微生物-金黄色葡萄球菌

1、闽北职业技术学院食品与生物工程系，1。生物学特性、细菌形态和培养特性。革兰氏阳性球菌，直径0.5-1.0微米，是单个、成对、四重或不规则的簇，如葡萄球菌，所以它们被称为葡萄球菌。在闽北职业技术学院食品与生物工程系，大多数菌株产生类胡萝卜素，使细胞团呈现暗橙色至淡黄色。色素的产生取决于生长条件，所以它被称为金黄色葡萄球菌。闽北职业技术学院食品与生物工程系，大多数菌株的最适生长温度为30-37，最适酸碱度为7.0-7.5；兼性厌氧菌在有氧条件下生长最好；它能在15%氯化钠和40%胆汁中生长。通常，含有10%氯化钠的胰蛋白胨大豆肉汤用于富集，或者7.5%氯化钠肉汤用于富集。闽北职业技术学院食品与生物

2、工程系，所有菌株都产生血浆凝固酶，来自人和动物的菌株通常能凝固兔、人、马和猪的血浆。金黄色葡萄球菌产生磷脂酶、蛋白酶、脂肪酶和溶菌酶等。大多数菌株能够水解天然动物蛋白并释放脂肪酸。磷脂环在英国石油公司的平板上生产。闽北职业技术学院食品与生物工程系，生物学特性为致病性，金黄色葡萄球菌为条件致病菌，菌株的毒力主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶：a .溶血素：外毒素，可破坏血小板，破坏溶酶体，引起机体缺血坏死；溶血环出现在血平板培养中。b .杀死白细胞：它能杀死人类白细胞和巨噬细胞；血浆凝固酶：当金黄色葡萄球菌侵入人体时，这种酶使血液或血浆中的纤维蛋白沉积在细菌表面或凝固，从而阻碍吞噬细胞的吞噬作用。

3、d .脱氧核糖核酸酶(dnase) e .肠毒素：引起急性胃肠炎。闽北职业技术学院食品与生物工程系，金黄色葡萄球菌是人类化脓性感染中最常见的病原体，临床表现多样，可引起局部化脓性感染、肺炎、心包炎，甚至全身性感染如败血症和脓毒血症。葡萄球菌食物中毒是一种由葡萄球菌肠毒素引起的疾病，可引起不同程度的急性胃肠炎症状。恶心和呕吐最为突出和常见，其次是腹痛和腹泻。当金黄色葡萄球菌污染含有淀粉和水的食物时，如牛奶和奶制品、肉、蛋等。在合适的温度条件下，在8-10小时内可以获得大量的肠毒素。闽北职业技术学院食品与生物工程系。检验程序和操作方法，根据中华人民共和国和中国国家标准食品卫生微生物检验GB 478

4、9.10-94，闽北职业技术学院食品与生物工程系金黄色葡萄球菌检验，25g(ml) 225ml无菌生理盐水，国家标准金黄色葡萄球菌检验程序，直接计数法，富集培养法，贝尔德-帕克0.3ml，0.3ml，0.4ml，75%氯化钠肉汤或胰蛋白胨大豆肉汤，血盘，血盘，贝尔德-法361 24小时，闽北职业技术学院食品与生物工程系，富集培养的试验程序，利用金黄色葡萄球菌的耐盐特性(可耐受15%氯化钠)，用含有10%氯化钠的胰蛋白胨大豆肉汤或7.5%氯化钠肉汤进行富集。 把它放在37的培养箱里24小时。闽北职业技术学院食品与生物工程系，检验程序分离与培养，血片：金黄色葡萄球菌能产生溶血素，因此在血片上产生明

5、显的溶血环。典型菌落：金黄色，有时白色，大而突起，圆形，不透明，表面光滑，有溶血环。闽北职业技术学院食品与生物工程系，大型，突起，圆形，不透明，带溶血环，闽北职业技术学院食品与生物工程系，血平板制作，配料：大豆粉琼脂(或营养琼脂)100毫升，脱纤维羊血(或兔血)5-10毫升。制备方法：将琼脂加热融化，冷却至50，在无菌操作中加入脱纤维的羊血或兔血，摇匀，倒入盘中。或者将灭菌的试管包装起来，放在一个斜面上。闽北职业技术学院食品与生物工程系，英国石油公司(贝尔德-帕克)板：胰蛋白胨、牛肉膏和酵母膏提供碳源、氮源、硫、维生素和矿物质元素。丙酮酸钠是一种生长促进剂，对除金黄色葡萄球菌外的其他能分解蛋黄

