第十七章药物制剂的微生物检验.ppt

1、第一节体外抗菌试验，包括抗菌试验，将药物区分为抗菌或丰口惠药物；测定药物丰口惠活性的丰口惠试验；还有确认两种药物组合的联合抗菌检查。一般抗菌素只能抑制微生物的生长，不会杀死微生物，即使除去抗菌素，微生物也能继续生长。杀菌剂可以杀死微生物，杀菌剂去除后，微生物仍然不能生长。第十七章药物制剂的微生物检验、药物的抗菌效果或丰口惠效果在一定条件下是相对的。我们检查的时候，药物的作用受到了药品使用培养基的赵寅成、温度、PH值、使用的菌株、细菌数量等多种因素的影响。体外抗菌检查有多种优点，但体外抗菌检查不影响复杂的体内因素，因此体外抗菌检查和体内抗菌检查可能会产生不一致的结果。所以一般来说，我们最好用体外

2、实验检查药物，如果再用体内检查证明的话，建议应用于临床。第一，对药物的体外抗菌试验(a)体外抗菌试验是常用的抗菌试验方法，最常用的是系列稀释法和琼脂扩散法。1，连续稀释法稀释法有液体培养基连续稀释法和固体稀释法(倾斜法)两种。两种方法都可以用来测量药物的最低抗菌浓度(MIC)。也就是说，这种药物是指能够抑制细菌生长的最低浓度，通常以GML或U/ml表示。(1)液体培养基连续稀释法，(2)固定培养基连续稀释法1)胎盘法将一系列浓度的药物混合在琼脂平板上，用微量样品采样机或多点接种机接种试验菌，可以在版盘组中测定多种试验细菌的MIC。2)坡度法将不同浓度的药物混合在培养基中制成坡度，然后在坡度上接

3、种一定量的实验菌进行培养，然后观察其MIC值。2 .琼脂扩散法以利用药物扩散到琼脂培养基，在一定浓度范围内抑制细菌生长的原则进行。一般用于细菌和酵母的药敏试验。1)滤纸法(纸盘法)滤纸法最常用于新药的超体检查(初步药物是否具有抗菌效果)和临床的药敏试验。滤纸分为两种，湿或干的时候用无菌纸裹上药物溶液，放在含有菌的平面表面，或者事先用一定浓度的干燥纸制成。一般来说，预制的干燥纸实用准确。世界卫生组织对抗生素或化疗药物的抑菌圈直径(mm)耐受性敏感的氯霉素12-17 18红霉素13-17 18四环素14-18卡那霉素13-17 18卡那霉素14-17 14-17 18四环素14-17 18，(2)

4、挖掘1、最低丰口惠浓度(MBC)(最低致死浓度MLC)测定液体培养基稀释法操作方法测定药物的MIC。将未生长的试管培养液分别撒在无菌板上，然后在扁平板上无菌生长的药物的最低浓度为最低致死浓度(MLC)。如果是细菌，可以说是最低丰口惠浓度(MBC)。2，生菌计数法将定量实验菌添加到一定浓度的定量药物中，对作用一段时间后的活性细菌数进行取样，并从存活的微生物数中计算药物对实验菌的致死率，从而判断药物的丰口惠能力。生菌数一般是在定量的药物和实验菌作用后稀释混合液，混合琼脂培养基，制作和培养板后，多板形成的菌体数会增殖，因此可以通过将菌数乘以稀释倍数来计算混合液中存活的细菌数。，3，苯酚系数测定(煤酸

