FDA大肠菌群和大肠杆菌检测方法#一类特选

1、定义大肠菌群群所谓大肠菌群组，就是发酵乳糖、产生产酸剂、需要氧气、厌氧革兰阴性芽胞杆菌。大肠菌群组并非按细菌学分类命名，而是根据卫生学要求，作为与粪便污染相关的细菌即是否受食品、水体等人畜粪便污染的指示菌提出，这些个细菌在生化和血清学上并不完全一致。 进一步生化实验将这些个细菌分为大肠菌群(通称大肠菌群)、柠檬酸杆菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌等。定义大肠菌群大肠菌群(也称为大肠菌群)，属于肠杆菌科，属于埃希氏菌属。大肠菌群是指革兰阴性芽胞杆菌、乳糖发酵产酸瓦斯气体发生剂、IMViC试验(苹果基质、MR、VP、柠檬酸盐试验)为-或- -的细菌。与人类有关的大肠菌群统称为拉肚子性大肠菌群，有肠毒素

2、大肠菌群(ETEC )、致病性大肠菌群(EPEC )、出血性大肠菌群(EHEC )、侵袭性大肠菌群(EIEC )、黏附性大肠埃希菌(EAEC种。卫生学意义大肠菌群组和大肠菌群是做评估卫生质量的重要指标，作为食品中粪便污染指标。从食品中检测出大肠菌群群，该食品有粪便污染，也有可能存在肠管致病菌，因此，被污染的食品也有可能流行肠管感染症。 大肠菌群群数的高低显示粪便污染的程度，也反映了人体健康危害的大小。由于大肠菌群在外部生存时间接近主要肠道致病菌，其出现预示某种肠道致病菌的存在，该菌是国际公认的卫生监测指示菌。 近年来，在执行ha CCP管理过程中，一些国家将大肠菌群作为微生物污染状况监测指标和

3、ha CCP实施效果评价指标。大肠菌群的生物科学特性基本形态：该菌为两端钝圆短杆菌，一般约0.5-0.8m*1.0-3.0 m，多为单独存在或重复，但不呈长链排列。 约50%的菌株有周生鞭毛，但多为14根，一般不超过1.0，因此菌体动力较弱。 许多菌株有菌毛，有荚膜和微荚膜，不形成芽胞，普通碱性染料着色良好，革兰氏染色阴性。培养特性：大肠菌群合成代谢力强，在含有无机盐、铵盐、葡萄糖的普通培养基中生长良好。 最佳生长温度为37，42-44 也能生长，生长温度范围为15-46 。大肠菌群组及大肠菌群的测定MPN法检验过程(FDA BAM )1 .标本50g 450ml稀释液2、适当的1.0倍稀释样

4、品3、选择3个适当连续稀释度的样品稀释液，每稀释度接种3根LST肉汁(1根管装入9mlLST肉汁和导管)，每根管接种1mL。 在35下培养24 2h 48 2h。4、(1)不生气管报告阴性(2)有产气管： BGLB肉汤管接种MPN表报告结果(大肠菌群组)ec肉汁接种44.50.5 (水浴培养) 24 2h 48 2h。生产气管，接种EMB平板(35，1824h )，从EMB平板中选择5个可疑菌接受PCA斜面，进行了革兰氏染色、IMVC生化鉴定、LST复查瓦斯气体发生剂的接种用MPN表报告结果(大肠菌群组)。大肠菌群组测定MPN法检测的几点说明MPN搜索表：MPN检索表只给出了3个稀释度，如果变

5、更为不同的稀释度，表内的数字必须相应地减少或增加到1.0倍。初发酵和验证试验：1 )用两步法进行了两次乳糖发酵试验。 初发酵和实证实验所用的培养基不同，都是为了证实培养物是否符合大肠菌群组的定义，即“在37分解乳糖产生酸瓦斯气体发生剂”。2 )初发酵阳性管不能断定是大肠菌群群细菌，经过实证试验有时会变成阴性。 有数据表显示，食品中大肠菌群组的检验顺序的适合率，初发酵和实证试验的差别很大。 因此，在实际的检验工作中，证实了实验是必要的。生产瓦斯气体量和后管：乳糖发酵试验中，发酵倒管内常见极小的气泡(也有小于小米粒儿的情况)，初发酵时会产生酸，或遇到沿管壁缓慢浮起的小气泡。 实验表明，大肠菌群组的

6、发生瓦斯气体量，多数人可以使整个发酵反管充满瓦斯气体，少数人可以产生小于小米粒儿的气泡。 产生酸，但对没有产生瓦斯气体的乳糖发酵有疑问时，可以用手轻轻摇动试管，气泡沿着管壁上浮时，应该考虑到产生瓦斯气体的可能性，再进行试验。大肠菌群测定EMB选择性分离鉴别EMB平板典型的大肠菌群菌落特征：有没有中心黑色或紫红色、绿色的金属光泽大肠菌群测定EMB选择性分离鉴别EMB是一种弱的选择性培养基，有些球菌在培养基上也可以生长的l高压灭菌可以还原美蓝使培养基的颜色呈不均匀的橘红色，轻轻摇动培养基就可以恢复原来的正常紫色，在倒入平板前应充分摇动在这种培养基中，大肠菌群不一定总是显示绿色的金属光泽该培养基在可见光下易氧化其成分，在储藏和培养细菌时必须作为遮光条件。大肠菌群测定革兰氏染色基本步骤：将涂膜固定在火焰上，滴入结晶紫染液，染色1min，水洗滴加克碘元素液，作