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文档简介

1、1,高质量数据,2,高质量数据,3,高质量数据,4,高质量数据,5,高质量数据,6,高质量数据,7,高质量数据,病毒学。病毒学是一门自然学科,研究病毒的本质、一种特殊的生命形式及其与宿主的相互作用。它是一门交叉生物和医学科学,8,高质量数据,第1章引言,第1节病毒学研究的目标和任务1。病毒是病毒学研究的对象,是一种特殊的生命形式和非常简单的生命形式。高质量的数据,(1)病毒特征,(1)简单的病毒结构,(2)只有一种核酸(DNA或RNA),(3)没有核糖体和完整的酶系统,也没有能量合成和代谢系统。2.独特的复制模式(1)无双重分裂(2)复制模式(3)绝对细胞内寄生(10)高质量数据(4)病毒的双

2、重性(1)病毒存在形式的双重性*细胞外传染性颗粒形式*细胞内生殖基因形式(2)病毒结构形式的双重性*完全病毒和缺陷病毒*病毒和伪型病毒, 假病毒体)*病毒颗粒和空壳(3)病毒起源的双重性*外源病毒从细胞外水平传播到细胞内水平传播病毒*内源病毒在宿主发育的早期阶段感染宿主,病毒基因组整合到宿主基因组中并与其同步复制,随细胞分裂垂直传播到子代细胞。 然而,由于它受宿主细胞控制,病毒基因组只能部分表达,因此不会产生子代病毒,并且它通常不会对宿主造成伤害。11,高质量的数据,(2)病毒的定义,病毒是一种绝对的细胞内寄生虫,它占据一定的栖息地并具有独立于其宿主的进化史,其基因组(DNA或RNA)被其自身

3、编码的蛋白质外壳所包围。12,高质量数据,(3)病毒宿主范围,宿主范围:可被病毒感染的宿主和宿主细胞的类型按宿主类型划分,13,高质量数据,欧盟病毒类病毒卫星剂卫星核糖核酸卫星病毒朊病毒,14,高质量数据,15。高质量的数据,虫媒病毒是一种通过节肢动物如蚊子、扁虱、螨虫和沙蝇等媒介在脊椎动物中广泛传播的病毒。16,高质量数据,(4)病毒起源,三个假说:DNA/RNA病毒起源于细胞,病毒退化进化假说起源于具有复制能力的寡核苷酸,17,高质量数据,18,高质量数据,4,病毒学研究任务,理论方面:促进现代生物学的发展和应用:控制和消除病毒对人类健康和社会发展的危害,利用病毒对有害生物进行生物控制,促

4、进生物高技术的发展,19。高质量的数据,第二章病毒学研究的基本方法,20。高质量数据,1。病毒分离,(1)标本采集和处理,(2)标本接种:实验宿主(动物、植物或细菌),鸡胚或细胞培养,(3)病毒存在的鉴定,(1)系统性症状,21)高质量的数据,(2)局部反应,(1)在营养琼脂平板上生长的细菌的噬斑噬菌体感染,该平板是具有一定大小和形状的透明区域。(2)动物病毒斑或斑块动物病毒感染单层细胞培养形成的局部病变区域是由病毒的细胞病变效应引起的。22.高质量数据,细胞病变效应(CPE):由病毒感染细胞培养引起的细胞微观表达的变化,如细胞聚集、肿胀、收缩、脱落、细胞融合形成多核细胞、细胞内含体,甚至细胞

5、溶解等。()植物病毒坏死斑或坏死斑形成的局部病变区域,23,高质量数据,(4)盲传:将取自接种宿主或细胞培养物的无感染症状的材料接种到新宿主或细胞培养物中,以提高病毒的毒力或滴度。24.高质量的数据。2.病毒的纯化。(1)病毒纯化1。病毒纯化标准(1)纯化病毒制剂应保持传染性(2)纯化病毒制剂应具有同质性。病毒制剂均一性检验的方法包括:电子显微镜、超速离心、电泳和免疫学方法。高质量的数据,(2)病毒纯化方法,1。病毒纯化方法的基础(1)病毒颗粒具有一定的大小和密度,它可以在偏心场中以一定的沉降速率沉降。(2)病毒颗粒的主要化学成分是蛋白质。(2)病毒纯化方法包括:超速离心、沉淀法、凝集技术、液

