2013薄片培养基使用方法验证方案

1、项目名称：Sanita-Kun薄片培养基使用方法验证方案项目编码：QA-F-2013-12版次：01验证小组成员： 日 期： 验证小组组长： 日期： 审核人： 日 期： 批准人： 日期： 目 录1. 验证目的-12. 项目概述-13. 验证范围-14. 职责-15 验证前确认-26 验证内容-37 偏差-128 总结报告-129 参考文件-1310 附录清单-131.验证目的：通过对Sanita-Kun薄片培养基使用方法的验证来证明其检测结果与传统培养基的检测结果相当，可以替代传统培养基。2.项目概述： Sanita-Kun是带有无纺布的薄片状、干燥、现成的微生物检测培养基，由日本JNC株式会

2、社生命化学部生产，其具有操作简便，结果准确、携带方便等特点。产品包括：Sanita-Kun包装一般菌群用100张装、1000张装大肠杆菌菌群用100张装、1000张装黄色葡萄球菌用100张装、1000张装大肠杆菌 大肠杆菌菌群用100张装、1000张装沙门氏菌用100张装、1000张装一般菌群快速型100张装、1000张装真菌用快速型100张装、1000张装3.验证范围： 适用于接触碟法和棉签取样法检测表面微生物以及洁净环境沉降菌的检测、薄膜过滤法检测微生物等。本次验证仅对接触碟法和棉签取样法检测表面微生物进行验证。4.职责4.1.验证小组组长职责4.1.1保证在执行前完成对验证方案的审核和批

3、准。4.1.2保证完全按照验证方案实施。4.1.3确保能及时发现偏差，并按照已经达成一致偏差处理方法对其进行记录、纠正、调查和最终确认。4.1.4验证过程中，如有变更，保证按变更作业指导书执行。4.1.5确保验证报告的生成、审核和批准，以便对该验证报告进行最终批准。4.2. QA验证管理员 4.2.1执行前完成对验证方案的审核。4.2.2负责验证过程的监控和检查，保证验证方案的实施，参与验证结果评价。4.2.3参与验证偏差的调查、处理、和评估。4.2.4验证过程中，如有变更，保证按变更作业指导书执行。4.3.QC检验员职责4.3.1.严格按照标准操作规程进行操作验证仪器4.3.2.严格按照检验

4、标准操作规程进行检测4.3.3.及时准确出具检测报告。4.4 其它成员职责4.4.1执行前确认验证方案已批准，并经过培训。4.4.2按验证方案实施验证，收集、整理验证数据，完成验证记录和报告。4.4.3参与验证偏差的调查和处理，确认通过偏差修订和解决方案。4.4.4确认验证过程中的变更在实施前已经批准。4.5 验证小组成员名单：5.验证前确认5.1.验证设备及文件的确认：检查所有可用的和操作相关的作业指导书,文档和手册。检查结果见附件1：5.2.相关仪器、仪表的校验：检查检测用的仪器仪表具有有效的校验证,汇总仪表的校验合格信息，并付上校验合格证的附件。检查结果见附件2：5.3.相关人员的培训：

5、设备操作及维修人员均接受适当相关文档的培训,培训的内容、学员、教师应记录归档。检查结果见附件3：6验证内容6.1菌种试验用菌株的传代次数不得超过5代，并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。本次验证所使用的菌种包括：大肠埃希菌CMCC(B)44 102金黄色葡萄球菌CMCC(B)26 003枯草芽孢杆菌CMCC(B)63 501白色念珠菌CMCC(F)98 001黑曲霉CMCC(F)98 003确认人：_复核人：_日 期：_日 期：_6.2菌液制备接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中或营养琼脂培养基上，培养1824小时；接种白色念珠菌

6、的新鲜培养物至改良马丁培养基中或改良马丁琼脂培养基上，培养2448小时。上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为50100cfu的菌悬液。接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，培养57天，加入3-5ml含0.05%聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%聚山梨酯的0.9%无菌氯化钠溶液制成的每1ml含孢子数50100cfu的孢子悬液。菌液制备后室内放置应在2小时内使用；若2-8保存可在24小时内使用。菌液名称制备数量制备日期大肠埃希菌悬液 金黄色葡萄球菌悬液 枯草芽孢杆菌悬液 白色念珠菌悬液 黑曲霉

7、孢子悬液 确认人：_复核人：_日 期：_日 期：_6.3棉签取样法验证6.3.1细菌检查：取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌各0.5ml(2550cfu)，使其分别均匀涂布于5cm*5cm洁净无菌的玻璃板上面，待表面干燥后按照表面微生物监测作业指导书BD-WI-QO-020进行棉签取样，并将棉签插入装有6ml无菌水的试管中，充分震荡，以释放微生物至无菌水中，最后每个样品用玻璃注射器吸取1ml接种于营养琼脂培养基和Sanita-Kun薄片培养基上，每株试验菌平行制备2个皿，混匀，凝固，营养琼脂培养基置30-35培养48小时，计数；Sanita-Kun薄片培养基(一般菌群用)35培养48小

