Dynabeads 链霉亲和素磁珠

1、Dynabeads链霉亲和素串珠M-280配套元件检测细小病毒核酸，产品介绍：本公司M-280链霉亲和素串珠是一种规格统一、超顺磁性聚丙乙烯串珠，其表面由单层链霉亲和素复盖，链霉亲和素以共有价格附着在串珠表面。 本公司提供的珠子产品用混悬剂包装，每毫升含有10mg-dynaeye珠子，珠子的储存液pH=7.4的磷酸缓冲液，其中含有0.1%BSA和0.02%叠氮化钠作为防腐剂。 本公司提供不同包装规格的产品： No. 112.05产品为2ml包装No. 112.06产品为1.0 ml包装No.602.10为100ml包装。 产品介绍，与链霉亲和素结合的串珠作为固相基质，可简单有效地与小分子、肽类

2、、蛋白、抗体、糖类、凝集素、寡聚核苷酸、DNA/RNA等多种生物素化合物结合。 应用本公司的串珠收集器(Dynal MPC )，可有效地收集串珠，随后可对目标分子进行实验性操作。 磁珠的捕获、漂洗和检验等工艺易于操作和系统优化定。 单层链霉亲和素以共价被磁珠表面垄断，确保了可忽略的低耦合损失率。 由于串珠上对链霉亲和素的吸附不太多，在你的实验应用和检测中，不同批次试剂波动小，结果重现性好，原理：在链霉亲和素串珠上加入生物素标识牌分子，与生物素标识牌分子结合，在串珠分离后，采用下游技术，串珠分离、 免疫磁珠法分离细胞球的原理图，准备使用M-280磁珠之前，需要洗去磁珠上的防腐剂。 磁珠收集器(D

3、ynal MPC )有助于简化清洗过程。 1、轻轻摇动装有玻璃珠的瓶子，使玻璃珠悬浮，得到均匀的混悬剂。 2、必要时，将适量的珠子混悬剂转移到备用管。 3、将软管放置在磁性支架的1-2分钟处，在分离过程中，请勿将软管从磁性支架上取下。 4、用移液器去除软管中的上清(此时软管放置在磁性固定架上)，移液器的枪口不接触软管内壁(因为玻璃珠附着在软管内壁上) 5，从磁性固定架上取下软管，根据你的特殊用途适当的缓冲液6、重复一次清洗(步进3.5 )，加入适当的体积缓冲液，调制玻璃珠工作液。 使用说明、M-280微珠的准备(图解)、防腐剂的清洗、丢弃上清液、沿管壁放入同量的缓冲液、重复1次、预备液用液、轻

4、轻摇动、准备、1、磁场力架、分离、Dynal链霉亲和素微珠液M-280除RNA酶催化剂以外7、 8、在室温下放置1小时，进行高压灭菌。 9、用等体积溶液a清洗珠子2次，用1.3成分1.0量、等体积b清洗珠子1次。 用1.1 .溶液b使玻璃珠悬浮。RNA操作的准备、RNA操作的准备(图示)、DEPC、DEPC、室温静置1h、高温灭菌、洗磁性珠2次、1-3min、洗磁性珠1次、悬浮磁性珠、溶液A:DEPC处理的0.1 M NaOH； DEPC处理的0.05 M NaCl溶液B:DEPC处理的0.1 M NaCI、Dynal链霉亲和素串珠M-280为许多分子水平操作、亲和纯化及各种生物检测提供了良好

5、的载体。 捕获目标分子有直接法或间接法。 间接的方法是，首先在试料中加入生物素化配体，与特异性目标分子结合形成复合体。 这个复合体孵化成了捕获用的磁珠。 考虑到生物素和链霉亲和素的强亲和力、快速结合活力，间接捕获法可用于配体靶分子结合动力低或亲和力弱的实验，使非特异性结合最小化。 该方法配体浓度低，适用于配体靶分子键需要最佳空间结构和真正液相动力学的实验。 固定步骤，1 .将0.1 mol荧光修饰核苷酸溶解在0.7 ml无菌蒸馏水中(可以用Aminolink 2试剂合成5氨基修饰寡聚核苷酸)。 加入0.1 ml的1.0 M NaHCO3/Na2CO3缓冲液，pH为9.0. 3 .用酯类化合物系

6、试剂(biotin-x-nhs-酯)使生物素附着在氨基化学基上。将1.0为10mg/ml的biotinxnhs酯溶液溶解于二甲基霍尔磨粉机中。 将调制好的该溶液0.2 ml加入到反应混合物中。 4 .在室温下放置2小时。 5 .用nap 1.0柱法除去微量游离biotinxnhssteer。 6 .根据制造商的说明书用反相HPLC法精制生物素化寡聚核苷酸。 生物素化寡聚核苷酸引物(化学键合法的5或3末端阿摩尼亚修饰寡聚核苷酸的生物素化工艺)，通过NAP-10柱法除去微量游离Biotin-X-NHSEster。 根据制造商说明书，用反相HPLC法纯化生物素化寡聚核苷酸，得到ph=9，0.1 ml

7、的1.0 M NaHCO3/Na2CO3缓冲液，生物素化寡聚核苷酸底漆，0.1umol荧光修饰核苷酸，0.7ml的无菌蒸馏水，10mg/ml的biotin -。 将配合的该溶液0.2 ml加入反应混合物中，在室温下放置2小时，由于游离生物素占据珠子上的结合部位，使生物素化PCR产物的结合能力降低，因此从生物素化寡聚核苷酸中分离游离生物素很重要，优选FPLC法或反相HPLC法。 该精制工序也可以确保全长脱氧寡聚核苷酸的标识牌水平接近100。 用生物素磷阿摩尼亚化法将引物进行生物素化时，引物的生物素化率为7075，即2530的引物没有被生物素化。 必须用反相HPLC和FPLC法回收纯化生物素化引物

8、。 生物素化底漆的精制，1，b表面积：4-8 m2/g； 密度：1. 4克/厘米3。 本产品中应用的重组链霉亲和素为分子量约52kDa的蛋白质，(1)由4个相同的亚单位组成，1个亚单位具有可与生物素结合的高亲和力部位。 链霉素亲和素的结合特性与亲和素相同。 非特异性结合很少。 (2)链霉亲和素与生物素结合快速牢固，一旦结合后不受pH、温度、有机溶剂、其他改性剂的影响。 产品的特性、结合能力、结合能力与固化的特定目标分子的大小有关。 请确保你的样品中不存在过剩的游离生物素。 游离生物素要比大分子量的靶分子键链霉亲和素更早地包含在营销对象PCR产物溶液中，请确保不含过剩的游离生物素化寡聚核苷酸。

9、在PCR中，通过限定生物素化引物的浓度，通过超滤法、微透析法等去除方法去除游离生物素化引物，确保体系去除游离生物素化引物。 盐浓度影响生物素化核酸与珠子的结合能力，生物素化DNA片段(1kb )的最佳结合条件：最终浓度为1M的NaCI，25C，1.5分。 1毫克的链霉亲和素M-280串珠可结合： 700 pmoles游离生物素； 200 pmoles生物素化寡聚核苷酸； 生物素化抗体5 - 10 g； 5 pmoles长2-4kb的双链DNA片段。 各应用中珠粒的用量应以滴定法优化。 由于硬化后的特定分子的大小和生物素化过程可能会影响两者的结合能力，因此要密闭保存2-8C，在有效期间内串珠稳定，有效期间将显示在标签