6、的菌株有毒性，使菌落产生黑色蛋黄提供营养，并有助于观察卵磷脂环甘氨酸和氯化锂对除金黄色葡萄球菌外的其他菌株的抑制作用。闽北职业技术学院食品与生物工程系BP平板上的典型菌落为灰色至暗玉色，圆形，光滑突起，湿润，直径2-3毫米，边缘常为淡(米色或灰色)，周围有一个浑浊带，外缘常有一个透明圈。用接种针接触菌落似乎有一种黄油口香糖的粘性。从长期储存的冷冻或干燥食品中分离出的菌落通常比典型的菌落颜色浅，并且可能具有粗糙的外观和干燥的质地。闽北职业技术学院食品与生物工程系，食品与生物工程系，B-P板，革兰氏阳性，球形，葡萄状，革兰氏染色镜检，检验程序鉴定，食品与生物工程系，检验程序鉴定，凝固酶试验，金黄色

7、葡萄球菌能产生血浆凝固酶，所以对其鉴定的主要试验是确定其凝固酶。方法一：取1:4新鲜兔血浆0.5毫升，放入试管，然后加入0.5毫升培养24小时的金球葡萄肉汤培养物，摇匀，放入361培养箱或水浴中，每隔半小时观察6小时。如果凝结，如果试管倾斜或倒置，将被视为阳性结果。闽北职业技术学院食品与生物工程系，试管法，闽北职业技术学院食品与生物工程系，阳性反应，阴性反应，不凝，少而散凝，明显块凝，巨大块凝，完全凝，倒置不流动，闽北职业技术学院食品与生物工程系，带凝块，血浆，均匀混浊，生理盐水，方法2:玻片用接种环取待测培养物并混合(与阳性和阴性对照)制成细菌悬液。如果在1020秒内没有发生自凝，加入一圈新

8、鲜的人或兔血浆(不稀释)，将其与细菌悬液混合，并观察结果。闽北职业技术学院食品与生物工程系，兔血浆制备组分：柠檬酸钠0.106 mol/L (31.3g Na3C6H5O72H2O溶于1L蒸馏水中)制备方法：一份加入9份兔血，然后以2000rpm离心，10分钟后吸取上清液，得到兔血浆。闽北职业技术学院食品与生物工程系，葡萄糖肉膏肉汤制备，配料：牛肉糜500克，氯化钠5克，蛋白胨10克，磷酸氢二钾2克，葡萄糖10克，蒸馏水1000毫升，pH7.47.6加入蛋白胨、葡萄糖、氯化钠和磷酸盐，溶解，调节酸碱度，煮沸，过滤，分装，高压灭菌12130分钟。，闽北职业技术学院食品与生物工程系，25克样品，2

9、25毫升生理盐水，5毫升样品匀浆(1:10)，50毫升胰蛋白胨大豆肉汤，血平板，361 24小时，显微镜检查和肉提取物肉汤培养，血浆凝固酶试验，报告结果，定性检测，361 24小时，361 24小时，361 64小时，闽北职业技术学院食品与生物工程系BP平板，25g样品，225ml生理盐水，选择三个连续梯度，每个梯度接种表面干燥的1mL BP平板(如0.4mL、0.3mL、0.3mL)，平板计数(分别记录每种类型的菌落数)为36148小时。血浆凝固酶试验，报告金黄色葡萄球菌数/克(毫升)结果，定量检测(平板法)，每种类型选择一个菌落，361 24hr，361 6hr，适用于食品检测金黄色葡萄球菌数不低于10个/克(毫升)的计算方法：(在三个平板中加入疑似金黄色葡萄球菌黑色菌落数)血浆凝固酶阳性数5倍稀释，梯度科食品与生物工程，闽北职业技术学院，第一天设备准备，样品处理， 富集培养和BP平板分离接种，闽北职业技术学院食品与生物工程系，第二天接种，