内毒素LAL检测使用说明(中文版) 2

1、第一页前协议计量检验连接协议toxinsensor显色lal细菌内毒素检测套件在室温下执行所有测试步骤。 在操作之前，请使用经过认证的免费细菌内毒素产品。样品的制备所有材料或稀释剂均用于标本的收集和制备，试验试剂必须无细菌内毒素。 随时使用无菌技术。 待测试样品必须以所有细菌活动受阻碍的方式保存。例如，在使用样品之前，可以在24小时内保存到2-8 c，但长期使用需要冻结。ph值溶解或稀释试样用lal试剂水。由于lal细菌内毒素反应依赖于ph，所以样本的ph为6-8，确保了良好的线性。 因此，根据需要，建议使用氢氧化纳金属钍(0.1 n，溶解于lal试剂水)或盐酸(0.1 n，lal试剂水稀释)

2、调整ph。i .试剂的制备，鲎试剂溶解物(lal )在冷冻干燥分解液中加入1.7 ml lal试剂水。 每个配置轻轻转动30秒钟，避免起泡。 如果再生分解液储存在-20 c中，则可以保持稳定的1周，不推荐储存在tonger中。避免反复冻融。第2页toxinsensor继续显色lal细菌内毒素检测工具包显色基质在重建基板上使lal试剂的水浓度为1.7ml2mm。 重建后，基质溶液保存在2-8 c中，可保持1个月的稳定状态。 防止基质溶液长时间直接接触光。中止液重组色稳定剂#1(终止液)用的缓冲液为10毫升。 重组中止液如果保存在2-8 c中，可以保持1周的稳定状态。重组颜色稳定剂#2和#3 :分

3、别添加了10 ml lal水。 每种重组液以2-8 c稳定一周。标准细菌内毒素的溶液本套件提供的冷冻干燥细菌内毒素标准量请参考细菌内毒素参比溶液瓶的标签条。加入2ml的lal试剂水，溶解冻干的细菌内毒素。旋涡充分搅拌15分钟得到细菌内毒素储存液。 重组后的细菌内毒素贮藏液如果贮藏在2-8 c中，可以保持稳定的一周不要冻结细菌内毒素储存液。第三页 制备试剂，继续制备1 eu/ml细菌内毒素溶液，稀释标准系列。在各实验中，准备了生成的标准曲线，复盖至少需要4个霸权的浓度范围的细菌内毒素标准溶液。 即，如果试验样品的细菌内毒素浓度在0.01-01 eu/ml的范围内，则系列细菌内毒素标准溶液分别为0

4、.1、0.05、0.025、0.01 eu/ml。下图概述了样品系列细菌内毒素标准溶液的制备。 每种溶液必须在30秒内完全涡流混合。0.3毫升0.2毫升1试剂b8b0. 1欧/毫升0力5欧/毫升0.025欧/毫升0.01欧/毫升细菌内毒素浓度3。 测试步骤1。 小心地将100pl标准品、样品和lal水分配给没有不同细菌内毒素的viais，并将其标记为标准1、2、3、4、样品1.2等空白组。 样品在旋涡混料器下完全混合了30秒。 避免起泡第四页三。 测试程序，继续二。 将100 pl重组lal追加到各瓶中。 用大头针复盖qsntly wals和tnix wsli。3 .样品的细菌内毒素浓度范围为

5、0.01-0.1 eu/ml时，水浴或加热关闭至t1，在37 c 1c下孵育架上的所有瓶子。 如果是细菌内毒素浓度范围内的0.1-1eu/ml，则用水浴或加热封闭至t2，用37 c1 c进行孵化。注： t1的范围为40分钟到60分钟，t2的范围为8分钟到16分钟。 t1和t2的最佳值请参照瓶子的标签条。4 .经过适当孵化，将100 pt重组基质显色液添加到各玻璃瓶中。 用旋涡轻轻搅拌。 不要摇动涡流，不要使涡流逆转，为了不起泡，用37 c1 c水浴和加热封闭，孵育6分钟。每瓶添加500 pl的重组中止液(颜色稳定剂#1)，轻轻地用涡旋搅拌使之均匀。 不要摇摆或翻转旋涡，以免起泡。 接着，添加5

6、00 pl的颜色稳定剂#2，均匀混合每个瓶子。 最后，向各玻璃瓶中添加500 pl重组色稳定剂#3。 每个小瓶子静静地搅拌漩涡使之均匀3秒。 避免起泡。6 .阅读的每个反应的545纳米的吸光率。 以蒸馏水为空白对照，将光度计调节为零吸光率第五页1连接协议，继续计量检验连接协议，继续toxinsensor显色lal细菌内毒素检测套件，继续整个检测过程下表概述：标准样品标准样品(毫升) 0.1 (毫升) lal试剂水(毫升) lal (毫升) 0.1 0.1混合打标机与孵化为37 c 1.0 c t1或t2 t1或t2基板溶解热(毫升) 0.1 0.1混合打标机与孵化为37 c 1.10.5色稳定

7、剂#3(毫升) 0.5 0.5空白对照0.10.1t1ort20.160.50.5混合打标机和吸光率545 nm ；四。 浓度计算：标准条件下545 nm下的吸光率与浓度呈线性关系，在0.01-0.1 eu/ml和0.1-1eu/ml两个范围内。 标绘x轴上的4个基准和y轴上对应的细菌内毒素浓度的吸光率点。 绘制这些个点之间的最佳拟合直线和图形以计算样本的细菌内毒素浓度。在本例中，使用了样品的吸光率为545nm的吸光率lal试剂水(空白对照) 第六页当样本的平均吸光率为x时，样本的细菌内毒素浓度为0.2618x - 0.0012 eu/mt全部孵化进行了45分钟。 以上的附图是例示曲线，标准的

8、od值根据检测方法而不同。注意：稀释标准和孵化温度是可能影响吸收值的重要因素，确保细菌内毒素溶解于一盏茶的标准至关重要，孵化温度必须严格保持在37 c1c。5 .性能特性的线性为了测定细菌内毒素值浓度范围内的定标曲线，必须验证线性度。 至少4个细菌内毒素标准品，必须和一个空白组一起检查，用一个公式检查两个。 标准个体的平均吸光率绝对值系数(r )应该与他们对应的细菌内毒素浓度的基准相关，第七页废品的原因检查试剂盒，发生废品的原因复制样本必须用于建立良好的技术和低变异系数。 离散系数(c.v.)等于100倍的数据的定径套标准离差除以平均值的标准离差，以百分比表示。 c.v .吸光率应小于10%。6 .故障排除“可能是原因。没有直线性细菌内毒素标准品没有混合在一盏茶中。细菌内毒素有可能附着在玻璃的表面。 我们提议用2mllall试剂水溶解冻干的细菌内毒素标准品，如议定书中记载(步骤1的“测试步骤”)和用涡卷混料器将标准细菌内毒素稀释物混合