6、体两相分配系统、有机溶剂萃取、层析和电泳等。(26),高质量的数据,(3)病毒检测,病毒的测定是病毒的定量分析(1)病毒的物理颗粒计数1。用电子显微镜计数,将待测病毒样品与已知数量的聚苯乙烯乳胶粒子混合均匀后用电子显微镜观察,计算病毒粒子和乳胶粒子的数量,根据两种粒子的比例即可计算出待测样品中病毒粒子的数量。27,高质量数据,2。血细胞凝集试验血细胞凝集许多动物病毒的包膜蛋白或外壳蛋白能在一定条件下(温度、酸碱度、离子浓度等)使某些种类的脊椎动物红细胞在体外凝集。),这被称为血凝。血凝试验由于具有血凝特性的病毒凝集的血细胞数量与病毒浓度成正比,根据这一原理设计的血凝试验可用于病毒的定量测定。2

7、8、高质量数据、待测病毒样本稀释2倍,1:1、1:10、1:20、1:40、1:80、13360160、13360320、13360640、133601280、133601280。观察结果并计算病毒的血凝滴度,29,高质量数据,(2)病毒传染性分析,*传染性分析测量由宿主或细胞培养物中的感染引起的特定感染反应中的病毒数量。*感染性单位(IU):是在宿主或宿主细胞培养中引起特定反应的病毒的最小剂量*标题:每单位体积(ml)病毒储备溶液(I/ml)的病毒感染单位数。30,高质量数据,1。噬斑试验(1)噬菌体的噬斑试验,琼脂层法将一定量的稀释的噬菌体悬浮液与高浓度敏感细菌和半固体营养琼脂混合,然后涂

8、在铺有高浓度营养琼脂的平板上。孵育后,分散的单个斑块出现在扩展的细菌苔藓上。根据病毒的一击动力学,传染性病毒能引起细胞感染并形成噬斑,其数量与样品中传染性噬菌体颗粒的数量成正比。因此,噬菌体悬浮液的滴度可以在计算噬斑数量后计算,并以噬斑形成单位(PFU)/毫升表示。,31,高质量数据,动物病毒的噬斑测定,噬斑测定,转化测定,合胞体细胞计数,植物病毒的环死斑测定,32,高质量数据,终点法,取等体积的病毒系列稀释倍数,接种大量相同的试验单位(如实验动物,鸡胚或细胞培养物),经过一段时间的孵育, 病毒样品的滴度由具有某种感染反应的试验单位群体中一半(50%)个体的病毒剂量决定,该剂量称为半有效剂量,

9、由具有感染反应的50个试验单位的病毒稀释度的倒数的对数值表示。 根据试验单位和感染反应的性质,可分为:50%致死剂量(LD50)、50%感染剂量(ID 50)、50%组织培养感染剂量(TCID 50)、33、高质量数据、实验终点测定记录示例、34、高质量数据,根据里德和明希方法,高临界稀释度的倒数与半有效剂量的对数(LD50、ID50或TC ID50)=50%感染率、距离比、稀释系数的对数、 距离比为71-50/71-13=0.36,稀释系数为10,因此LD50=log1/10-3 0.36 log10=3.36,即待测样品的LD50效价为10-3.36,35。 高质量的数据;4.病毒的鉴定;

10、(1)根据病毒感染宿主的范围和感染表现进行鉴定1。感染细胞培养物引起的细胞病变效应的表达3。病毒的传播途径和传播媒介。高质量的数据。(2)病毒1的物理和化学特性的鉴定。电子显微镜2。超速离心分析3。病毒对物理和化学因素敏感性的鉴定。病毒对脱氧核糖核酸合成抑制剂2的敏感性试验。脂质溶剂敏感性试验3。耐酸试验4。温度敏感性测试5。紫外线敏感度测试37。高质量的数据。红细胞凝集特性的鉴定不同的红细胞凝集特性(5)病毒免疫分析免疫沉淀反应、凝集反应、酶联免疫吸附试验、免疫荧光技术、免疫电镜技术、放射免疫分析技术、单克隆抗体技术等。血凝抑制试验:特异性病毒抗体能与病毒表面具有凝集活性的表面蛋白结合,抑制

