毒基因组是由约30，000个核苷酸构成的单链RNA。与经典冠状病毒有约60%的同源，但其组织形态与其他冠状病毒相似。双层脂质膜，外膜蛋白包含糖蛋白s，m和小衣壳e蛋白。m糖蛋白只有短氨基末端域暴露在涂层外部。长而弯曲的羧基端和单分子的基因组RNA和多分子碱性n蛋白形成螺旋核心衣壳结构。5，SARS-CoV的生物学特性：在室温下至少10天，在腹泻患者的痰和粪便中至少5天，在血液中大约1

2、5天，可以在塑料/玻璃/马赛克/金属/布/复印纸等物体表面生存23天以上。病毒对温度敏感，温度升高，抵抗力下降，37能存活4天，56能加热90分钟，75能破坏病毒。如果被紫外线照射60分钟，就能杀死病毒。病毒对有机溶剂敏感，尿素在4条件下24小时作用，可以完全停用病毒，75%的乙醇工作5分钟就能使病毒失效，含氯消毒剂工作5分钟就能破坏病毒。6，* n-myxovirus a-influenza。具有多态性，有囊膜。*病毒基因组是分段单链负链RNA。*能感染人的亚型是H5N1，H9N2，H7N7，H7N2，H7N3等，感染H5N1的患者是重症患者，死亡率高。禽流感病毒结构，7，禽流感病毒的生物学

3、特性：对乙醚、氯仿、丙酮等有机溶剂敏感。常用消毒剂，如氧化剂、稀酸、卤化合物(漂白剂、碘)，可以迅速破坏活动。对热敏感，但对低温耐受性强，煮65 30分钟或2分钟消灭。在低温粪尿中能存活1周，在4水中存活1个月，对酸性环境有一定的抵抗力，在pH4.0中也有一定的生存力。在甘油存在的情况下，可以维持一年以上的活力。暴露病毒在直射光下4048h时关闭，用紫外线直接照射可以迅速破坏其活动。8，按照原因不明的肺炎检查实验室检查程序和要求，建立国家、省、省(市)水平的临床标本三级实验室检查网络系统。卫生部在中国CDC病毒疾病预防控制中心和传染病预防控制中心设立了国家级检查研究所。广东省卫生局确认省CDC

4、(流感研究所)为我省中心实验室，广州市CDC为平行中心实验室。建立了复盖脂肪的第一屏实验室。9，2，加强实验室生物安全、传染性非典型肺炎实验室管理，防止实验室感染和环境污染，防止因实验室操作不当而引起的SARS传播，保护实验室工作人员的安全和健康，卫生部办公厅于2003年6月16日发布了传染性非典型肺炎实验室生物安全运行规范。参与SARS预防和研究的所有实验室和实验室工作人员都必须遵守这一要求。还废除了2003年4月29日出版的非典实验室生物安全使用指南。10，2，根据实验室生物安全、传染性非典型肺炎实验室生物安全操作规范，所有实验室工作人员应通过适当的专业技术培训，受到严格的生物安全保护。凡

5、是操作活病毒的实验，都要在生物安全III水平(BSL-3)以上的实验室进行。剩下的临床试验可以在生物安全第二级(BSL-2)实验室或整排生物安全柜中进行。从事患者样品的日常检查应使用专用实验室和仪器。11，2，实验室生物安全，下一步工作必须在用细胞培养方法分离病毒的生物安全3级(BSL3级)以上实验室中进行；收集或浓缩病毒或其培养产物。用活病毒或病毒的全部基因接种动物。12，2，实验室生物安全，以下应在生物安全2级(BSL2)以上或整排生物安全柜中进行：咽拭子/漱口/痰/尿/大便/血清和血样诊断测试；溶解、固定或以其他方式处理惰性病毒和/或无传染性病毒基因片段；日常细菌和毒素检查；能够产生气溶

6、胶的样品处理；临床样品包装、化妆；离心管和离心机旋转关闭和打开。13，2，实验室生物安全，执行这些措施的人必须采取以下保护措施：戴N95口罩，调整口罩的鼻子金属夹，呼吸气体肯定会被口罩过滤掉；戴上可以遮住脸的保护面具或保护护目镜。戴上手术帽，盖住双侧耳朵。戴双层手术乳胶手套。每次可能接触包含病原体的样品的操作完成后，您都必须更换外部手套，并执行以下操作：在普通实验用白色大衣外面再穿上手术服或连体分离服(推荐防水材料)，两块上肢戴上袖口，用乳胶手套袖子的末端盖住袖口，拧紧。下衣穿裤子套装，脚穿鞋子套装，鞋套装上部橡皮筋拉紧裤子套装下部。14，2，实验室生物安全，工作现场消毒及污染物处理：实验后，

