药品微生物限度检测技术

1、1,第八章药品微生物限度检测技术,中药和生物系,2,第一节药品微生物限度检测概述,中药和生物系,3,药品微生物限度检查定义,非规定灭菌制剂及其原辅料：微生物的种类和数量必须限制在一定的范围内或不得检出。,4,部分口服给药制剂:口服液、酊剂、中药丸剂、糖浆剂、散剂、特殊部位使用的片剂（口腔帖片、阴道片、阴道泡腾片、外用可溶片） 含中药原粉、豆豉、神曲、动物组织等口服制剂 鼻用制剂 洗剂 灌肠剂等,药品微生物限度检查适用剂型,5,一、药品微生物限度检查意义,确定药物是否污染或其污染程度，控制药品的质量； 保证用药的有效性和安全性； 可作为衡量药品生产全过程卫生水平的根据之一。,6,二、药品微生物限

2、度检测的内容,7,8,9,10,第二节药品微生物限度检测条件,中药和生物系,11,一、药品微生物限度检测的特殊性,活体性和不稳定性 分布的不均匀性 多数处于受损伤状态 生态环境的多样性及复杂性,12,二、药品微生物限度检测的基本条件,检查环境和人员要求,环境要求:无菌室内进行。背景洁净度10,000级下的局部100级，单向流空气。,操作人员：卫生、着装符合要求。,操作要求：严格遵守无菌操作，严防污染。,13,二、药品微生物限度检测的基本条件,由于某些供试品具有抗菌活性，在建立测定方法或原测定法的检验条件发生改变时，可能影响检验结果的准确性，必须对供试品的抑菌活性及测定方法的可靠性进行验证。,1

3、4,二、药品微生物限度检测的基本条件,1.抽样方法,15,二、药品微生物限度检测的基本条件,2.检测用量,3.检测量,16,二、药品微生物限度检测的基本条件,17,二、药品微生物限度检测的基本条件,供试品检出控制菌或其它致病菌时，按一次检出结果为准，不再复试。,供试品的细菌数、霉菌和酵母菌数其中任何一项不符合该品种项下的规定，应从同一批样品中随机抽样，独立复试两次，以3次结果的平均值报告菌数。,供试品的细菌数、霉菌和酵母数及控制菌三项检验结果均符合该品种项下的规定，判供试品符合规定；若其中任何一项不符合该品种项下的规定，判供试品不符合规定。,18,第三节药品微生物限度检测方法,中药和生物系,1

4、9,一、细菌数、霉菌和酵母菌数检查,1.平皿法,20,一、细菌数、霉菌和酵母菌数检查,1.平皿法,21,Viable cell count,1.dilute sample,1 ml,9 ml,10 100 1000 104 105 106 107,2. plate out 0.1 ml,22,一、细菌数、霉菌和酵母菌数检查,2.薄膜过滤法,23,24,25,26,27,28,29,一、细菌数、霉菌和酵母菌数检查（薄膜过滤法）,阴性对照： 取供试品微生物限度检查相应的溶剂和稀释液同法操作，阴性对照不得长菌,30,一、细菌数、霉菌和酵母菌数检查薄膜过滤法,结果判断 细菌总数 真菌总数,符合药典该品

5、种项下限度规定,判定药物的细菌、真菌总数检验合格,否则因从同一批次产品中重新抽样，独立复试三次，以三次结果的品均值报告菌数,31,一、细菌数、霉菌和酵母菌数检查,32,一、细菌数、霉菌和酵母菌数检查,33,一、细菌数、霉菌和酵母菌数检查,34,一、细菌数、霉菌和酵母菌数检查,宜选取细菌、酵母菌平均菌落数小于300 cfu、霉菌平均菌落数小于100 cfu的稀释级，作为菌数报告（取两位有效数字）的依据。 （1）当仅有1个稀释级的菌落数符合上述规定，以该级的平均菌落数乘以稀释倍数报告菌数;当有2个或2个以上稀释级的菌落数符合上述规定，以最高的平均菌落数乘以稀释倍数的值报告之。 （2）如各稀释级的平

6、板均无菌落生长，或仅最低稀释级的平板有菌落生长，但平均菌落数小于1时，以1乘以最低稀释倍数的值报告菌数。,35,一、细菌数、霉菌和酵母菌数检查,细菌总数平均菌落数稀释倍数,2020/7/11,36,37,二、控制菌检查检查项目,（1）阴性对照试验：取稀释液10ml按相应供试品控制菌检查法检查，应无菌生长。 （2）阳性对照试验：供试品+10100CFU 阳性对照菌，应检出相应的阳性对照菌。 （3）供试品控制菌检查：依相应的检查方法进行。,38,二、控制菌检查检查流程,39,二、控制菌检查检查流程,40,二、控制菌检查检查流程,41,二、控制菌检查检查流程,42,二、控制菌检查检查流程,43,二、