8、时；Sanita-Kun薄片培养基(一般菌群快速型)35培养24小时。取样数量见下表：传统培养基Sanita-Kun薄片培养基Sanita-Kun薄片培养基营养琼脂培养基1营养琼脂培养基2一般菌群用1一般菌群用2一般菌群快速型1一般菌群快速型2大肠埃希菌4-8cfu1ml1ml1ml1ml1ml1ml阴性对照1ml金黄色葡萄球菌4-8cfu1ml1ml1ml1ml1ml1ml阴性对照1ml枯草芽孢杆菌4-8cfu1ml1ml1ml1ml1ml1ml阴性对照1ml6.3.2霉菌和酵母菌检查：取白色念珠菌、黑曲霉各0.5ml(2550cfu)，使其分别均匀涂布于5cm*5cm洁净无菌的玻璃板上面，

9、待表面干燥后按照表面微生物监测作业指导书BD-WI-QO-020进行棉签取样，并将棉签插入装有6ml无菌水的试管中，充分震荡，以释放微生物至无菌水中，最后每个样品用玻璃注射器吸取1ml接种于玫瑰红钠琼脂培养基和Sanita-Kun薄片培养基上，每株试验菌平行制备2个皿，混匀，凝固，玫瑰红钠琼脂培养基置23-28培养72小时；Sanita-Kun薄片培养基（真菌快速型）25培养48小时，计数；取样数量见下表：传统培养基Sanita-Kun薄片培养基玫瑰红钠琼脂培养基1玫瑰红钠琼脂培养基2真菌用快速型1真菌用快速型2白色念珠菌4-8cfu1ml1ml1ml1ml阴性对照1ml黑曲霉4-8cfu1m

10、l1ml1ml1ml阴性对照1ml6.3.3酵母菌检查：取白色念珠菌0.5ml(2550cfu)，使其分别均匀涂布于5cm*5cm洁净无菌的玻璃板上面，待表面干燥后按照表面微生物监测作业指导书BD-WI-QO-020进行棉签取样，并将棉签插入装有6ml无菌水的试管中，充分震荡，以释放微生物至无菌水中，最后每个样品用玻璃注射器吸取1ml接种于酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基和Sanita-Kun薄片培养基上，每株试验菌平行制备2个皿，混匀，凝固，酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基置23-28培养72小时，Sanita-Kun薄片培养基（真菌快速型）25培养48小时，计数；取样数量见下表：传统培养基Sani

11、ta-Kun薄片培养基酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基1酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基2真菌用快速型1真菌用快速型2白色念珠菌4-8cfu1ml1ml1ml1ml阴性对照1ml6.3.4按上述方法连续操作三次并计算每次菌落平均值和回收率6.3.5判定标准若Sanita-Kun薄片培养基菌落平均数的回收率（Sanita-Kun薄片培养基菌落平均值占传统培养基菌落数的平均值百分率）在70%130%以内，则判断Sanita-Kun薄片培养基的检测结果符合规定。 6.3.6检测结果见下表：表一：细菌检测结果传统培养基Sanita-Kun薄片培养基Sanita-Kun薄片培养基营养琼脂培养基1营养琼脂培养基2

12、一般菌群用1一般菌群用2一般菌群快速型1一般菌群快速型2大肠埃希菌14-8cfu阴性对照平均值回收率金黄色葡萄球菌14-8cfu阴性对照平均值回收率枯草芽孢杆菌14-8cfu阴性对照平均值回收率大肠埃希菌24-8cfu阴性对照平均值回收率金黄色葡萄球菌24-8cfu阴性对照平均值回收率枯草芽孢杆菌24-8cfu阴性对照平均值回收率大肠埃希菌34-8cfu阴性对照平均值回收率金黄色葡萄球菌34-8cfu阴性对照平均值回收率枯草芽孢杆菌34-8cfu阴性对照平均值回收率回收率=(Sanita-Kun薄片培养基菌落平均值/传统培养基菌落数的平均值)100%表二：霉菌和酵母菌检测结果传统培养基Sani

13、ta-Kun薄片培养基玫瑰红钠琼脂培养基1玫瑰红钠琼脂培养基2真菌用快速型1真菌用快速型2白色念珠菌14-8cfu阴性对照平均值回收率黑曲霉14-8cfu阴性对照平均值回收率白色念珠菌24-8cfu阴性对照平均值回收率黑曲霉24-8cfu阴性对照平均值回收率白色念珠菌34-8cfu阴性对照平均值回收率黑曲霉34-8cfu阴性对照平均值回收率回收率=(Sanita-Kun薄片培养基菌落平均值/传统培养基菌落数的平均值)100%表三：酵母菌检测结果传统培养基Sanita-Kun薄片培养基酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基1酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基2真菌用快速型1真菌用快速型2白色念珠菌14-8cfu