7、所有高压可消毒耗材及样品应在实验室进行高压消毒，高压不可消毒物品应使用70乙醇消毒，实验室台面和受污染设备表面应使用对脂肪涂层病毒有效的消毒剂消毒。实验室用紫外线灯消毒。15，2，实验室生物安全，非典实验室生物安全运行规范的要求， SARS患者样品从事临床日常检查的实验室也应具备生物安全2级(BSL2)以上、专用检测室、血细胞计数仪、血气分析仪、血液生化分析仪等特殊仪器设备。16，3，标本收集，包装，运输和保存，1，收集对象可疑病例，临床诊断，诊断病例。亲密接触者，一周内出现流感等症状的人。原因不明的肺炎住院患者。根据其他需要收集对象：可能暴露在SARS/禽流感病毒或潜在感染性数据中的人身上的

8、原因不明的肺炎病例，如SARS/禽流感研究、检查、试剂和疫苗生产工作人员。17，3，标本收集、包装、运输和保存，2，标本收集人员按照全国原因不明的肺炎病例监测实施方案(试行)的规定：训练的医疗机构医生、护士或疾控中心的专业人员负责标本收集，填写标本登记表。采集标本的时候，要按照相关规范做好个人安全。18，3，标本收集、包装、运输和保存，3，标本类型和收集时机，(1)上呼吸道标本：鼻棉棒(或咽棉棒)，刷牙；下呼吸道标本：鼻咽或气管提取物、支气管/肺泡灌洗液和肺组织活检标本；血液标本：血清和EDTA抗凝全血；粪便/尿液样本；验尸标本：主要要从肺、器官、各部分进行采访。19，3，标本收集、包装、运输

9、和保存，3，标本类型和收集时机，(2) SARS预警病例取样：至少鼻咽拭子(刷牙)、大便(肛门棉棒)和血清收集；急性期应尽快收集(发病后7天内)；恢复期收集在发病后24周(发病20天后)。每三天收集一次样本，以检测病毒核酸和血清抗体；两周后，每5天可以取样。，20，3，标本收集、包装、运输和保存，3，标本类型和收集时间，(3)人类禽流感预警病例抽样：患者发病后13天后咽、鼻棉棒或漱口，发病后7天内急性血清和死亡病例的尸检肺组织、器官分泌物、病毒分离患者发病后24周的血清标本采集。21，3，标本收集、包装、运输和保存，4，标本收集方法(1)广东省传染性非典型肺炎检查工作指南(试验)，人类禽流感样

10、品收集、运输和检查技术规范(试验)，或国家标准流感诊断标准和处理原则参考。病毒分离标本：注意无菌操作。血清标本：双重血清；从空腹中提取510毫升。22，3，标本收集、包装、运输和保存，4，标本收集方法(2)鼻面棒：将棉棒轻轻插入鼻唇部，暂时停留，慢慢转动，结束。用同一棉签擦掉两个鼻孔。将棉签浸入45毫升取样液中，丢弃尾部。咽面起义：用棉签擦拭双面咽扁桃体和咽后壁，同样，将棉签的头浸入45毫升取样液中，丢弃尾部。23，3，标本收集，包装，运输和保存，4，标本收集方法(3)刷牙：用10ml乳液漱口。刷牙使患者的头稍微向后仰，发出“ao”的声音，使乳液变成人头。然后收集乳液。鼻乳液：头部稍微向后仰，

11、用吸管将11.5毫升乳液注入一侧鼻孔，指示患者同时发送k音，关闭咽部。然后，把病人低下，把乳液拿出来，收集碟子或烧瓶乳液。重复多次，最多可使用1015毫升乳液。注意：为了避免过敏，请不要使用包含青霉素的标本运输液。24，3，标本收集、包装、运输和保存，4，标本收集方法(4)鼻咽提取物：用连接负压泵的收集器从鼻咽中提取粘液。首先将收集器头部插入鼻腔，打开负压，旋转收集器头部，然后慢慢退出。收集提取的粘液，3次作为取样液体火锅收集器。肺活检材料：在灭菌状态下，用灭菌保留剂更换肺活检组织，NS为20%悬浮液，2000rpm离心10分钟，相应的抗生素上等。25，3，标本收集，包装，运输和保存，4，标本