7、控制菌检查检查流程,44,二、控制菌检查大肠埃希菌检查,大肠埃希菌,45,二、控制菌检查大肠埃希菌检查,大肠埃希菌检查意义,大肠埃希菌为条件致病菌，当人体免疫力低下或是侵入肠外组织、器官，可引起肠外感染，乃至败血症。也可随人和动物的粪便排出体外，污染环境，一旦食品、药品、水等物品中检出该菌，说明已受粪便污染，可能存在其他肠道致病菌和寄生虫卵，人们饮用或服用它们则可能引起消化道传染病。,46,二、控制菌检查大肠埃希菌检查,大肠埃希菌检查流程图,2020/7/11,47,乳糖胆盐培养基,EMB琼脂培养基,靛基质试验,紫黑色金属光泽,玫瑰红色液面,2020/7/11,48,I M Vi C试验 大肠

8、埃希菌 +(或-） + - - 产气杆菌 - - + +,49,二、控制菌检查大肠埃希菌检查,大肠埃希菌检查结果报告,50,二、控制菌检查大肠菌群检查,大肠菌群,51,二、控制菌检查大肠菌群检查,大肠菌群检查意义,大肠菌群主要存在于温血动物粪便中，随粪便排出体外后可直接污染药品，若产品中检出该菌群，表明该产品受到粪便污染，可能存在肠道致病菌并引起疾病，以此作为粪便指示菌比大肠埃希菌更具广泛卫生学意义，是评价化妆品卫生质量的重要指标之一。,52,二、控制菌检查大肠菌群检查,大肠菌群检查流程图,53,二、控制菌检查大肠菌群检查,大肠菌群检查结果报告大肠菌群MPN表,根据发酵乳糖产酸产气，平板上有典

9、型菌落，并经证实为革兰氏阴性短杆菌，靛基质试验阳性，则可报告被检样品中检出粪大肠菌群。,54,二、控制菌检查沙门菌检查,沙门菌,55,二、控制菌检查沙门菌检查,沙门菌检查意义,2020/7/11,56,二、控制菌检查沙门菌检查,伤寒菌检查流程图,靛基质试验 脲酶试验 生化试验 氰化钾试验 赖氨酸脱羧酶试验 动力试验 血清学凝聚试验,有特征菌落,三糖铁琼脂培养基穿刺接种,最终结果判断,增菌培养,供试液的制备,书写检验 记录单,分离纯化,无菌落或无特征菌落,配培养基和稀释液,预增菌,2020/7/11,57,四硫磺酸钠亮绿培养基,SS培养基,黑色菌落,麦康凯培养基,半透明菌落,2020/7/11,

10、58,三糖铁斜面,疑似菌落,赖氨酸脱羧酶培养基,紫色,半固体营养琼脂培养基,血清凝集,59,二、控制菌检查沙门菌检查,沙门菌检查结果报告,60,二、控制菌检查铜绿假单胞菌检查,铜绿假单胞菌,61,二、控制菌检查铜绿假单胞菌检查,铜绿假单胞菌检查意义,62,四、控制菌检查铜绿假单胞菌检查,最终结果判断,增菌培养,供试液的制备,书写检验 记录单,分离纯化,无菌落或无特征菌落,配培养基和稀释液,铜绿假单胞菌检查流程图,30-35,1824h,30-35,1824h,63,十六烷三甲基溴化铵平板,胆盐乳糖培养基,黄绿色菌膜,灰白色湿润,氧化酶试验,粉红/紫红色,64,绿脓菌素试验,盐酸层呈粉紫色氯仿层

11、呈蓝绿色,硝酸盐还原产气试验,N2,明胶液化试验,明胶培养基（高层）,明胶液化,65,二、控制菌检查铜绿假单胞菌检查,铜绿假单胞菌检查结果报告,被检样品经增菌分离培养后，经证实为革兰氏阴性杆菌，氧化酶及绿脓菌素试验皆为阳性者，即可报告被检样品中检出铜绿假单胞菌；如绿脓菌素试验阴性而液化明胶、硝酸盐还原产气和42生长试验三者皆为阳性时，仍可报告被检样品中检出铜绿假单胞菌。,66,二、控制菌检查金黄色葡萄球菌检查,金黄色葡萄球菌,67,二、控制菌检查金黄色葡萄球菌检查,金黄色葡萄球菌检查意义,68,二、控制菌检查金黄色葡萄球菌检查,革兰染色、镜检 生化试验:血浆凝固酶试验,最终结果判断,增菌培养,供试品的处理,书写检验 记录单,分离纯化,无菌落或无特征菌落,配培养基和稀释液,30-35,30-3