微生物-HXP1.ppt

1、大肠菌群生长曲线测定、大肠菌群(介绍)为革兰阴性短杆菌，大小0.5*1-3微米。 全身鞭毛可以运动，没有芽胞。 使多种糖类发酵产生酸、瓦斯气体，使人和动物产生提倡中的正常的生息菌，婴儿出生后随着哺乳进入肠道，伴随人的一生，其代谢活动抑制肠道内分解蛋白质的微生物的生长，减少蛋白质分解产物对人体的危害，减少维生素b、k和杀菌作用的大肠菌群群数常被用作饮用水和实物的卫生学标准。 由主要特征1、细菌、原核生物肽聚葡萄糖组成的细胞贴壁仅含有核糖体简单的细胞，细胞核中无假核的细胞质中质粒可作为基因工程的转运运载体。 2代谢型：异养兼性厌氧型。 3与人体的关系：正常情况下，被认为是互利共生(高中)的致病性被

2、认为是寄生现象。 4培养基加入伊红美蓝，菌落呈深紫色，有金属光泽，鉴别是否存在杆菌。 5 .目前杆菌是应用最广泛、最成功的表达系统，一直是高效表达的首选系统。 在生态系统中的地位，如果住在大肠内就属于消费者，如果住在体外就属于分解者。 7染色体组DNA是拟核中的环状分子。 云同步可以将多个环状质粒DNA、生长周期、细菌接种均匀的液体培养基，在生长过程中，具有以下生长周期： 1 .延迟(数量维持不变或减少增加)2.对数生长期(最大速度增长和分裂，细菌计数对数增加)3.稳定生长期(细菌计数最高维持稳定)4.衰退期(细菌死亡速度增加，活细菌减少)，细菌生长大部分细菌繁殖速度快，在适当条件下，某一时期

3、的大肠菌群细胞球为20min 将一定量的细菌转移到新鲜的液体培养基中，以菌数的对数为纵轴，生长时间为横轴，制成的曲线称为生长曲线。 在合适的条件下培养细胞球必须经历4个阶段：延迟、指数期、稳定期和衰退期。生长曲线、实验目的、1 .了解细菌的生长曲线特征和测定原理2 .通过细菌计数测定了解大肠菌群的生物特征和规律，画画3 .学习光电比浊法测得的细菌生长曲线。 目标和要求，1 .用分光光度校正测定光密度值2用培养不同浓度菌液的3恒温摇床培养细菌4测定的光密度值描绘大肠菌群的生长曲线。 根据实验原理、细菌不同，同一培养条件的生长曲线不同，同一细菌用不同培养条件描绘的生长曲线也不同。 本实验采用分光光

4、度校正法进行光电比浊，测定不同培养时间细菌混悬剂的OD值，绘制生长曲线。 工作过程，5 .结果处理，3 .接种，1 .准备，灭菌，4 .接受培养，指令，6 .报告结果，制定修订，实施操作，7 .做评估质量。 操作步骤，接种培养分别用无菌吸管10ml吸取5ml大肠菌群的一晚培养液(培养1012h )，装入装有100ml营养肉汤的三角瓶中，接种后轻轻摇匀，混合菌体。 将9组三角瓶放在摇床上，振动培养37，220 r/min。 在留有有会儿间隔后(即0、2、4、6、8、10、12、14、16、18h )，从摇床中取出1根培养物(标识牌时间)，放置4个冰箱进行培养。 分光光度校正比浊测定是每组取10根

5、干净的试管，从不同时间的培养菌液中各分离3ml，适当稀释大肠菌群培养液，在不接种的空白对照组培养基调零点，使光密度在0.1-0.65之间，550nm或600nm波长、1cm比测定从最稀薄浓度的菌混悬剂开始，依次测定。 稀释后测得的OD值乘以稀释倍数是培养的实际OD值，是一个注意事项，1 .选择试管时选择质量相同、内外直径一致、管壁厚均匀的试管。 在彩色调谐包围曝光上用分光光度修正的修正数值法选择比较正确。 2 .生长曲线测定用空白对照对照相培养液校正光度校正零点。 3 .在测定od值前，培养液振动，细胞球均匀分布。 之后，将比色杯的菌液倒入容器中，用水冲洗，将水收集到容器中灭菌，用75%酒精冲

6、洗比色杯。 4 .测量OD值时，要求从低浓度到高浓度5 .严格控制培养时间，将实验报告：测量的OD600值记入下表，描绘生长曲线，以光密度(OD值)为纵轴，以生长时间为横轴，制作大肠菌群的生长曲线。 说明大肠菌群的成长特性。 (1)为什么用比浊法测定的细菌生长只表示细菌的相对生长状况，有什么优点？ (2)光电比浊校正中测量的OD值应该如何选择其波长？ 为什么把未接种的牛肉糊蛋白胨液作为空白对照，(3)生长曲线是什么？ 单细胞球微生物的典型生长曲线分为几期？ 其区分的依据是什么？(4)用活菌订正数法制作生长曲线，你认为有什么区别？两者各有什么缺点，细菌细胞球密度(OD 600 )，实验室确定细菌

7、的生长密度和生长期，多根据经验和目测来推断细菌的生长密度。 遇到要求高的实验，需要用分光光度修正正确测定细菌细胞球密度。 OD600是跟踪液体培养物中微生物生长的标准方法。 将没有添加菌液的培养液作为空白对照液，然后对培养后的含菌培养液进行定量。 为了保证正确的操作，需要用显微镜对每个微生物和机器进行细胞球修正数，制作定标曲线。 实验中菌液的OD值出现负值，是因为用显色的培养基即细菌进行有会儿培养后，与培养基反应，引起变色反应。 另外，试验的样品不能进行离心分离，需要留心保持细菌的悬浮状态。 使用方法，1 .打开电源，打开仪器开关，打开样品室暗箱盖，预热10分钟。 2 .将灵敏度开关设为“1”

8、范围(零调节器不为“0”时，需要高电平。 3 .根据必要的波长转动波长选择按钮。 4 .将空白对照液和测定液分别放入彩色杯的3/4处，擦拭外壁，放入样品室内，使空白对照管与光路对准。 5 .在罩盖打开的状态下，调节零点调整器，使引导人的指针指向t=0。 6 .把暗盒盖上，调节“100”调节器，使空白管的t=100，指针稳定后，分阶段拉出样品滑杆，分别读取、记录测定管的光密度值。 7 .比色完成后，切断电源，取出比色盘清洗，样品室用软布或软纸擦拭。 注意事项，1该设备应放在干燥的房间，使用时放在坚固平稳的桌子上，室内照明不要太强。 大热天无法用扇风机直接对机器吹风，无法防止灯丝状体的光变得不稳定。 在使用2个装置之前，使用者首先必须要理解本装置的构