11、血细胞凝集反应。38,高质量数据,中和试验:建立在病毒的中和特性上,即某些特定的病毒抗体与病毒相互作用后,它会使它失去传染性并抑制病毒的繁殖。这种病毒抗体被称为中和Abs。此外,病毒的传染性只能通过其特异性中和抗体来中和,具有一定滴度的抗血清是中和一定量病毒的传染性所必需的。39,高质量数据,(6)分子生物学方法*变性和不变性聚丙烯酰胺凝胶电泳*蛋白质肽图和N-末端氨基酸分析*核酸消化图和寡核苷酸图分析*分子杂交*序列测定*聚合酶链反应等。40,高质量数据,第三章,有毒粒子的性质,第一节描述了维里粒子的性质的结构术语)1。病毒体是一组能够自主复制的遗传物质(DNA或RNA),它被自己编码的蛋白

12、质外壳所包围,其中一些外壳有一层额外的膜来保护它的遗传物质免受环境的损害,并作为一种载体将它的遗传物质从一个宿主细胞转移到另一个宿主细胞。2.病毒颗粒的基本组成:一个核酸分子(DNA或RNA)的蛋白质外壳(由许多相同的蛋清分子组成)*有些病毒含有多个核酸分子*有些病毒的蛋白质外壳由几个不同的蛋白质分子组成*有些病毒的蛋白质外壳外有一个膜结构*有些病毒的多个核酸分子分别包装在不同的颗粒中,41,高质量数据,3。分段基因组病毒基因组由几个核酸分子组成。只有当这些核酸分子同时存在时,病毒才具有传染性,每个核酸分子被称为一个片段。4.多组分病毒):具有分段基因组的病毒分别包装在多个颗粒中。只有当这些粒

13、子同时存在时,病毒才能复制,而被病毒感染的单个粒子不能复制。多组分病毒主要存在于植物核糖核酸病毒中。42,高质量数据,2。衣壳,也称为衣壳,与外壳同义,外壳包围病毒核酸及其结合蛋白的蛋白外壳。(3)蛋白质亚单位,其同义词是蛋白质单体,其原聚体或结构单元与二级键结合形成病毒外壳。简单的病毒衣壳仅由大量相同的蛋白质亚单位组成,而一些复杂的病毒衣壳可能由许多不同的蛋白质亚单位组成。43,高质量数据;4.顶体,也称为亚粒,是形态单位的同义词,形态单位是由一定数量的蛋白质亚单位以特殊方式聚集在病毒的二十面体壳中形成的结构,在电子显微镜下可见。蛋白质亚单位聚集壳聚集二十面体壳五聚体):由五个蛋白质亚单位聚

14、集形成,六聚体):由六个蛋白质亚单位聚集形成。44、高质量数据。5.核心由病毒核酸及其结合蛋白组成,是被外壳包围的病毒颗粒的中心部分。一些复杂病毒的核心结构是复杂的。这种病毒的核心通常被称为类核病毒和核衣壳,也称为由衣壳和核心组成的复合体。一些简单的病毒有核衣壳结构。7.包膜,也称为包膜,是病毒核-壳外的膜结构,是病毒出芽成熟时从细胞膜衍生出来的脂双层膜,膜蛋白由病毒基因编码。八、棘突病毒表面向外突出的突起,多见于包膜病毒的包膜表面,包膜表面的棘突称为包膜突起(peplomer),45,高质量数据,第2节病毒的化学组成病毒粒子的基本组成包括:核酸、蛋白质、脂类、碳水化合物、其他成分和病毒核酸。(1)核酸是病毒的遗传物质,而脱氧核糖核酸是脱氧核糖核酸病毒的遗传物质。好时大通(1952)大肠杆菌噬菌体T2搅拌试验核糖核酸是核糖核酸病毒的遗传物质,弗兰肯代尔康尼特,辛格(195

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