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文档简介

1、蛋白质相互作用研究 酵母双杂交系统,专业: XXX 学生：XXX,研究背景 系统分类 系统原理 操作过程,研究背景,蛋白质-蛋白质的相互作用是细胞生命活动的基础和特征。例如细胞与细胞、细胞与基质的连接；细胞信号转导；代谢网络；以及转录、翻译调节等.,通过酵母系统进行基因水平的检测，是采用体内实验来研究蛋白间的相互作用。 所有操作均是在核酸水平上进行，无需纯化大量的蛋白，并可精确地测定蛋白质间弱相互作用。,研究背景,酵母双杂交系统分类,核内蛋白质相互作用的研究 膜蛋白、膜相关蛋白和可溶性蛋白间相互作用的研究,核内蛋白质间相互作用的研究,原理：,转录激活因子通常有两个可分割的、功能相互独立的结构域

2、，即DNA特异性结合结构域（DNA-binding domain， DBD）与转录激活结构域（transcriptional activation domain, AD）。,DBD-Bait 和 prey-AD 这两个融合蛋白是如何构建的？ 又是如何进入同一个酵母细胞的呢？,因此完整的酵母双杂交由三个部分组成：bait 载体，prey 载体，和带有报告基因的酵母菌株。 根据目前通用的系统中DBD来源的不同，主要分为GAL4系统和LexA系统。 GAL4系统来源于酵母；LexA系统的BD来源于原核生物，在真核生物内缺少同源性，因此可以减少假阳性的出现。,应用 定义两个已知蛋白质间的相互作用； 筛选新的蛋白质间相互作用（即cDNA文库筛选）； 绘制蛋白质相互作用图谱； 寻找具有药物治疗作用的小分子多肽。,膜蛋白、膜相关蛋白和可溶性蛋白间相互作用的研究,原理：,泛素（ubiquitin）,N-terminus,Lysine 63,Lysine 48,C-terminus,分离的泛素系统,分离泛素（split-ubiquitin）系统,应用 确定两个

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