12、收集方法(5)尿液标本：两个灭菌栓钉塑料瓶两个同时收集尿液，密封，4条件立即送到相关实验室。粪便(或肛门棉棒):将1020g粪的双层部分(或塑料棒人造丝头部的两个肛门棉絮)分别放入10mlPBS或两个装有生理盐水的50ml无菌螺旋盖的塑料瓶中密封，4条件下立即送到相应的实验室。26，3，标本收集、包装、运输和保存，4，标本收集方法(6)血清标本：包括双重血清510毫升。血液样本20002500rpm离心15分钟，血清收集，将灭菌条件转移到带垫圈的螺旋盖塑料血清管。一周可以存储在4，长期存储为-20。使用EDTA抗凝剂收集全血标本。尽可能空腹采集血液标本。上述样本(不包括全血)如果不能在规定的时

13、间内发送，应尽快保存在70。27，3，标本收集、包装、运输和保存，5，标本包装和搬运(其中之一)标本应放在适当螺旋盖内有橡胶圈的塑料管内。在塑料管上显示样品种类、取样时间、编号、名称，详细填写检查登记表，用其他塑料袋密封。将装有标本的密封盒放在螺丝盖内有橡胶圈的塑料容器里，拧紧盖子，在第二容器上显示相关信息。把第二容器放在专用运输箱(或疫苗运输箱)里，放在冰面上，用柔软的物质填充，密封。28，3，标本收集、包装、运输和保存，5，标本包装和运输(2)同一患者2个以上标本，可以放在同一二次容器中。第二次容器在95Kpa以上的压力下内衬具有吸水和缓冲能力的柔软物质。病毒分离标本可以直接将第一容器放入

14、液氮运输罐中运输。所有容器都必须印有生物危险标记。标本不能邮寄。必须使用航空或铁路运输。近距离样品配送最好使用特殊车辆专家(2人)。29，3，收集、包装、运输和保存标本，6，为了保存病毒分离标本，可以尽快，24小时内进行4次临时接种；24小时内不能接种的批-70保存；-没有70保留条件的话-20准备冰箱。血清标本4天可以保存13天，-20以下可以长期保存。标本运输过程中应避免重复冻融。所有的标本都有两个，其中一个单独保存，供审查。30，3，标本收集、包装、运输和保存，7，标本接收广州、深圳、佛山、韶关、汕头、云浮、湛江、珠海CDC接受地区标本分配单位，进行相关实验室测试工作。广东省疾控中心负责

15、其他地方市标本的接收和检查工作。检查样品测试、确认和中国CDC。以上指定实验室24小时实施标本接收制。31，4，原因不明肺炎的实验室测试，1，经典检测方法病毒分离和识别：不适用于研究和疑难病例识别的日常检查。SARS-CoV:接种人类胚胎肺细胞或猴肾细胞，分离病毒，并使用补体结合检查或中和检查、IFA或ELISA等查明抗原。禽流感：用SPF鸡胚单孔法和MDCK组织细胞分离培养，培养用血凝试验(HA)和H5血凝抑制试验(HI)确认。微量血清中和实验：H5活病毒必须在BSL-3级实验室操作。(见特定工作国家标准流感诊断标准和治疗原则)，32，4，实验室检查不明原因肺炎，2，快速检测方法1)分子生物

16、学检测：RT-PCR或Real-Time PCR SARS-CoV核酸检测禽H5亚型流感病毒核酸检测2)3)免疫荧光分析，33，4，原因不明肺炎的实验室检查，SARS-CoV核酸检测试剂的首选国家推荐试剂：深圳皮吉的SARS-CoV实时PCR检测试剂。是dadas基因的SARS-CoV实时PCR分析试剂。有条件的话，可以使用以下核酸检测试剂。美国CDC开发SARS-CoV实时PCR核酸检测试剂。德国RT-PCR核酸检测试剂，结果必须排序。德国Artus的SARS-CoV实时PCR核酸检测试剂。34，4，原因不明的肺炎的实验室测试，SARS检查结果确认，由于PCR方法的应用，被以下三者之一判定为阳性：同一临床标本在两个检查室使用两种不同的方法或重复PCR方法检测阳性。至少两个不同部分的标本(如咽拭子和大便)检测阳性；两个或两个以上咽拭子等不同经过(至少两天间隔)采集的相同标本接受了阳性检查。并行检测进行期间和恢复期间的血清抗体，发生良性转移或增加4倍以上，可以写SARS-CoV感染的实验室测试报告。35，4，对原因不明的肺炎进行实验室检测，用H5亚型流感病毒核酸检测试剂快速检测、测序和清除H5亚型流感病毒；建议使用中国流感中心或世界卫生组织等权威部门推荐的引物和探针。建议使用德国QIAGEN的Rneasy Mini Kit(病毒核酸提取)和QIAquick Gel