14、阴性对照平均值回收率白色念珠菌24-8cfu阴性对照平均值回收率白色念珠菌34-8cfu阴性对照平均值回收率回收率=(Sanita-Kun薄片培养基菌落平均值/传统培养基菌落数的平均值)100%6.3.7棉签取样法验证总结：_确认人：_复核人：_日 期：_日 期：_6.4接触碟取样法检查6.4.1细菌检查：取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌各0.5ml(2550cfu)，使其分别均匀涂布于5cm*5cm洁净无菌的玻璃板上面，待表面干燥后按照表面微生物监测作业指导书BD-WI-QO-020进行表面接触碟法（营养琼脂培养基）取样，同时使用Sanita-Kun薄片培养基取样（按照Sanita

15、-Kun薄片培养基说明书先滴加1.0ml灭菌稀释液并静放10分钟以上），每株试验菌平行制备2个皿，混匀，凝固，营养琼脂培养基置30-35培养48小时，计数；Sanita-Kun薄片培养基(一般菌群用)35培养48小时；Sanita-Kun薄片培养基(一般菌群快速型)35培养24小时。6.4.2霉菌和酵母菌检查：取白色念珠菌、黑曲霉各0.5ml(2550cfu)，使其分别均匀涂布于5cm*5cm洁净无菌的玻璃板上面，待表面干燥后按照表面微生物监测作业指导书BD-WI-QO-020进行表面接触碟法（玫瑰红钠琼脂培养基）取样，同时使用Sanita-Kun薄片培养基取样（按照Sanita-Kun薄片培

16、养基说明书先滴加1.0ml灭菌稀释液并静放10分钟以上），每株试验菌平行制备2个皿，混匀，凝固，玫瑰红钠琼脂培养基置23-28培养72小时；Sanita-Kun薄片培养基（真菌快速型）25培养48小时，计数； 6.4.3酵母菌检查：取白色念珠菌0.5ml(2550cfu)，使其分别均匀涂布于5cm*5cm洁净无菌的玻璃板上面，待表面干燥后按照表面微生物监测作业指导书BD-WI-QO-020进行表面接触碟法（酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基）取样，同时使用Sanita-Kun薄片培养基取样（按照Sanita-Kun薄片培养基说明书先滴加1.0ml灭菌稀释液并静放10分钟以上），每株试验菌平行制备2个

17、皿，混匀，凝固，酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基置23-28培养72小时，Sanita-Kun薄片培养基（真菌快速型）25培养48小时，计数； 6.4.4按上述方法连续操作三次并计算每次菌落平均值和回收率6.4.5判定标准若Sanita-Kun薄片培养基菌落平均数的回收率（Sanita-Kun薄片培养基菌落平均值占传统培养基菌落数的平均值百分率）在70%130%以内，则判断Sanita-Kun薄片培养基的检测结果符合规定。 6.4.6检测结果见下表：表一：细菌检测结果传统培养基Sanita-Kun薄片培养基Sanita-Kun薄片培养基营养琼脂培养基1营养琼脂培养基2一般菌群用1一般菌群用2一般菌

18、群快速型1一般菌群快速型2大肠埃希菌1 阴性对照平均值回收率金黄色葡萄球菌1 阴性对照平均值回收率枯草芽孢杆菌1 阴性对照平均值回收率大肠埃希菌2 阴性对照平均值回收率金黄色葡萄球菌2 阴性对照平均值回收率枯草芽孢杆菌2 阴性对照平均值回收率大肠埃希菌3 阴性对照平均值回收率金黄色葡萄3球菌 阴性对照平均值回收率枯草芽孢杆菌3 阴性对照平均值回收率回收率=(Sanita-Kun薄片培养基菌落平均值/传统培养基菌落数的平均值)100%表二：霉菌、酵母菌检测结果传统培养基Sanita-Kun薄片培养基玫瑰红钠琼脂培养基1玫瑰红钠琼脂培养基2真菌用快速型1真菌用快速型2白色念珠菌1 阴性对照平均值回

19、收率黑曲霉1 阴性对照平均值回收率白色念珠菌2 阴性对照平均值回收率黑曲霉2 阴性对照平均值回收率白色念珠菌3 阴性对照平均值回收率黑曲霉3 阴性对照平均值回收率回收率=(Sanita-Kun薄片培养基菌落平均值/传统培养基菌落数的平均值)100%表三：酵母菌检测结果传统培养基Sanita-Kun薄片培养基酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基1酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基2真菌用快速型1真菌用快速型2白色念珠菌1 阴性对照平均值回收率白色念珠菌2 阴性对照平均值回收率白色念珠菌3 阴性对照平均值回收率回收率=(Sanita-Kun薄片培养基菌落平均值/传统培养基菌落数的平均值)100%6.4.7接触碟取样法验证结论：_确认人：_复核人：_日 期：_日 期：