5、系数测定)苯酚系数以试验中的化学消毒剂和丰口惠效果比较为标准，得出丰口惠效果的比例。由于各种化学消毒剂的丰口惠原理不同，该方法仅适用于苯酚消毒剂的丰口惠效果测定。将苯酚及测试中的化学消毒剂分别稀释为不同比例，在试管中放入5毫升，24小时培养，将细菌悬浮液分别放入20水浴，5，10，15分钟将一个接种环转移到另一个5毫升的肉汤培养基上，进行37小时培养，记录生长情况。(c)联合抗菌试验，测定2种抗菌药物的相互作用。两种抗菌剂一起使用时，抗菌效果增强的称为协同效应。抗菌效果的减弱称为拮抗作用。徐璐没有影响，称为零相干。常用的联合抗菌测试方法包括：出了4个结果。没有关系的效果很少，两种药物复合作用的

6、活性等于其单独活性。拮抗作用，两种药物的结合效果明显低于单独的抗菌活性；累积效应，两种药物的结合活性等于两种单独抗菌活性的总和。协同效应，两种药物的联合效应明显大于其单独作用的总和。1，板稀释法常用的定量方法，首先分别测定试验细菌的准抗菌剂的MIC。药物的最大浓度稀释为MIC的两倍。两种药物的稀释分别在方阵的纵向和横向列上进行，因此在每个管子(孔)中可以徐璐得到两种不同浓度的药物混合液。接种细菌量为5105CUFml，35孵化后18h观察结果。计算部分抗菌浓度(FIC)指数。FIC金志洙0.5是协同作用。0.51附加效果；12是无关的角色。2是拮抗作用。图板法设计图板法的主要优点是，甲和乙两种

7、药物的每种药物浓度都有单独的和不同的药物浓度的组合，可以准确测量两种抗菌剂在适当浓度的比例下发生的相互作用。两种抗菌剂在进行棋盘法之前，分别测定了测试细菌的MIC，然后是两种药MIC的8倍、4倍、2倍、1倍，MIC的1/2、1/4、1/8浓度(或4倍、2倍、1/2、1/2)例如表1中的青霉素g和链霉素的联合药敏试验。药物和浓度青霉素G(IUm1)链霉素单一药物比较4 2 1 0.5 0.25链霉素(GML) 64 - 8 - 4 -青霉素G单一药物控制-细菌控制，-:无细菌生长FIC金志洙=11 1616=2纸条测试是在同质板上徐璐埋有不同药液的两块滤纸垂直释放培养后，观察两种药物形成的抑菌区

8、域的图形，判断两种药物是否复合应用，协同作用或拮抗作用。第二，也称为药物体内抗菌试验，动物实验治疗试验或保护力测试。抗菌素进入身体后，其功效受体内多种因素的影响。血液及组织内蛋白质、磷脂、脓的核酸与药物结合，降低药物活动。坏死组织的酸性环境也会影响药物活性。身体的微生物代斯活动低，对药物的敏感度低，有时形成细胞壁缺陷型细菌，对某些药物不敏感。在身体内的各个组织中，很难通过不同的方式分散药物的吸收，使药物的浓度保持不变。因此，在评价新药的功效时，不仅需要进行体外抗菌检查，还需要进行体内抗菌检查。第三，影响抗菌试验的因素，第一，抗菌检测菌株使用的菌株必须是国家卫生部生物产品检测所真菌保存中心特别提

9、供的标准菌株。在特殊情况下，还可以使用新分离、鉴定、纯化和合理保存的菌株。而我们要使用的实验菌必须选择在对数期间生长的细菌。因为那时具有最强的生命力，对我的实验结果也会更准确。2、试验所有培养基要严格控制各种原料、成分的质量和培养基的制造过程，按照各试验菌的营养要求进行准备。某些药物起抗代谢作用时，培养基中不能有代谢物质。否则抗菌效果就会消失。培养基中含有血清等蛋白质时，可能会与某些抗菌素结合，失去抗菌素，因此应避免培养基混入这些营养物质。3、试验药物物理状态、浓度、稀释方法等会直接影响抗菌试验结果，需要正确的准备。如果是固体药物，则应溶解药物或均匀地挂固体。PH应中性调节，以确保药物的稳定性，不影响细菌的生长。中药含有颜色和单宁，对结果的判断要特别注意。第四，对照试验要在考试时同时进